Способ количественного определения витамина А Советский патент 1991 года по МПК G01N33/02 

Изобретение относится к пищевой, фармацевтической, химической и сельскохозяйственной промышленности и может быть использовано для определения витамина А в различных пищевых продуктах, биологическом материале, в масляных концентратах, витаминных премиксах и т.д., а также при контроле производства витамина А.

Целью изобретения является повышение точности определения.

Для осуществления данного способа из отобранной пробы анализируемого материала извлекают витамин А экстракцией органическим растворителем, проводят цаетную реакцию витамина А с эфиратом трифторида бора при конечной концентрации последнего 16-20%, а количество витамина А рассчитывают по величине изменения интенсивности окраски цветного комплекса при 61U нм. При извлечении витамина А из материалов, содержащих липиды, перед экстракцией органическим растворителем про- родят щелочное омыление.

Для повышения селективности метода в качестве комплексоооразователя используют эфират трифторида бора, который образует окрашенный комплекс только с витамином А. При этом этот ком- пле.сообразователь взаимодействует со всеми формами витамина А в отличие от других комплексооЬразователей, например, трихлорида сурьмы, который дает окраску только лишь при взаимодействии со спиртовой формой витамина А. Эфират

О

ос

Ј

о: с:

трифторида бора менее токсичен, чем трихлорид сурьмы. Окрашенный комплекс витамина А и эфирата трифторида бора образуется во всех неполярных органи- ческих растворителях (гексан, бензол, хлороформ, дихлорэтан и т.д.). Скорость распара комплекса для разных растворителей не одинакова, например, в гексане данная реакция протекает очень быстро, что затрудняет анализ. Наилучшие результаты получены при использовании хлороформа.

Для уменьшения ошибки измерения пр однократном измерении оптической плот ности, связанной с распадом окрашенного комплекса, количественно определение витамина А производят в данном гпособе по изменению интенсивности окраски цветного комплекса при 610 нм.

Способ иллюстрируется чертежом.

На чертеже графически отражена ки- гетика реакции распада цветнсг о комплекса после добавления к раствору, содержащего витамин А, эфирата трифто чяда бора в количестве 1 мл. Пока за- а цасть спектра этого комплекса в - fт ареале 630 нм- Цифра 1 соответствует величине оптической плотное- ти раствора через 30 с после добавления эфирата трифторида бора. Все последующие измерения (цифры 2-9) проводились через каждые 60 с. Образовавщаяся си ч,3 я окраска цветного комплек- са витамина А и эфирата трифторида бора со временем постепенно ослабевает и теряет свою интенсивность. Наибольшая скорость изменения окраски наблюдается в первую минуту течения реакции (интервал между цифрами 2 и 1 - наибольший). В дальнейшем скорость распада комплекса постепенно замедляется, что отражено в уменьшении интерзала между всеми последующи- ми цифрами.

Из этого следует, что проводить регистрацию изменения скорости распада цветного комплекса следует в первую минуту, так как в этот момент измерения будут более точными и чувствительными .

На необходимость проведения измере |ний в первую минуту течения реакции .указывает также и то, что по мере ее хода начинает появляться и регистрироваться дополнительный пик (пик Б), вызванный образованием посторонних продуктов распада комплекса, мешающих определению витамина А. По мере течения реакции основной пик, .- где согласно предлагаемому способу необходимо проводить измерения, постепенно уменьшается, уменьшается соответственно и разность между двумя измерениями. Одновременно растет дополнительный пик, что вызывает завышение полученных результатов и снижение точности анализа.

Измерения скорости распада цветного комплекса проводят в начальный момент хода реакции: согласно данному способу это делается через 30 с после смешения реагентов.

Пример 1. Определение витамина А в печени кур (вариант с омылением) .

Навеску гомогенизированной куриной печени (200 мг) заливают 50 мл этанола, добавляют 1 г гранулированной гидроокиси натрия, 100 мг пирогаллола и нагревают в течение 30 мин при 90°С нл водяной бане. Затем гидролизат охлаждают, переносят в делительную воронку, витамин А экстрагируют трижды по ЗУ мл гексана. Объединенный гекса- новый экстракт выпаривают досуха на роторном испарителе, сухой остаток растворяют в 13 мл хлороформа.

