Способ получения иммобилизованного пектофоетидина П10Х Советский патент 1990 года по МПК C12N11/00 

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к способам получения иммобилизованных ферментов, и может быть использовано в пищевой промышленности, в частности для повьше- ния выхода сока ягод и фруктов.

Цель изобретения - повышение ами- лолитической активности целевого продукта.

Способ заключается в адсорбционной иммобилизации пектофоетидина niOX на макросетчатом, слабокислотном катионите КБС, полученном на основе сшитых сополимеров метилметакри- дата и дивинилсульфида. Адсорбцию пектофоетидина проводят из О,1 М фосфатного буфера при рН 5,0±0,1 при концентрации фермента 5-10 мг белка в 1 МП.

В качестве функциональных групп катионит КБС содержит карбоксильные

группы и сульфидную серу. Катионит получают щелочным гидролизом сополимеров метилметакрилата и ДВС.

При адсорбции фермента на предложенном катионите происходит одновременная очистка от балластных веществ. Количество иммобилизованного фермента в расчете на 1 г носителя составляет 750-800,5 мг (54-58 единиц активности) вместо 19,8-23,9 мг (2 - 2,5 единиц активности).

Пример. В колбу вместимостью 100 МП вносят 0,1 г катионита КБС (в пересчете на сухой продукт) и запивают 50 мл водного 0,1 М Лос- фатного буферного раствора (рН 5iO,l) фермента пектофоетидина П10Х с концентрацией 5 мг/мл.Сорбцию проводят 24 ч при в статических условиях при периодическом перемешивании. Затем гранч лы катионита отел

00.

с

СП

35

деляюг от раствора, промывают водой и анализируют. Сорбционная емкость катионита КБС по пектоЛоетидину ПЮХ 753 мг/г, а по прототипу 2А,5 мг/г, Амилолитическая активность иммобилизованного фермента по предлагаемому способу 70,2%, по прототипу 81%.

П р и м е р 2. Сорбцию проводят по методике примера 1 при и

10

концентрации ферментного препарата 7 мг/мл. Сорбционная емкость катионита KRC по пектофоетидину ПЮХ 750 мг/г, а по прототипу 27,4 мг/г. .г Амилолитическая активность иммобилизованного фермента 69%, по прототипу ei%.

Пример 3. В стеклянную колонку высотой 25 МП и диаметром 5 мп загружают 10 г катионита КБС и пропускают раствор фермента пектофоетидина ПЮХ концентрацией Ю .Скорость пропускания раствора фермента 3 ± to, 1 л/ч. Температура раствора фермен-25 та 25 С, рН 510,1. Раствор пропускают до полного насыщения катионита.Сорбционная емкость катионита КБС по пектофоетидину ПЮХ 800,5 мг/г, а по прототипу 30,2 мг/г. Амилолитическая „ активность иммобштизованного фермента по предлагаемому способу 69,8%, по прототипу 79%.

Карбоксильный.катионит КБС имеет высокодоступную для фермента макро- .сетчатую структуру. Присутствие в

структуре катионита сульфидной серы снижает рКа карбоксильных групп до 4-4,5, вместо 8-8,5 для прототипа

ну ПЮХ, в 30-40 раз превышающую Яркость сорбента по прототипу.

По сравнению с известным способом фермент с катионита не элюируется известными элюентами (вода, растворы НС1, NaOH, NaCl, буферные растворы, органические растворители), сохраняет высокую амилолитическую активность (69-71%) и может быть использован многократно в циклах расщепления углеводов. Вследствие макросетча- той структуры полимерного каркаса катионита иммобилизованные молекулы пектофоетидина ПЮХ хорошо доступны для крупных органических молекул, белковых веществ и биологических объек - тов. Иммобилизированный фермент может храниться в дистиллированной воде в течение не менее 5 лет без изменения показателей качества.

Таким образом, использование пред- .лагаемого способа позволяет увеличить амилолитическую активность целевого продукта в 20-25 раз (от 2 - 2,5 до 54-57 единиц активности на 1 г носителя) по сравнению с известным способом.

Формула изоб

Р е т е н и я

Способ получения иммобилизованного пектофоетидина ПЮХ, включающий адсорбцию фермента, растворенного в 0,1 М фосфатном буфере, на синтетическом катионите и промывание целевого продукта водными растворами для отделения несвязавшегося белка, отличающийся тем. что, с

и существующих традиционных карбоксил- целью повышения амиполитической активсодержащих полимерных сорбентов, что позволяет проводить процесс сорбции при рН 540,1, т.е, в области

максимальной, активности фермента

пектофоетидина ПЮХ, что обуславлива- ров метипметакрилата и дивинилсуль ет высокую сорбционную емкость пред-,фида, а пектофоетидин растворяют в

лагаемого сорбента по пектофоетйди-буфере с рН 5,OtO,l.

ности целевого продукта, в качестве синтетического катионита используют макросетчатый, слабокислотный катионит КБС, на основе сшитых сополиме0

г

5 „

ну ПЮХ, в 30-40 раз превышающую Яркость сорбента по прототипу.

По сравнению с известным способом фермент с катионита не элюируется известными элюентами (вода, растворы НС1, NaOH, NaCl, буферные растворы, органические растворители), сохраняет высокую амилолитическую активность (69-71%) и может быть использован многократно в циклах расщепления углеводов. Вследствие макросетча- той структуры полимерного каркаса катионита иммобилизованные молекулы пектофоетидина ПЮХ хорошо доступны для крупных органических молекул, белковых веществ и биологических объек - тов. Иммобилизированный фермент может храниться в дистиллированной воде в течение не менее 5 лет без изменения показателей качества.

Таким образом, использование пред- .лагаемого способа позволяет увеличить амилолитическую активность целевого продукта в 20-25 раз (от 2 - 2,5 до 54-57 единиц активности на 1 г носителя) по сравнению с известным способом.

Формула изоб

Р е т е н и я

Способ получения иммобилизованного пектофоетидина ПЮХ, включающий адсорбцию фермента, растворенного в 0,1 М фосфатном буфере, на синтетическом катионите и промывание целевого продукта водными растворами для отделения несвязавшегося белка, отличающийся тем. что, с

ности целевого продукта, в качестве синтетического катионита используют макросетчатый, слабокислотный катионит КБС, на основе сшитых сополиме

Изобретение относится к биотехнологии, в частности способам получения иммобилизованных ферментов, и может быть использовано в пищевой промышленности. Целью изобретения является повышение амилолитической активности целевого продукта. Способ заключается в адсорбционной иммобилизации пектофоетидина П10Х (растворенного в 0,1 М фосфатном буфере с рН 5,0±0,1) на макросетчатом, слабокислотном катионите КБС (сшитый сополимер метилметакрилата и дивинилсульфида). Способ позволяет увеличить амилолитическую активность целевого продукта в 20-25 раз.