Способ получения ферментного электрода для определения глюкозы Советский патент 1990 года по МПК G01N27/30 G01N27/42 

Изобретение относится к аналитической Х1ШИИ, а именно к методам ферментативного анализа, основанного на применении ферментных электродов, и может бы.ть использовано при медико-биологических исследоваНЯЯХо

Целью изобретения являются повышение стабильности электрода и упрощение технологии его изготовления.

Поставленная цель достигается тем, что на графитовый стержень наносят графитАерментное покрытие в электрическом поле напряженностью 50, 75 из композиции, содержащей поливиниловый спирт, борную кислоту, желатин, Лермент, rpadsiT и воду при следующем соотношении компонентов,

Mac.%t

сд

со

4 4

Поливиниловый спирт

Борная кислота

Желатин

Фермент

Графит

Вода

0,5-1,0

0,5-1,0

0,1-0,3

0,001-0,005

10-20 Остальное

и закрепляют покрытие нанесением пленки из водного раствора, содержащего 2-5 мас.%, поливинилового

3159

спррта и 0,12-0,15 масс,% глутарово- го альдегида, путем окунания.

Введение в состав покрытия графита позволяет присоединить фермент не Только за счет электростатического Взаимодействия, но и за счет коорди- йационной связи и таким образом, обеспечить повьшение устойчивости иммобилизованного фермента к воздейс- tвию среды в широком интервале рН, к изменению температуры, а также увеличение срока службы покрытия.

Поливиниловый спирт вводится в Состав.с целью увеличения адгезии йокрытия к поверхности подложки и для йовышения стабильности композиции,

Борная кислота необходима для обеспечения постоянной кислотности состатрод с рабочей-поверхностью 0,75 см. Процесс проводится:, в течение 2.мин при напряженности 50 В-см- .

Затем графитовые стержни с графит- ферментным покрытием погружают в водный раствор, содержащий 1,25 г поливинилового, спирта и 0,035 г глута- рового альдегида.

Графитферментное покрытие с защитной пленкой сушат при 4 С в течение 3-4 ч.

Ферментный электрод, изготовленный по предлагаемому способу использован для определения концентрации глюкозыi

Установлено удовлетворительное совпадение результатов анализа с исходными данными по концентрации глю

Изобретение относится к аналитической химии и может быть использовано при медикобиологических исследованиях. Целью изобретения является повышение стабильности электрода и упрощение технологии его изготовления. Для этого на графитовый стержень наносят графитферментное покрытие в электрическом поле напряженностью 50-75 В/см из композиции, включающей следующие компоненты, мас.%: поливиниловый спирт 0,5-1,0

борная кислота 0,5-1,0

желатин 0,1-0,3

фермент 0,001-0,005

графит 10-20

вода - остальное, и закрепляют покрытие нанесением пленки из водного раствора, содержащего 2-5 мас.% поливинилового спирта и 0,12-0,15 мас.% глутарового альдегида, путем окунания. Полученный ферментный электрод стабильно работает в течение 30-35 сут, т.е. более чем в два раза дольше, чем известный, при более упрощенной технологии получения.

30

35

йа, его электропроводности и для спив- д козы. Срок действия электродов соста и поливинилового спирта с целью полу 1ения прочного покрытия,

Желатин способствует стабилизащ

Композиции, а количество фермента

ГЛК|Козооксидазы в покрытии определяет 25

фя необходимостью достижения высокого

уровня его активности.

Режим иммобилизации в электричес

Ком поле, при котором производят оса-

Ждение фермента, позволяет получить

равномерное покрытие с достаточным

количеством энзима и хорошей адге- .8ией к подложке.

Защитная пленка поливинилового

спирта получается просто и достаточно нерастворимой за счет сшивки глуТаровым альдегидом.

Пример. К 12,5 мл раствора,

содержащего 0,125 г поливинилового

спирта, добавляют 7,5 мл раствора,

содержащего 0,075 г желатина, и 5 t-m раствора, содержащего 0,25 г борной

кислоты и тщательно перемепшвают,

Берут навеску графита 2,5 г, помещают

ее в ступку и, добавляя небольшими

порциями приготовленный ранее раствор, перетирают. Растирание производят до полного перемешивания всей

навески графита с раствором. Перед

нанесением покрытия на подложку в

полученную КОМПОЗИ1ЩЮ вводят навеску

фермента 0,0012 г.

Для осаждения покрытия в электрическом поле в качестве вспомогательного электрода используют графитированный цилиндр из полиметнлметакри-

лата, рабочим служит графитовый элекi

40

45

50

вил 30-35 сут в отличие от 10-15 сут по известному способу„

Таким образом, предлагаемъш способ изготовления ферментных электродов по сравнению с известным позволяет повысить стабильность электродов и упростить технологию их изготовления ,

Формула изобретения

Способ получения ферментного электрода для определения глюкозы, вютю- чающнй нанесение токопроводящего слоя и фермента на углеродный носитель, отличающийся тем, что, с целью повышения стабильности электрода и упрощения технологии его изготовления, на графитовый стержень наносят Графитферментное покрытие в электрическом поле с напряженностью 50-75 В из композиции, содержащей поливиниловый спирт, борную кислоту, желатин, фермент, графит и воду при следующем соотношении компонентов, маса%:

Поливиниловый спирт

Борная кислота

Желатин

Фермент

Графит

Вода

и закрепляют покрытие нанесением пленки нз водного раствора, содержащего 2-5 мас,% поливинилового спирта и 0,12-0,15 мас.% глутарового альдегида, путем окунания

0,5-1,0 0,5-1,0 0,1-0,3

одоо1-о,оо5

10-20 Остальное

0

5

5

0

5

0

вил 30-35 сут в отличие от 10-15 сут по известному способу„

Таким образом, предлагаемъш способ изготовления ферментных электродов по сравнению с известным позволяет повысить стабильность электродов и упростить технологию их изготовления ,

Формула изобретения

Способ получения ферментного электрода для определения глюкозы, вютю- чающнй нанесение токопроводящего слоя и фермента на углеродный носитель, отличающийся тем, что, с целью повышения стабильности электрода и упрощения технологии его изготовления, на графитовый стержень наносят Графитферментное покрытие в электрическом поле с напряженностью 50-75 В из композиции, содержащей поливиниловый спирт, борную кислоту, желатин, фермент, графит и воду при следующем соотношении компонентов, маса%:

Поливиниловый спирт

Борная кислота

Желатин

Фермент

Графит

Вода

и закрепляют покрытие нанесением пленки нз водного раствора, содержащего 2-5 мас,% поливинилового спирта и 0,12-0,15 мас.% глутарового альдегида, путем окунания

0,5-1,0 0,5-1,0 0,1-0,3

одоо1-о,оо5

10-20 Остальное