Для анализа берут 5 мл хлороформного раствора,добавляют 1 мл эфирата трифторидэ бора по стенкам пробирки, смешивают и включают секундомер. Через 30 с после смешания делают первое измерение оптической плотности раствора на длине волны 6lU нм. Затем через 1 мин после первого измерения проводят второе измерение. По разнице между вторым и первым измерениями рассчитывают изменение оптической плотности раствора и по величине этого изменения, используя калибровочный график, рассчитывают содержание вита- i-ина А в анализируемом образце,

Согласно данному примеру в печени гроводится измерение витамина А в ви- Ј,е его спиртовой формы - ретинола.

П р и м е р 2. Определение витамина А в печени кур (вариант без омыления) .

Навеску гомогенизированной куриной печени (200 мг) вносят в фарфоровую ступку, насыпают туда 5 г безводного сульфата натрия и тщательно перетирают до получения однородной массы. При этом происходит измельчение пече5165466i

ни и одновременное ее обеjпоживание,

Ю

/что необходимо для следующего этапа - экстракции витамина А. Затем в ступку наливают 10 мл хлороформа, хорошо перемешивают пестиком и содержимое фильтруют в пробирку через бумажный фильтр. Потом дважды по мл ополаскивают ступку хлороформом, переносят его на тот же фильтр и содержимое пробирки доводят до 1 i мл хлороформом. Все дальнейшие процедуры выполняют также как описано в примере 1,

Таким образом, в данном варианте определения витамина Л исключаются такие длительные процедуры как омыление, отмывка экстракта и его выпаривание. Это значительно сокращает зремя анализа и повышает его точность счет сокращения ряда операций.

Согласно данному примеру в печени определяется витамин А в нативной форме, в которой он присутствует в тканях, а именно в виде ретинилпальмита- та, т.е.

рат трифторида бора позволяет определять все формы витамина А.

П р и м е р 3. Определение витамина А в масляном концентрате,

Все производимые масляные препара-1 30 ты как для витаминизации продуктов питания человека, так и для обогащения комбикормов животных представляют собой эфирные формы витамина А в масле - например, ретинилпальмитат или рети- нилацетат.

1 мл масляного препарата витамина А (активностью например, 100 тыс. интернациональных единиц в мл) растворяют в 10 мл гексана или хлороформа в 40 мерной колбе. Затем 1 мл полученного раствора переносят в другую мерную колбу на 100 мл с хлороформом и хорошо перемешивают. Таким образом, первоначальный масляный препарат разбавили в 10000 раз. 1 мл разбавленного таким способом раствора витамина А вносят в химическую пробирку,доливают h мл хлороформа и перемешивают. Затем в пробирку приливают 1 мл эфира трифторида бора и все измерения проводят также как описано в примере 1.

При м е р 4. Определение оптимальных количеств эфирата трифтррида бора для проведения реакции с витамином Д.

В таЬл. 1 представлены данные по определению витамина А при добавлении к анализируемому образцу различных ч ,мчеств зфир-ттл трсфторид-ч bo- pa. Для испытаний был взят стандартный раствор аитамина А с известной концентрацией и в каждый образец вносили по „ мкг ретинола. И, данных таблицы следует, что при добавлении к хлороформеиному раствору 0,1-0,7 мл реагента анализ искомого компонента е представляется возможным, гак как з этих соотношениях получается мутный раствор, который невозможно фс- тометрировать. Раствор становится прозрачным только при добавлении

я. .5 лее J,8 мп эОирата трифторида бора (например, J,o мл цвегореагента и k ,2 мл хлороформ. ,того раствора витамина А; 1,0 л цветорезгенто и Ч мл раствора и так далее).

20

Увеличение концентрации эфирата грифторида бора более 1&-21К (мто соответс гвуо г доЬлплению 0,8-1,0 tsi реагента к хлороформенному растэору

эфирной форме, поскольку зфи-25 общим объемом j мл) нсцелесоооразно,

так ка, при этом точность анализа не повышается. Поэтому с целью экономии цветореагента был оь бран интервал 0,8-1,0 мл, т.е. 16-20%.

