Способ определения иммунологической блокады лимфоцитов Советский патент 1990 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии, предназначено для изучения иммунного статуса человека.

Цель изобретения - повышение точности определения в крови количества иммунокомпетентных клеток, несущих Fc-jf-рецептор.

Поставленная цель достигается тем, что определение количества Fc J -клеток проводят не только со свежевьще- ленными лимфоцитами (при 4°С), но и с лимфоцитами, предварительно инкубированными при 37°С в течение 1 ч; увеличение показателя во второй группе по сравнению с контрольной первой группой означает наличие иммунологической блокады рецепторов лимфоцитов в исходном состоянии.

Способ осуществляется следующим . образом.

Из 10-20 мл венозной крови с антикоагулянтом выделяют лимфоциты по общепринятой методике. Концентрацию в забуференном физиологическом растворе (3 ФР) отмытых 3 раза лимфоцитов доводят до 5-7 млн клеток/мл.

По капле (0,1-0,2 мл) этой суспензии наносят на четыре покровных стекла, покрытых полимерной пленкой Лормвар,, Стекла помещают во влажную камеру. Первые два стекла инкубируют при 4°С 5-15 мин, чтобы клетки прикрепились, отмывают 2 раза в ЗФР с рН 7,2. Первое стекло (контроль, 4°С) окрашивают по известной методике меченными ФИТЦ антителами против IgG человека и готовят препарат для микро

скопирования. На второе наносят 0,1- 0,2 мл раствора агрегированного IgG (arpIgG) концентрацией 150-250 мкг/мл в ЗФР. ArpIgG готовят по известной методике нагреванием при 63° С и используют фракцию с константой седиментации 19S, Второе стекло с нанесенным агрегатом инкубируют в влажной камере при 4°С в течение 60 мин, ОТМЫ вают тщательно в ЗФР и окрашивают, как первое стекло.

Третье и четвертое стекла с нанесенными каплями суспензии инкубируют при 37°С 60 мин, тщательно отмывают ЗФР. Третье стекло сразу окрашивают, как первое (контроль, 37 С), а на четвертое наносят arpIgG и далее поступают, как с вторым стеклом. Полученные четыре препарата оценивают на люминесцентном микроскопе, определяя относительное количество светящихся лимфоцитов (СЛ). В каждом препарате просчитывают не менее 3 раз по 100 клеток и вычисляют среднее значение (% СЛ).

Результаты, полученные предлагав-- мым способом, на лифоцитах здоровых и больных людей представлены в таблице о Способ поясняется примерамив ,

Пример 1. Больная Л., поступила в клинику в связи с возникновением брон- хоспазма. У больной повышенное количество клеток, несущих Fc-p (45%), но все они были заблокированы, т4е. не выполняли свою функцию

Пример 2. Больная П., поступила в клинику с обострением инфек- ционно-зависимой бронхиальной астмы тяжелого течения, гормонезависимой. У больной высокое количество клеток, несущих Fc-p, но они также заблокированы.

0

0

5

5

0

Пример 3. Больная Ц. Наблюдалась амбулаторно по поводу субфебрилитета. Количество клеток несущих Fc-p, нормальное, рецепторы функционально активны0

Пример 4. Больная Ч. Обследована через год после успешного лечения инфекционно-аллергической бронхиальной астмы. Количество клеток, несущих Fc-p, нормальное, все они функционально активны„

Результаты, полученные на лимфоцитах здоровых людей, показали,что у здоровых лиц количество клеток, несущих Fc-p, сильно варьирует, но сами рецепторы находятся в активном состоянии

У тяжелых больных в состоянии обострения Fc-p активно экспрессиру- ются, но находятся в состоянии дисфункции. Для клинической практики важно контролировать формирование функционального дефицита. Предлагаемый метод позволяет выявлять функциональный дефицит Fc-p при отсутствии истинного дефицитао

Формула изобретения

Способ определения иммунологической блокады лимфоцитов путем определения в крови количества клеток, несущих Fc-jf-рецепторы, с помощью аг- грегирОванного иммуноглобулина G, отличающийся тем, что, с целью повышения точности, параллельную пробу лимфоцитов перед определением дополнительно инкубируют при 37 С в течение 60 мин и при увеличении количества лимфоцитов, несущих Fc-J-рецепторы, по сравнению с контролем без инкубации определяют наличие иммунологической блокады

Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии, и предназначено для определения иммунологического статуса человека. Цель изобретения - повышение точности определения в крови количества иммунокомпетентных клеток, несущих FC - γ=рецептор. Клетки крови подвергаются процедуре деблокирования рецепторов в процессе инкубации при 37°С в течение 60 мин, а определение клеток, присоединяющих агрегированный иммуноглобулин G, осуществляется как до, так и после процедуры. Последующее сопоставление этих данных позволяет делать вывод о наличии блокирующих сывороточных факторов и, следовательно, выводы либо о дефиците рецепторов, либо об их блокаде. Способ целесообразно использовать как при клиническом, так и при поликлиническом обследовании больных.

25,0+1,7 25,3±1,9 ,05

6,0+1,6 51,0+2,9 р.0,001

45

О 2,3±1,0 15,1+1,4

.001

12,8 8,9+1,9 25,0±1,7

,001

16,1

Примечание. 1. р - достоверность различия показателей в контроле и после добавления . 2. Показатели даны в виде Xq ±б.

20 2,0±0 16,0+1,6

,001

14 8,7+1,6 24,3+2,2

,П01

16,1