Способ определения концентрации витамина А Советский патент 1991 года по МПК G01N33/02 

Изобретение относится к пищевой промышленности и может быть использовано при определении концентрации витамина А в различных пищевых продуктах, а также при контроле производства витамина А.

Целью изобретения является повы- шегние точности путем фиксации нулевой точки измерения.

На фиг.1 показана зависимость прироста оптчиеской плотности от времени дегидратации; на фиг.2 - зависимость между приростом оптической плотности с концентрацией витамина А в анализируемой пробе.

Для осуществления данного способа отобранную пробу анализируемого продукта омыляют спиртовым раствором щелочи, экстрагируют неомыляемую фракцию гексаном, удаляют гексан путем упаривания, растворяют сухой остаток в этаноле, проводят дегидратацию путем добавления соляной кислоты с конечной концентрацией последней 0,2 - 0,5 измеряют величину оптической плотности при длине волны 390 - 392 нм через 30 с после добавления соляной кислоты, а затем через 4-6 мин. По приросту оптической плотности за этот промежуток времени определяют концентрацию витамина Ј по предварительно построенному калиброванному графику, обеспечивая тем самым фиксацию нулевой точки измерения.

Для более полного и избирательного извлечения витамина А из неомыляемой фракции используется гексан. Для предотвращения появления эмульсии в пробе, что делает невозможным ее прямое спектрофотометрирова- ние, а также исключения операций нейтрализации, отмывки и центрифугирования перед дегидратацией проводят удаление гексана путем упаривания с последующим растворением сухого остатка в этаноле. Дегидратацию витамина осуществляют соляной кислотой с конечной концентрацией 0,2

Ё

О

ч о а о ю

0.5 н в растворе этанола. В табл. 1 представлены результаты опытов по определению оптимальных концентраций соляной кислоты для дегидратации витамина А, исходя из которых выбирают диапазон концентрации соляной кислоты, указаной выше.

Измерение прироста оптической плотности проводят при длине волны 390 - 392 нм, которая соответствует вершине пика спектра дегидратированного витамина А.

Данный способ позволяет строго контролировать проведение дегидратации по времени, так как соляная кислота добавляется непосредственно перед измерением оптической плотности. Первое измерение оптической плотности проводят через 30 с, после добавления соляной кислоты. Второе измерение проводят через 4-5 мин после первого. Как видно из фиг.1, на котором представлена зависимость прироста оптической плотности между вторым и первым измерениями, в течение указанного промежутка времени между первым и вторым измерением (4-5 мин) наиболее активно происходит дегидратация и наблюдается линейная зависимость между приростом оптической плотности и временем дегидратации. Увеличение времени дегидратации более 4-5 мин может привести к завышению результатов определения витамина вследствие дегидратации примесей липид- ной природы, которые как правило присутствуют в анализируемых продуктах.

В табл.2 и 3 приведены результаты определения витамина А в печени трески, а также в смеси витаминов и антиоксиданта по данному способу и по прототипу, согласно которому дегидратацию проводят в течение 15 мин. Определение витамина А по прототипу приводит к завышению результатов измерений.

Пример. Навеску гомогенизированного образца тресковой печени в томатном соусе (200 - 400 мг) вносили в колбочку для омыления. В нее добавляют 20 мл этанола, 100 мг гидрохинона и 3 мл 50% гидроксида натрия. Далее присоединяют обратный холодильник и проводят щелочное омыление на водяной бане в течение 30 мин при 100°С, периодически встряхивая колбу. После окончания омыления смесь охлаждают и количественно переносят в делительную воронку, куда предварительно вносят 50 мл гексана и энергично встряхивают. Экстракцию повторяют дважды по 30 мл гексана. Гексановый экстракт отмывают дистиллированной водой до нейтральной реакции, затем фильтруют через воронку, в которую насыпан безводный сульфат натрия для удаления остатков влаги. Фильтрат упаривают досуха, остаток растворяют в 5 мл этанола. К полученному растору добавляют 0,1 мл концентрированной соляной кислоты. Смесь быстро перемешивают и вносят в кювету для спектрофотометрирования, через 30 с после внесения кислоты проводят первое измерение оптической плотности при 390 нм против контрольного раствора. Второе измерение проводят через 5 мин после

первого и по разнице показаний между вторым и первым измерениями находят прирост оптической плотности, количество витамина определяют по предварительно построенному калибровочному графику.

(фиг.2).

Формула изобретения Способ определения концентрации витамина А, предусматривающий отбор анализируемой пробы, омыление спиртовым раствором щелочи, экстракцию неомыляе- мой фракции органическим растворителем, дегидратацию в присутствии соляной кислоты и измерение величины оптической плотности дегидратированной анализируемой пробы, коррелирующей с концентрацией витамина А, отличающийся тем, что, с целью повышения точности путем фиксации нулевой точки измерения, в качеств органического растворителя при экстракции используют гексан, перед дегидратацией осуществляют удаление органического растворителя путем упаривания, с последующим растворением полученного сухого

остатка в этаноле, при этом дегидратацию осуществляют путем добавления соляной кислоты с конечной концентрацией последней 0,2 - 0,5 н, а измерение оптической плотности осуществляют при длине волны

390 - 392 нм в течение 4-6 мин.

Таблица 1

Изобретение относится к пищевой промышленности и может быть использовано при определении концентрации витамина А в пищевых продуктах, а также при контроле производства витамина А. Омыляют анализируемую пробу спиртовым раствором щелочи, экстрагируют неомыляемую фракцию гексаном, удаляют органический растворитель путем выпаривания, сухой остаток растворяют в этиловом спирте, затем проводят дегидратацию путем добавления соляной кислоты в конечной концентрации 0,2 - 0,5 н, а количественное определение витамина А ведут по приросту оптической плотности в течение 4 - 5 мин при длине волны 390 - 392 нм. 2 ил., 3 табл.

Таблица 2

85,8

120

91,7

180

Таблица 3

о,о

0,1

о,г

15мину/п

0,1 0,Ц 0,5 0,6 0,7 мкг

Фиг. 2