При мер 5. U табл. 2 и 3 представлены результаты сравнительных испытаний данного способа, Который проводился так как описано в примере 3 и прототипа. Из таблицы видно, что 35 предлагаемый способ определения витамина А превосходит известный как по точности определений, так и по селективности определений. Кроме того, способ значительно упрощается, так как нет необходимости проводить щелочное опыление масляного препарата витамина А, тогда как в известном способе эта процедура обязательна.

45 Использование в качестве цветореагента эфирата трифторида бора позволяет определять витамин А в любой его форме (спиртовой, эфирной и т.д.), значительно сокращает время анализа

50 материалов, не содержащих липиды,, так как позволяет обойтись без целого ряда таких операций как омыление, отмывка экстракта и выпаривание растворителя. Данный способ позволяет прово55 дить опредение витамина А во многокомпонентных смесях, содержащих самые различные вещества, так как эмират трифторида бора является специфичес- ким реактивом по отношению к ретинолу.

ных ч ,мчеств зфир-ттл трсфторид-ч bo- pa. Для испытаний был взят стандартный раствор аитамина А с известной концентрацией и в каждый образец вносили по „ мкг ретинола. И, данных таблицы следует, что при добавлении к хлороформеиному раствору 0,1-0,7 мл реагента анализ искомого компонента е представляется возможным, гак как з этих соотношениях получается мутный раствор, который невозможно фс- тометрировать. Раствор становится прозрачным только при добавлении

я. .лее J,8 мп эОирата трифторида бора (например, J,o мл цвегореагента и k ,2 мл хлороформ. ,того раствора витамина А; 1,0 л цветорезгенто и Ч мл раствора и так далее).

Использование менее токсичного ком- плексообразователя улучшает условия работы аналитиков.

Формула изобретения 5

1. Способ количественного определения витамина А, включающий отбор-пробы анализируемого материала, извлечение из него витамина А, взаимодействие последнего с комплексообразовате- лем и измерение значения оптической плотности образующегося окрашенного

соединения, соответствующее количест- ,ву витамина А, отличающий- с я тем, что, с целью повышения точ

ности, .извлечение витамина А осуществляют путем экстракции органическим растворителем, в качестве комплексо- образователя используют раствор эфира- та трифторида бора с конической концентрацией 16-20%, а измерение значения оптической плотности осуществляют путем фиксации изменения интенсивности окраски при 610 им.

2. Способ по п„ 1, отличающийся тем, что при извлечении витамина А из материалов, содержащих ли- пиды, перед экстракцией органическим растворителем проводят щелочное опыление.

Таблица 1

Изобретение относится к пищевой, фармацевтической, химической и сельскохозяйственной промышленности и может быть испогьзовано для определения витамина Д в различных пищевых продуктах, биологьческом материале, в масляных концентратах, витаминных премиксах и т.д. Цель - повышение точности определения. 1з отобранной пробы анализируемого материала извлекают витамин А экстракцией органическим растворителем, осуществляют взаимодействие витамина с комплексообразователем, в качестве которого используют эфират трифторида бора, с конечной концентрацией 16-20%. Количество витамина А определяют по изменению интенсивности окраски при 61 Q нм образующегося цвег- s ного комплекса. 1 з.п. ф-лы, 1 ил., 3 табл. SS а

Раствор мутный

Определение витамина А согласно известному способу в данном случае дает завышенный результат, так как треххлористая сурьма не является специфичным реактивом для витамина А и дает окрашивание с другими веществами, присутствующими в растноре.

4,92 4,95 4,95 4,9 ,94

98,4 99,1 99,1 98,9 99,2

Таблица 2

Табл1ица3

Редактор 3. Труо ченко

Составитель И. Пинуев

Техред Л.Сердюкова Корректор А. Обручар

Заказ 3502

Тираж

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35,1 Раушская наб., д. V5

- - --- - - - - - - - - --------- - - - -. - -. - --. - --..«-.-. - -- - , -eeee. - - .в - - .-, - в - -,,

Производственно-издательский комбинат Патент, г.Ужгород, ул. Гагарина,101

Подписное