Способ подготовки препарата нервных волокон мышечной ткани для люминесцентной микроскопии Советский патент 1991 года по МПК G01N1/28 A61B10/00 

Изобретение относится к медицине, а именно к морфологии, и может быть использовано для выявления катехоламин содержащих структур адренергических сплетений в биопсийном материале различных органов и тканей.

Цель изобретения - повышение качества способа за счет лучшей сохранности нервных терминалей.

Способ осуществляют следующим образом.

Биоптат исследуемой мышечной ткани объемом 0,20-0,25 см3, содержащей нервные волокна, инкубируют 3-3,5 мин в буферном .растворе Хенкса, при / 2-4°С (рН 7,3-7,35), в который добавляют кри- опротектор, в качестве которого берут глицерин, а также модулятор, в качестве которого выбирают аденозинтрифосфорную кислоту, а также флюорограф, при следующих соотношениях компонентов, мас.%:

Глицерин20-22

АТФ0,02-0,025

Аспаргинат0,1-4,5

магния0,1-4,5

Буфер ХенксаОстальное

Способ осуществляют следующим образом.

Биоптат инкубируют 3-3,5 мин в буферном растворе Хенкса, в который добавляют криопротектор и флюорофор при t 2-4°С (рН 7,3-7,35), затем биоптат замораживают и изготовляют с помощью криомикро- тома замороженные срезы, которые повторно помещают в буфер Хенкса без криопро- тектора и инкубируют в течение 10-10,5 мин. Добавление к стандартному раствору Хенкса АТФ до замораживания обусловлено ее влиянием на обратный захват катехола- минов нервными терминалями и предупреждением диффузии последних в окружающие ткани.

Пример 1. Биоптат прямой мышцы живота объемом 0,1 см3 погружают на 3 мин в холодный раствор Хенкса при 2°С, (рН 7,3-7) с концентрацией аспарагината

О

со о i

00

магния 0,10 мас.%, АТФ 0,020 мас.% и глицерина 2,0 мас.%. Остальное буфер Хенкса. Затем биоптат замораживают в жидком азоте, хранят в нем до исследования. Замороженные срезы толщиной 20 мкм монтируют на стекле и повторно инкубируют в буфере Хенкса (рН 7,3), содержащем 0,020 мас.% натриевой соли АТФ и 4,0 мас.% аспарагината магния в течение 10 мин при комнатной температуре. В последующем после двухкратного ополаскивания в буфере Хенкса стекла сушат под струей теплого воздуха 10 мин, заключают в полистирол и исследуют в люминисцентном микроскопе используя светофильтры ФС-1,4, СЗС-24,4 БС-2,8.

Адренергические нервные претерминали и терминали образуют на мышечных волокнах тонкие ветвистые сплетения в желто-зеленом цвете. Выявляются нервные терминали диаметром 1,0-1,5 мкм.

Пример 2. Биоптат большой грудной мышцы объемом 0,25 см3 погружают на 3,5 мин в холодный буферный раствор Хенкса при 3°С (рН 7,3) с концентрацией аспарагината магния 0,125 мас.%, АТФ 0,025 мас.% и глицерина 22 мас.%, остальное буфер Хенкса. Затем биоптат замораживают в жидком азоте и изготавливают на криоптоме замороженные срезы толщиной 22 мкм, которые монтируют на стекле и повторно инкубируют в буфере Хенкса (рН 7,3). В последнем содержится 0,025 мас.% АТФ и 4,5 мас.% аспарагината магния. Инкубацию осуществляют в течение 10,5 мин при комнатной температуре. После двухкратного ополаскивания в буфере Хенкса стекла сушат струей теплого воздуха 10 мин, заключают в полистирол и исследуют в люминисцентном микроскопе используя светофильтры ФС-1,4, СЗС-24,4, БС-2,8.

Адренергические нервные претерминали и терминали образуют на мышечных волокнах вдоль кровеносных сосудов тонкие ветвистые сплетения, флюоресцирующие желто- зеленым цветом. Выявляются нервные терминали с размером в поперечнике 0,001 -

0,0015 мм.

Способ позволяет выявить нервные терминали диаметром 1,5-2 мкм, что позволяет в полном объеме выявлять нервные сплетения в мышечной ткани.

15

Формула изобретения

Способ подготовки препарата нервных волокон мышечной ткани для люминисцент- ной микроскопии, путем инкубации в среде, 0 содержащей раствор Хенкса, криопротектор и флюорограф, с последующим приготовлением замороженных срезов и повторной их инкубацией в той же среде без криопро- тектора, отличающийся тем, что с целью 5 повышения качества препарата за счет лучшей сохранности нервных терминален, повторную инкубацию проводят в течение 10- 10,5 мин, при этом среда дополнительно содержит АТФ, а в качестве криопротек- тора используют глицерин и флюорографа- 0 аспаргинат магния при следующих соотношениях компонентов, мас.%:

Глицерин20-22

АТФ0,02-0,25

Аспаргинат магния0,1-4,5

Буфер ХенксаОстальное

Изобретение относится к медицине, а именно к морфологии. Целью изобретения является повышение качества способа за счет лучшей сохранности нервных терминален. Цель достигается инкубацией ткани в течение 10-10,5 мин в среде, содержащей глицерин (20-22 мас.%), АТФ (0,02- 0,025 мас.%), аспаргинат магния (0,1 - 4,5 мас.%) и буфер Хенкса (рН 7,3-7,35). Готовят срезы, которые повторно инкубируют в среде без глицерина в течение 10-10,5 мин. Способ позволяет выявить нервные терминали 1,5-2 мкм в диаметре. (О