Способ определения Т-лимфоцитов в крови у птиц Советский патент 1991 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к иммунологии птиц,и касается количественной оценки Т-системы иммунитета.

Цель изобретения - упрощение способа количественного определения Т-лимфоцитов в крови птиц и повышения его точности.

Способ осуществляют следующим образом.

Лимфоциты из гепаринизированной (25 ед/мл) крови птиц выделяют центрифугированием в градиенте плотности фиколл-ве- рографина (d 1,082) при 1500 об/мин в течение 35 мин. Собранные из интерфазы лимфоциты трижды отмывают средой 199 в течение 5 мин при 1500 об/мин и доводят концентрацию лимфоцитов до 2-3 млн/мл.

Для определения Т-лимфоцитов птиц к 0,1 мл суспензии лимфоцитов добавляют равный объем трижды отмытых средой 199 эритроцитов барана в соотношении 1:10.

Смесь инкубируют при 37°С в течение 20 мин в термостате, а затем центрифугируют при 800 об/мин в течение 5 мин, добавляют 0,1 мл 0,6%-ного глютарового альдегида и инкубируют при 4-6°С в течение 20 ч. Затем смесь отмывают от глютарового альдегида дистиллированной водой, а из осадка готовят мазки, которые высушивают, фиксируют метиловым спиртом в течение 5 мин и окрашивают по Романов- скому-Гимза в течение 35 мин. Подсчитывают 200-300 лимфоцитов и вводят процент розеткообразующих клеток (РОК).

При всех опытах лимфоцитов птицы с эритроцитами барана инкубируют при 37°С в течение 20 мин. В дальнейшем инкубацию смеси проводят при 4-6°С при разных экспозициях. Оптимальным условием для выявления спонтанного розеткообразования является инкубация комплекса лимфоцит- эротроцит при 4-6°С в присутствии 0.5%- ного глютарового альдегида в течение 20 ч.

Ј

О

00

ел

со ел

Наибольшее число РОК (53,5 ±0,2%) выявляют при добавлении к смеси 0,1 мл глютарового альдегида в концентрации 0,6%, наименьшее(46,2 ± 0,2%) - при 0,2 %- ной концентрации препарата.

В табл. 1 приведены данные, характеризующие количество реэеткоовразующих клеток птиц в процентах в зависимости от времени инкубации при 4-6°С.

Результаты определения числа спонтанных РОК у птиц в зависимости от концентрации глютарового альдегида приведены в табл. 2.

0

Формула изобретения Способ определения Т-лимфоцитов в крови у птиц, включающий взятие крови, получение суспензии лимфоцитов, постановку реакции идентификации Т-лимфоцитов и ее оценку, отличающийся тем, что, с целью упрощения и повышения точности, реакцию идентификации осуществляют путем инкубации суспензии лимфоцитов с эритроцитами барана в присутствии 0,4-0,6%-ного глютарового альдегида в течение 18-20 ч при 4-6°С, а оценку проводят по розеткообразованию.

Таблица 1

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к иммунологии птиц, и касается количественной оценки Т-сис- темы иммунитета. Цель изобретения - упрощение способа количественного определения Т-лимфоцитов в крови у птиц и по- вышение его точности. Исследуемую суспензию лимфоцитов крови птиц инкубируют с эритроцитами барана в присутствии 0,4-0,6% глютарового альдегида в течение 18-20 ч при 4-6°С, после чего готовят мазки и подсчитывают количество лимфоцитов, образующих спонтанные розетки. 2 табл.

Таблица 2