Способ получения гликозида Советский патент 1990 года по МПК C07H15/24 A61K31/704 

СП

Ф

Изобретение относится к производным антрациклиновых гликозидов, в частности к получению гликозидов ф-лы @ , где R 1 - H /1а/ или гидроксил /1б/, обладающих противоопухолевой активностью. Цель - разработка способа получения более активных соединений. Получение ведут исходя из 3Ъ-амино-3Ъ-эпидаунорубицина, и через соответствующие 3Ъ- эпи-N-салицилиден- и N-салицилиден-3Ъ -эпи-4-0-трифторметансульфонат производные, последнее затем подвергают кислотному гидролизу. Полученный 3Ъ-деамино-4Ъ-деокси-3Ъ-4Ъ-эпи-3Ъ-4Ъ-эпиминодаунарубицин через соответствующее N-трифторацетил производное превращают в 4Ъ-деокси-4Ъ-эпи-N-трифторацетил-3Ъ-деамино-3Ъ-гидроксидауномицин, который после мягкого щелочного гидролиза переводят в целевой продукт 1а, который в свою очередь в случае необходимости через соответствующее 14-бром производное дауномицина переводят в производное доксорубицина 1б. 3 табл.

Изобретение относится к способу получения новых антрациклиновых гликозидов общей формулы

°

н,со

НС1,. (I)

где R, - водород или гидроксильная

группа,

обладающих противоопухолевой активностью.

Пель изобретения -.получение новых производных антрациклиновых гликозидов, обладающих лучшими свойствами, чем родоначальники данного ряда гли- козидов даунорубицин и доксорубицин достигается путем синтеза исходя из З -амино-З -эпидаунорубицина и через соответствующие 3 -эпи-Ы-салицилиден и N-салицилиден-З -эпи-4-О-трифтор- метансульфонат производные, последнее

СП

ом

затем подвергают кислотному гидролизу, полученный: 3 -деамино-4 -деокси- -3 4 -эпи-3 ,4 - эпиминодагунарубищн через соответствующее N-трифтораце- тил, производное превращают в 4 -де- окси-4 -эпи-Н-трифторацетил-З -деами- но -З гидроксидауномицин, которьй после мягкого щелочного гидролиза переводят в целевой продукт 1а,который в Q свою очередь в случае необходгдмости через соответствукйцее 14-бром: 1роизвод- ное дауйомицина переводят в производное доксорубицина 16,

;| Пример 1. 3 -Эпи-Н-салици- 15

Глидендаунорубицин (III).

Раствор 2 г З -амино-З -эпидауно- рубицина (II) в смеси 80 мл воды и 20 мл ацетона обрабатьшают при комПолученный сырой продукт растворяют в 50 мл метанола и добавляют 0,2 г моногидрата п-толуолсульфокислоты. Раствор Б течение 1 ч вьдерживают при комнатной температуре, затем к нему добавляют 100 мл воды и экстрагируют небольшим количеством дихлорметана. Водную фазу доводят до рН 8,0 1 К едким натром и добавляют дихлорметан. Органическую фазу отделяют, промывают водой, сушат над безводньм сульфатом натрия и растворитель выпаривают до малого объема.

Смесь очищают на хроматографичес- кой колонке с силикагелем, поддерживая при рН 7, используя в качестве элюирующего растворителя смесь дихлор метан - этанол. Элюат, содержащий rljl СИДС- i Vrtd .a. i kJlJJ-i ivy 1. i. V - -натной температуре 0,5 мл салицилапь- 2o левой продукт (IV), промывают водой,

... j-k,.л л. - «-г 1Г-гто,-гч«. . ТЛ VT4tJrr Til П.ТТИЧ VTOT .

дегида при рП 8. Через 10 мин добав- ляют этилацетат и отделяют органическую фазу, дважды промывают ее водой, сушат над безводным сульфатом натрия, фильтруют и упаривают досуха под на- 25 куумом.

Остаток сначала растирают с гекса- ном для удаления следов салиидшальде- гида, затем собирают, сушат под вакуумом при 30°С и получают целевой про- д дукт почти с количественным выходом, Rft 0,21 при тонкослойной хроматографии на Кизельгеле F 254 (Кери), ис-. пользуя в качестве элюирующего растворителя смесь метиленхлорида - ацетон 8:2 об,/об.

