Штамм бактерий SтRертососсUS FаесIUм, используемый в качестве эталона для оценки активности микробов-антагонистов менингококка Советский патент 1990 года по МПК C12N1/20 C12Q1/02 

Изобретение относится к медицин- ской микробиологии и может быть использовано при отборе высокоактивных ; в отношении менингококка микробов- антагонистов.

Цель изобретения - выявление штамма, обладающего выраженной стабильной способностью подавлять рост нейссерий.

Штамм : Streptococcus faeciiim выделен из смеси носоглотки.бактерионосителя. Депонирован в коллекции ГИСК им. А.А. Тарасевича под номером 183 и характеризуется следующими признаками.

Культурально-формологические признаки. Полиморфные, грамположи- тельные кокки,располагаются попарно и небольшими скоплениями. На сывороточном агаре с 1% глюкозы образует мелкие.и среднего размера белые плотные колонии, вокруг которых изменяется цвет среды (белесоватый оттенок). На кровяном 5х-ном агаре зона гемолиза отсутствует. На ШБ

Д.ает диффузное-помутнение и небольшой осадок. Растет в 6,5%-ном солевом бульоне и на МПБ с 10% и 40% желчи.

На среде с 2,3,5-ТТХ при концентрации 0,01% вырастают бесцветные ко-ЛОНИИ.

На среде с теллуритом калия (0,02%) вырастают колонии серого цвета.

Физиологог-бйохимические свойства. Факультативный аэроб. Неподвижньй.

Сорбит не ферментирует. Метилено- вый синий в молоке не .обесцвечивает.

ф

О

СХ)

NU

О5 f

10

15

31604846

Антагонистическая активность - задерживает рост менингококков при выращивании на плотной и в жидкой средах. В жидкой среде оказывает ин- гибирующее действие в течение 15 мин при соотношении его к тест-культуре менингококка 1:1-1:100.

П р и м е р 1. Штамм Ь 183 засевают в виде полоски на сывороточный агар Хоттингера и инкубируют в течение 48 ч при . Затем подсевают от края чашки к антагонисту перпен- дикулярным штрихом менингококки се- р.огрупп А, В, С (эталонные штаммы № 1096, № 23247, № 0638) и помещают в термостат. Через 24 ч измеряют зону отсутствия роста культуры менингококка (в мм) по нанесенному штриху.

Пример 2. Агаровую куЗпьтуру щтамма № 183 и культуру менингококка сеют на скошенный 2%-ный агар, приготовленный на переваре Хоттингера и содержащий 20% лошадиной сьшоротки и 1% гйюкозы. Через 24 ч выросшие чистые культуры смывают физраствором, из суспензий готовят взвесь (1 млрд м.кл/мл). Берут два ряда по 7 стерильных пробирок, в каждую из которых наливают по 0,9-мп бульона Хоттингера с 20% лошадиной сыворотки. Стандартизованную взвесь культуры штамма К 183 вносят в объеме 0,1 мл в первую пробирку, а затем последовательно делают ряд десятикратных разведений. Таким образом, получают конт центрацию микробных клеток штамма

20

25

30

35

№ 183 от 10 до 102 в 1 мл.,

Аналогичным образом разводят и исследуемую взвесь культуры менингококка.

Из приготовленньгх разведений культур дела:ют контрольные высевы по 0,1 мл на сывороточный агар Хот- тингера с 1% глюкозы. Через 24 ч.

определяют КОЕ (из разведения 10 м. кл, менингококка).

После проведения контрольных посевов во все пробирки с тест-штаммом добавляют по О,1 мл основной суспензии культуры менингококка из расчета 10 м.кл,/мл бульона, смешанную . культуру инкубируют при ЗУ С. В процессе инкубирования проводят высевы по 0,1 мл на три чашки с сьшороточным агаром и 1% глюкозы через 15 мин, 1 ч и 24 ч. Выросшие культуры микроско- пируют и изучают биохимические свойства. Подсчет вьфосших колоний ме40

45

50

55

1

.н

0

5

0

5

0

35

40

45

50

55

нингококка осуществляют с помощью оксидазного теста.

П р и м е р 3. Для сравнительной оценки антименингококковой активности свежевьщеленных щтаммов-анта- гонистов используют носоглоточную микрофлору, вьщеленную от 10 переболевших лиц. В первичных посевах отбирают колонии доминирующих культур и изучают их антагонистическую активность в отношении менингококка методом отсроченного антагонизма. Для этого используют один штамм менингококка серовара |J , свежевьщеленный от

больного генерализованной формой менингококковой инфекции, и эталонный музейный штамм менингококка того же серовара (№ 75).

Уровень чувствительности взятых штаммов к ингибирующему действию антагонистов предварительно проверяют с помощью штамма № 183. Последний засевают в виде полоски на чашку с сывороточным агаром и культивируют в течение 48 ч при , после чего к выросшей культуре подсевают перпендикулярными штрихами вьш1еупо- мянутые культуры менингококков и вновь инкубирзтот в течение суток.

Учет результатов проводят по ве- 11ичине зон задержки роста менингококков. Из двух исследованных культур более чувствительной является свеже- выдел.енная культура (средняя задержка роста 17+1,4 мм; средняя задержка роста штамма К 75 - 10+2 мм).

В жидкой питательной среде свеже- вьщеленный штамм менингококка при совместном выращивании с S.faecium № 183 погибает .в течение 15 мин, а № 75 - через 1ч.

Полученные параметры чувствительности используют как параметры сравнения при дальнейшем исследовании.

Из 10-ти изученных культур наличие антименингококковой активности выявлено у двух-культур. Одна из .них при проверке показала слабую антагонистическую активность в отношении менингококков - зоны задержки роста 1.1 мм и 5 мм для свежевьщелен- ной культуры и № 75 соответственно. Другая оказалась высокоактивной - зоны задержки роста соответственно 16 мм и 8,5 мм, т.е. практически

на уровне штамма Р 183.

Далее определяют скорссть проявления ингибирующего действия отобранных

двух культур методом серийнык разведений (пример 2),

Выявленная ранее высокоактивная культура-антагонист по скорости подавления роста менингококков уступает- эталонному и штамму № 183: при разведении 1:100 ингибирующий эффект к свежевьщеленному штамму проявляется через 1 ч, а к штамму Р 75 - через 24 ч. Другая выявленная культура не подавляет рост менингококков ч:ерез 24 ч.

Использование штамма 183 со стабильными свойствами позволяет исполь160

1604846

зовать его в качестве эталона при проведении сравнительной оценки антагонистической активности носоглоточной микрофлоры и отбора высокоактивных штаммов-антагонистов в отношении менингококка.

Формула изобретения

Штамм бактерий Streptococcus fae- cium ГИСК № 183, используемый в честве эталона для оценки активности микробов - антагонистов менингококка.

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при отборе высокоактивных в отношении менингококка микробов - антагонистов. Цель изобретения - выявление штамма, обладающего выраженной стабильной способностью подавлять рост менингококка. Штамм выделен из слизи носоглотки бактерионосителя и депонирован под номером ГИСК N 183. Антименингококковую активность штамма проверяют методами отсроченного антагонизма и предельных разведений. Штамм обладает высокой антагонистической активностью, что отражается на скорости ингибиции роста менингококков.