Питательная среда для получения сферопластов микобактерий туберкулеза Советский патент 1991 года по МПК C12N1/20 

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при диагностике туберкулеза.

Цель изобретения - ускорение получения сферопластов при сохранении продуктивности.

Приготовление и использование среды иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Готовят среду следующего состава, мас.%: Фосфорнокислый однозамещенный калий0,1

Фосфорнокислый дву- замещенный натрий Сернокислый магний Сахароза

Хлоргексидин глюко- нат, 20/ц -ный раствор

Дистиллированная вода

0,15 0,05 15,0

1,0

Остальное

Ј

00

Соли и сахарозу растворяют в 100 мл дистиллированной воды и сте- рилизуют в автоклаве при 0,3 атм в течение 30 мин. рН среды 7,2. После охлазедения к раствору добавляют препарат хлоргексидин глюконат в виде 20%-ного раствора„

В приготовленную среду помещают мико-бактерии любого вида в концентрации 0,05 г отжатого веса культуры на 1 мл среды или 5 г на 100 мл среды. Посуду с полученным содержанием встряхивают и помещают в термостат при 37UC на 3-4 ч, после чего полу- че :ные сферопласты трижды отмывают изотоническим раствором путем центрфугирования при 3 тыс. об/мин. При этом общий выход биомассы сфероплас тов составляет 4,0-4,5 г или около 90% от исходного веса культуры.

Пример 2. Готовят среду в соответствии с примером 1, но компо ненты среды берут в следующих концентрациях, мас%:

Фосфорнокислый одно- замещенный кали 0,15 Фосфорнокислый дву- замещенный натрий 0,17 Сернокислый магний 0,075 Сахароза20,0

Хлоргексидин глюконат, 20%-ный раствор2,0

Дистиллированная

водаОстально

Выход 95-98% через 3-4 ч инкубирования.

Пример 3. Готовят среду в соответствии с примером 1, но компоненты среды берут в следующем колчественном соотношении, мас«%: Фосфорнокислый одно- замещенный калий 0,125 Фосфорнокислый дву- замещенный натрий 0,16 Сернокислый магний 0,06 Сахароза17,5

0

5

0

5

0

5

0

Хлоргексидин глюконат, 20%-ный раствор1 ,5 Дистиллированная

водаОстальное

Выход 85-90% через 3 ч инкубирования, 95-98% через 4 ч инкубирования .

При использовании известной среды выход клеток на уровне 90-97% через 24 ч инкубирования.

Использование среды позволяет ускорить получение сферопластов и тем самым повысить производительность процесса.

Формула изобретения

Питательная среда для получения сферопластов микобактерий туберкулеза, содержащая фосфорнокислый одно- iзамещенный калий, фосфорнокислый дву- замещенныи натрий, сернокислый магний, сахарозу, лизирующий агент и дистиллированную воду, отличающаяся тем, что, с целью ускорения получения сферопластов при сохранении продуктивности, она в качестве лизирующего агента содержит 20%-ный раствор хлоргексидин глюконата при следующем количественном соотношении компонентов, мас.%:

Фосфорнокислый одно- замещенный калий 0,1-0,15 Фосфорнокислый дву- замещенный натрий 0,15-0,17 Сернокислый магний 0,05-0,075 Сахароза 15,0-20,0 20%-ный раствор хлоргексидин глюконата 1,0-2,0 Дистиллированная водаОстальное

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при диагностике туберкулеза. Цель изобретения - ускорение получения сферопластов при сохранении продуктивности. Питательная среда содержит, мас.%: калий фосфорнокислый однозамещенный 0,1-0,15; натрий фосфорнокислый двузамеценный 0,15-0,17; магний сернокислый 0,05- 0,075; сахароза 15-20; 20%-ный раствор хлоргексидин глюконата 1-2; дистиллированная вода остальное. Соли и сахарозу растворяют в воде и стерилизуют. После охлаждения к среде с рН 7,2 добавляют 20%-ный раствор хлоргексидин глюконата. В полученную среду вносят микобактерии и инкубируют при 37°С в течение 3-4 ч. Полученные сферопласты отмывают изотоническим раствором. Выход около 90% от исходного веса культуры. S