Пример 2. З -Деамико-4 -де- окси-З -эпи-4 -эпи-3 ,4 -эпи tинoдay- норубицин (IV) (азиридин),

К раствору 2 г 3 -эпи-Ы-салицили- . дендаунорубицина (III) в 20 ьш безвод ного дихлорметана и 2 мл сухого пиридина при добавляют рас1:вор 0,8 мл трифторметансульфоанпздрида в 10 мл дихлорметана. После вьщержки j смеси при в течение 1 ч ее разбавляют дихлорметан ом и пром1|1вают водой, холодной 0,1 М соляной кислотой, холодным водным 5%-ным бикарбонатом натрия и водой, органическую фазу после сушки над безводным сульфатом натрия фильтруют, растворитель отгоняют в вакууме, получая К-салицил:аден-3 - -эпи-4-О-трифторметансульфонат.

50

дихлорметаном и кристаллизуют,

Масс-спектр 509 (м); т.пл. 135 -- .

,38 при тонкослойной хроматографии на Кизельгеле F 254 (Мерк). используя в качестве элюирующего растворителя смесь дихлорметан - метанол - уксусная кислота - вода. (30:4: :1}0,5 об./об.).

Н ЯМР-спектр (200 МГц, в CDCl,): 8,02 (двойной дуплет, J 1,1, 7,7 Гц, Ш, Н-1); 7,76 (двойной дуплет, J ,7 7, 7 Гц, 1Н, Н-2); 7,37 (двойной , J 1,1, 7,7 Гц, 1И, Н-3); 5,31 (двойной дуплет, J 3,0, 4,8 Гц, 1Н, Н-1 ); 5,17 (двойной дуплет, J 2,0, 3,6 Гц, 1Н, Н-7); 4,32 (двойной дуплет, J 1, 6,7 Гц, 1Н, Н-5); 4,07 (синглет, ЗН, ОСНз-4); 3,17 (двойной дуплет, J 19,2 Гц, 1Н, Н-10е); 2,95 (дуплет, J 19,2 Гц, 1Н, Н-Юах); 2,46 (тройной дуплет, J 2,0, 2,0, 15,0 Гц, 1Н, Н-8е); 2,43 (синглет, ЗН СОСНз); 2,30 (тройной дуплет, J 1,5 4,37 6,4 Гц, 1Н, Н-3); 1,9-2,0 (муль- тиштет, 2Н, Н-8ах, Н-2ах); 1,87 (тройной дуплет, J 1,57 3,0, 14,6 Гц, 1Н Н2 е); 1,44 (дуплет, J 6,7 Гц, ЗН, CHj-5 ) .I

Пример 3. 3 -Деамино-4 -де- окси-3 , -окси-4 -эпи-4 -аминодауноруби- цин гидрохлорид (la).

1 г азиридина переводят в N-три- фторадетильное производное (V) обраRp 0,50 цри тонкослойной хромато- боткой 1,2 мл ангидрида трифторуксус- ,Ат,„ UO к-1 оопт-т-опо чт 7Si CMpTtK i. ис- ной кислоты В безводном дихлорметане.

После обработки сырой продукт (R

графии на Кизельгеле F 254 (Мерк), используя в качестве элюирукщего растворителя смесь дихлорметана н ацетона в соотношение 95:5 об,/об.

f

0,7 при использовании тонкослойной хроматографии на Кизельгеле F 254

Полученный сырой продукт растворяют в 50 мл метанола и добавляют 0,2 г моногидрата п-толуолсульфокислоты. Раствор Б течение 1 ч вьдерживают при комнатной температуре, затем к нему добавляют 100 мл воды и экстрагируют небольшим количеством дихлорметана. Водную фазу доводят до рН 8,0 1 К едким натром и добавляют дихлорметан. Органическую фазу отделяют, промывают водой, сушат над безводньм сульфатом натрия и растворитель выпаривают до малого объема.

Смесь очищают на хроматографичес- кой колонке с силикагелем, поддерживая при рН 7, используя в качестве элюирующего растворителя смесь дихлор метан - этанол. Элюат, содержащий це- -левой продукт (IV), промывают водой,

«-г 1Г-гто,-гч«. . ТЛ VT4tJrr Til П.ТТИЧ VTOT .

j

0

дихлорметаном и кристаллизуют,

Масс-спектр 509 (м); т.пл. 135 -- .

