Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при определении биологической активности микроорганизмов.
Для осуществления способа в качестве тест-культуры используют штамм Corynebacteriura xerosis 4060, который депонирован под номером ГИСК № 181 и характеризуется следующими признаками.
Культурально-морфологические признаки.
Величина клеток суточной культуры на обычном мясопептонном агаре 1,5- 2,,3-0,5 мк. Грамположительны, располагаются при росте частоколом и под углом друг к другу. Тело палочки окрашивается неравномерно, по концам располагаются круглые зерна, окрашиваемые более интенсивно. Хорошо растет без добавления сыворотки на простых питательных средах. На мясопептонном бульоне растет в виде равномерной взвеси. На мясопептонном агаре образует гладкие ровные колонии диаметром 1 мм.
Физиолого-биохимические признаки.
Развивается как в аэробных, так и в анаэробных условиях, оптимум роста 22-37°С„
Расщепляют сахарозу, мальтозу, левулезу, глюкозу, галактозу, декстран, мочевину, не ферментирует крахмал, гликоген.
На кровяном агаре зоны гемолиза не образует.
Чувствителен к эритромицину, тетрациклину, пенициллину.
Чувствителен к препарату человеческого лейкоцитарного интерферона: МПК-1/512, МБК-1/64 разведения препарата человеческого лейкоцитарного интерферона. /
СП
о
4ъ СО
315641
Способ осуществляют следующим образом.
К $,5%-ному питательному агару добавляют препарат человеческого лейкоцитарного интерферона в разведении 1/60-1/40 и разливают в чашки Петри После застывания среды и ее подсушивания на поверхность наносят петлей
в виде отдельных пятачков суточную
агаровую культуру исследуемых штаммов. Чашки инкубируют сутки при 37°С, после чего выросшие колонии бактерий убивают парами хлороформа в течение 20-25 мин, а затем на пятачки куль-jr тур разливают слой питательного агара (3-4 мл) с 0,2 мл 1 млн. взвеси суточной агаровой культуры Corynebacte- rium xerosis, 4060. Затем повторно инкубируют чашки 24 ч при 37°С. 20
Учет опыта проводится по наличию роста С. xerosis. Тест-культура вырастает вокруг колоний тех штаммов, которые нейтрализовали внесенный в питательную среду человеческий лейкоцитар-25 ный интерферон
Способ иллюстрируется следующими примерами.
Пример 1. Оценивают вирулентность изогенных вариантов бактерий ,n шигелл Флекснера с наличием и отсутствием антиинтерфероновой активности. С этой целью инбредных мышей заражают внутрибрюшинно в дозе 5-Ч07 исследуемых бактерий на мышь. В результате
35
35
в опыте со штаммом, у которого определяется антиинтерфероновая активность, из десяти мышей погибает на третьи сутки 5 мышей, на пятые сутки - еще 4 мыши. Летальность составляет 90%с 4Q В опыте со штаммом, у которого антиинтерфероновая активность не определяется, погибает I мышь на пятые сутки эксперимента. Летальность составляет 10%.45
Таким образом, наличие антиинтерфероновой активности у бактерий отражает их вирулентные свойства.
П р и м е р 2. На изогенных вариантах шигелл Флекснера с наличием и отсутствием антиинтерфероновой активности определяют персистирующие свойства бактерий
С этой целью инбредных мышей по 25 шт. в каждой группе внутрибрюшинно
50
55
заражают исследуемыми штаммами микроорганизмов в дозе 5 10 микробных клеток на мышь. Начиная с четвертого дня мышей забивают по 2 шт. из
914
каждой партии через каждые три дня и делают высевы из печени и селезенки на бактоагар Плоскирева с подсчетом выросших колоний.
Результаты опыта показывают, что штамм, обладающий антиинтерфероновой активностью, задерживается в организме мышей в два раза дольше, чем изо- генный вариант этого штамма, не обладающий данным свойством.
ПримерЗ. У пациента И, определена бактериурия 10 тыс. КОЕ (штамм E.coli.). Проведенное исследование на наличие у выделенного штамма антиинтерфероновой активности дало отрицательный результат. Полное клиническое обследование и дальнейшее наблюдение позволили сделать заключение, что пациент здоров.
Наличие бактериурии в данном случае расценено как контаминация мочи транзиторной (непатогенной) микрофлорой без антиинтерфероновой активности.
n
5
Q 5
0
5
П р и м е р 4. Больная К. Бактериурия 10 тыс. КОЕ (возбудитель Е. coli). У возбудителя выявлена антиинтерфероновая активность. На основании клинических признаков и бактериологического исследования поставлен диагноз: латентный пиелонефрит. На четвертый день пребывания в стационаре присоединилась вторичная вирусная инфекция с клиникой острого бронхита, протекавшего длительно, в тяжелой форме. На протяжении всего периода лечения сохранялась стабильная бактериурия: 10-20 тыс.КОЕ (возбудитель Е. coli) с антиинтерфероновой активностью. Возникновение осложнений в данном случае расценено как случай возникшего иммунодефицита на фоне латентного пиелонефрита, вызванного возбудителем с наличием антиинтерфероновой активности.
Таким образом, использование предлагаемого способа позволяет выявить и изучить свойство бактерий, по которому возможно проводить идентификацию патогенных бактерий, оценку вирулентных и персистентных свойств бактерий, возникновение и прогнозирование осложнений вирусной (бактериальной) природы на фоне развившегося иммунодефицитного состояния (по интерферону) макроорганизма.
Формула из
5156419
обретенияСпособ определения антиинтерферо- норой активности микроорганизмов, заключающийся в том, что исследуемую культуру микроорганизмов выращивают на питательной среде в присутствии еловеческого лейкоцитарного интерферона v в разведении 1/60-1/40,
выросшую культуру инактивируют, на посев наслаивают второй слой питательной среды, содержащей взвесь тест- культуры Corynebacterium xerosis ГИСК № 18), посев инкубируют и определяют антиинтерфероновую активность микроорганизмов по наличию роста тест-культуры вокруг колоний испытуемой культуры.
Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при определении биологической активности микроорганизмов. Исследуемую культуру высевают на питательную среду, в которую добавляют лейкоцитарный человеческий интерферон в разведении 1/60-1/40. Посев осуществляют локально по поверхности среды. После инкубирования культуру инактивируют и наслаивают питательную среду, в которой суспендируют тест-культуру CORYNEBACTERIUM XEROSIS ГИСК N181. После повторной инкубации посевов изучают локализацию колоний тест-культуры. Если исследуемая культура обладает антиинтерфероновой активностью, то вокруг колоний вырастают колонии тест-культуры.