,38 при тонкослойной хроматографии на Кизельгеле F 254 (Мерк). используя в качестве элюирующего растворителя смесь дихлорметан - метанол - уксусная кислота - вода. (30:4: :1}0,5 об./об.).

Н ЯМР-спектр (200 МГц, в CDCl,): 8,02 (двойной дуплет, J 1,1, 7,7 Гц, Ш, Н-1); 7,76 (двойной дуплет, J ,7 7, 7 Гц, 1Н, Н-2); 7,37 (двойной , J 1,1, 7,7 Гц, 1И, Н-3); 5,31 (двойной дуплет, J 3,0, 4,8 Гц, 1Н, Н-1 ); 5,17 (двойной дуплет, J 2,0, 3,6 Гц, 1Н, Н-7); 4,32 (двойной дуплет, J 1, 6,7 Гц, 1Н, Н-5); 4,07 (синглет, ЗН, ОСНз-4); 3,17 (двойной дуплет, J 19,2 Гц, 1Н, Н-10е); 2,95 (дуплет, J 19,2 Гц, 1Н, Н-Юах); 2,46 (тройной дуплет, J 2,0, 2,0, 15,0 Гц, 1Н, Н-8е); 2,43 (синглет, ЗН СОСНз); 2,30 (тройной дуплет, J 1,5, 4,37 6,4 Гц, 1Н, Н-3); 1,9-2,0 (муль- тиштет, 2Н, Н-8ах, Н-2ах); 1,87 (тройной дуплет, J 1,57 3,0, 14,6 Гц, 1Н Н2 е); 1,44 (дуплет, J 6,7 Гц, ЗН, CHj-5 ) .I

Пример 3. 3 -Деамино-4 -де- окси-3 , -окси-4 -эпи-4 -аминодауноруби- цин гидрохлорид (la).

1 г азиридина переводят в N-три- фторадетильное производное (V) обраПосле обработки сырой продукт (R

f

0,7 при использовании тонкослойной хроматографии на Кизельгеле F 254

51590045

(Керк), применяя в качестве элюирукг- Н-2е); 1, 70 (тройной дуплет, J 4,0 щего растворителя смесь дихлорметан - 4,6, 13,2 Гц, 1Н; Нт2ах); 1,31 (дуплет ацетон в соотношении 4:1 об./об.) ра- J 6,3 Гц, ЗН, CHj-S). створяют в 20 мл ацетона и обрабатывают каталитическим количеством серной кислоты при . Смесь разбавляют 200 мл дихлорметана, промывают водой, водным 5%-ным бикарбонатом натПример 4.3 -Деамино-3 -ок- си-4 -деокси-4 -эпи-4 -аминодоксоруби- цин гидрохлорид (16).

0,5 г полученного соединения 1а, растворенного в смеси 7,5 мл безвод10

ного метанола, 21 мл диоксана и 0,5 мл этилфторформиата, подвергают обработке 2,1 мл раствора 0,93 г брома в 10 мл хлороформа. Через 3 ч при смесь выливают в смесь 105 мл этилория и водой. Растворитель отгоняют в вакууме, остаток очищают на колонке с силикагелем, используя дихлорметан в качестве элюирующего растворителя. В результате получают 0,7 г 4 -деокси- -4 -эпи-N-тpифтopaцeтил-3 -деамино-3 - вого эфира и 50 мл петролейного эфи-гидроксидауномицина (VI).ра. Полученный красный осадок после

RI 0,21 при применении тонкослой-фильтрации и промывки этиловым эфиной хроматографии на Кизельгелером растворяют в смеси 15 мл ацетона

F 254 (Керк), используя в качествеи 15 мл 0,25 н.водного бромистого во- злюирующего растворителя смесь дихлор-20 дорода. Спустя 15 ч при комнатной

-метана и ацетона (4:1 об./об.).температуре добавляют 9 мл воды и раПродукт (VI) медленно растворяютствор экстрагируют хлороформом, удав водном 0,1 н.растворе едкого натраляя агликоны.

при ОС, осуществляя гидролиз Н-три-Затем водную фазу экстрагируют

фторацетильной защитной группы. После25 Н-бутанолом до тех пор, пока экстрак1-часовой вьиержки при О®С растворты обесцветятся.

доводят до рН 8,6 децинормальной со-Органические экстракты (я-бутанол)

ляной кислотой и экстрагируют дихлор-выпаривают под вакуумом до небольшометаном. Растворитель выпаривают, по-го объема (около 9 мл) и осазвдают

лучая 0,5 г остатка, который обработ- 0 этиловым эфиром, получал 0,45 г сооткой метанольным хлористым водородом переводят в хлоргидрат целевого продукта (1а).

Масс-спектр ГД 527 (М), т.пл. (с разлож.).

Rf 0,18 на тонкослойной хромато- грамме на Кизельгеле F 254 (Керк), используя в качестве растворителя ди- хпорметан - метанол - уксусная кислота - вода в соотношении 30:4:1: :0,5 об./об.

Н-ЯМР (200 МГц, CDClj): 8,02 (двойной дуплет, J 0,9, 8,5 Гц, 1Н, Н-1); 7,77 (двойной дуплет, J 8,5,

35

40

ветствующего 14-бромпроизводного. Полученное производное растворяют в 9 мл 0,25 н.водном растворе бромистого водорода и обрабатьшают 0,75 г формиата натрия в 8 мл воды.

Реакционную смесь вьщерживают при комнатной температуре при перемешивании в течение 48 ч и затем добавляют 1 н.хлористоводородной кислоты, доводя рН до 4.

Полученную смесь экстрагируют смесью 1:1 этиловый эфир - этилацетат с целью удаления некоторых линофильных загрязнений. Водную фазу, после подповторно экстрагируют хлороформом до тех пор, пока экстракты не обесцветятся.

8,5 Гц, 1Н, Н-2); 7,38 (двойной дуп- д нятия значения рН до 7,6 водной NaHCOj лет, J 0,9, 8,5 Гц, 1Н, Н-3); 5,52. (двойной дуплет, J 1,40 Гц, 1Н, Н-1); 5,28 (двойной дуплет, J 1,8, 4,0 Гц, 1Н, Н-7); 4,07 (синглет, ЗН, OCHj-4); 3,69 (двойной квартет, J 6,3, 9,5 Гц, 1Н, Н-5); 3,51 (тройной дуплет, J 4,8, 9,5, 11,6 Гц, 1Н, Н-3); 3,22 (двойной дуплет, J 1,9, 18,9 Гц, 1Н,

50

Все собранные хлороформные экстракты сушат над Na2 S(, выпаривают до не большого объема (около 45 мл) под вакуумом. Полученный красный раствор до водят до рН 3,5 водным метанольным Н-1Ое); 2,94 (дуплет, J 18,9 Гц, IH,. раствором хлористого водорода и до- Н-10ах); 2,40 (синглет ЗН, COCHj); бавляют в.него избыток этилового эфи- 2,2-2,4 (мультиплет, 1Н, и-8ах); 2,30 ра, получая 0,30 г целевого соедине- (двойной дуплет, J 9,5, 9,5 Гц, 1Н Н-4); 2,0-2,2 (мультиплет, 2Н, Н-8е,

ния (IB). Т.пл. (разл.). СРД-МС 543 (М).

Н-2е); 1, 70 (тройной дуплет, J 4,0 4,6, 13,2 Гц, 1Н; Нт2ах); 1,31 (дуплет J 6,3 Гц, ЗН, CHj-S).

Пример 4.3 -Деамино-3 -ок- си-4 -деокси-4 -эпи-4 -аминодоксоруби- цин гидрохлорид (16).

0,5 г полученного соединения 1а, растворенного в смеси 7,5 мл безвод

ного метанола, 21 мл диоксана и 0,5 мл этилфторформиата, подвергают обработке 2,1 мл раствора 0,93 г брома в 10 мл хлороформа. Через 3 ч при смесь выливают в смесь 105 мл этилового эфира и 50 мл петролейного эфи5

0

ветствующего 14-бромпроизводного. Полученное производное растворяют в 9 мл 0,25 н.водном растворе бромистого водорода и обрабатьшают 0,75 г формиата натрия в 8 мл воды.

Реакционную смесь вьщерживают при комнатной температуре при перемешивании в течение 48 ч и затем добавляют 1 н.хлористоводородной кислоты, доводя рН до 4.

Полученную смесь экстрагируют смесью 1:1 этиловый эфир - этилацетат с целью удаления некоторых линофильных загрязнений. Водную фазу, после подповторно экстрагируют хлороформом до тех пор, пока экстракты не обесцветятся.

нятия значения рН до 7,6 водной NaHCO

Все собранные хлороформные экстракты сушат над Na2 S(, выпаривают до не большого объема (около 45 мл) под вакуумом. Полученный красный раствор до водят до рН 3,5 водным метанольным раствором хлористого водорода и до- бавляют в.него избыток этилового эфи- ра, получая 0,30 г целевого соедине-

ния (IB). Т.пл. (разл.). СРД-МС 543 (М).

тех на Кизельгеле F 254 (Мерк) при использовании элюентной системы ди- хлор этан:метанол:уксусная кислота;вода (30:4:1:0,5 об./об.) показывает R 0,1.

Биологическая активность.

Цитотоксичную активность новых ант- рациклиновых гликозидов определяли ин витро на клетках Hela-клетках шеечной эпителиальной карциономы человека клетки, клетках Р-388 лейкемии, чувствительны к доксорубицину; клетках

Доза, определяющая 50% подавления

контрольными.

Соединения, опыты с которыми прове-25 дены ин виво против Р-388 асцитичес- кой лейкемии и Гросс-лейкемии, показали хорошую противоопухолевую активность по сравнению с даунорубицином, особенно при пероральнюм вьшедении. JQ

Опыты проведены на CDF мьппах, зараженных интраперитониально 10 клетками Р-388 асцитической лейкем1Ш. Результаты приведены в табл. 2.

Таблиц а2

Обработка интраперитониально день спустя после заражения опухолевыми клетками... Среднее время жизни обработанных препаратом ttbmeVi, отнесенное к среднему времени жизни в контрольной группе X 100, 0ценка проведена на оск;ове данных

прижизненной биопсии.г-

Действия против Тросе-лейкемии про ведены на СЗН мышах, инокул1фованных внутривенно 20 х 10 кдетками лейкемии.

P-388/Dx лейкемии, устойчивых к док- сорубиг ину; Lovo-клетках человека аде- нокарциномы толстой кишки, чувствительные к доксорубицину; Lovo/Dx - клетках человека аденокардиономы толстой кишки, устойчивых к действию док сорубицина.

t .

Продолжительность действия соединения 24 ч (в сравнении с дауноруби- цином).

Результаты представлены в табл. 1. Таблица

числа клеток по сравнению с

Результаты приведены в табл. 3. Таблица 3

Лечение внутривенно день спустя после инокуляции, опухоли. Средняя продолжительность жизни мцшей, подвергнутых лечению, к средней продолжительности мышей в контрольной группе.

Оценка на основе данных прижизненной биопсии.

Ф

ормула изобретения

Способ получения гликозида общей формулы

НзСО о

НС1

где R - водород (la) или гидроксил

(16),

отличающийся тем, что 3- -амино-3 -эпидаунорубицин формулы

НзСО О ОН Жг О

растворенный в смеси вода - ацетон 4:1 об,/об, подвергают взаимодействию при комнатной температуре с саливдш- альдегидом с получением соответствующего З -эпи-Ы-салицилиденпроизводно- го (III), которое подвергают взаимодействию с трифторметансульфоновьм ангидридом при в безводном ди- хлорметане и в присутствии сухого пиридина и полученный N-салицилиден-Э - -эпи-4-О-трифторметансульфонат раст-

o

s

0

5

воряют в метаноле и подвергают кислотному гидролизу при комнатной тем- , пера туре в течение ,1 ч п-толуолсуль- фокислотой с получением 3 -деаьшно-4 - -деокси-3 -эпи-4 -эпи-3 , 4 -эпимино-дау- норубицина (IV), который превращают . в соответствующее N-трифторацетил- Производное (V) обработкой трифторук- сусным ангидридом в растворе дихлор.метана, которое в свою очередь подвергают взаимодействию с каталитическим количеством серной кислоты в ацб- тоне при и полученный 4 -деокси -4 -эпи-Н-трифторацетил-З -деамино З -гидроксидауномин (VI) подвергают при в течение 1 ч мягкому щелоч ному гидролизу 0,1 н.водным раствором гидроокиси натрия, получая целевой продукт 1а в виде гидрохпорида обработкой метанольным хлористым водородом в метаноле, который, в случае необходимости, превращают в соответст)ву- ющее 14-бромпроизводное путем обработки водным раствором брома, из которого после гидролиза водным раствором формиата натрия при комнатной температуре получают целевой продукт 16 в виде гидрохлорида,