Способ количественного определения хлорхолинхлорида Советский патент 1980 года по МПК G01N31/08 

(54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ХЛОРХОЛИНХЛОРИДА

1

Изобретение относится к области. аналитической химии, а именно, к способам количественного определения хлорхолинхлорида (ХХХ).

Известен способ количественного определения хлорхолинхлорида, заключающийся в обработке анализируемой пробы органическим растворителем, хроматографировании органического слоя и отделении XXX с последующей обработкой реактивом Драгендорфа и фотоколориметрирования полученного окрашенного продукта 1 .

Недостатком способа является низкая точность и чувствительность определения 0,2 мг/кг.

Известеи также наиболее близкий к изобретению по технической сущности и достигаемому результату способ количественного определения хлорхолинхлорида, заключающийся в обработке анализируемой пробы этанолом, упаривании растворителя и пропускания остатка через колонку с рКисью алюминия с последующим элюированием хлорхолинхлорида, обработкой элюата дипикриламином спектрофотометрированием окрашенного раствора .

Недостатком способа являетсй его длительность - 5-6 рабочих дней и

низкая точность, не достигается полное отделение хлорхолинхлорида, что приводи к завышению результатов определения.

5 Цель изобретения - сокращение времени и повышение точности определения.

Поставленная цель достигается описываемым способом количественного определения хлорхолинхлорида, заключающимся в обработке анализируемой пробы этанолом, упаривании растворителя и пропускании остатка через колонку с окисью алюминия с

5 элюированием хлорхолинхлорида, выпаривании элюата, растворении сухого остатка в воде и хроматографировайии в тонком слое катионита с последующей обработкой полученной хромато20 граммы 21-25%-ным раствором серной или 3-5%-иым раствором соляной кислоты и последовательной обработке высушенной хроматограммы 10-12%-ным раствором фосфорномолибденовой кислоты и 0,8-1,2%-ным раствором двухло зистог6 олова и просветлении полученной хроматограммы 65-75%-ным раствором иммерсионного масла в гексане или петролейном эфире и спектрофо30 тометрировании хроматограммы. .nS- r t. . ;,,,/ , V , . СпосоТб осугДествляют следующим образом. Навеску измельченного образца заливают этанолом. Выпаренный до 1-2 мл этанольный экстракт пропускают однократно через колонку с окисью алюминия с последующим элюированием хлорхолинхлори а раствором этанола в ацетоне. Полученный элюат выпаривают досуха, а сухой остаток растворяют в 0,5 мл воды и 0,05 мл с помощью микропипетки наносят на прозрачную хроматографическую пластинку с тонким слоем катионита. Через пластинку п ропускают восходящий ок 23%-ной серной кислоты или 4%-ной соляной кислоты ее обрабатывают 11%-ным водным раствором фосформолибденовой кислоты. Затем пластинку промывают проточной водой в течение 30 мйн, обрабатывают 1%-ным водным раствором двухЛористЬго ОлОва ополаскивают в водопроводной воде,су шат до воздушно-сухого состояния под феном, просветляют 70%-ным иммерсион ным маслом в гексане или петролейном эфире, измеряют оптическую плотность полученной хроматограммьа в про ходящем свете при 730±10 нм на спект рофотометре (например, СФ-16) и по .калибровочному графику, определяют количество хлорхолинхлорида на пластинке и затем в анализируемом образце. . Пример. 100 г измельченного образца экстрагируют 300 мл 80%-ным этанола в течение 3 ч. Экстракцию по вторяют трижды. Суммарный объем экстракта выпаривают до 1-2 мл на ротационном испарителе и .остаток количественно переносят в колонку с окисью алюминия (диаметр 12 мм, высота набивки 250 мл). Через коло ку пропускают 20%-ный этанол в ацето не со скоростью 2-3 мл/мин. Первые 20 мЛ элюата отбрасывают,а затем со бирают 100 мл элюата, который выпар вают досуха на ротационном испарите ле. Сухой остаток растворяют в дист лированной воде. . На прозрачной пластинке размером 100x70 мм с закрепленным тонким сло ем катионита проводят мягким карандашом стартовую линию вдоль одной из меньших сторон и на расстоянии 15 Мм от неё. На стартовой линии от мечают зоны нанесения шириной 5 мм и интервалами 10 мм (4 зоны). В на ченные зоны микропипеткой наносят по 0,05 мм полученного водного раствора сухого остатка в двухкратной повторности (по 2 образца на пласти ку). Несколько хроматографических пла тинок с нанесенными экстрактами ста вят ребрЬм, вдоль которого проведен .я линия, на дно стеклянно- го сосуда, в который предварительно нешит 21%-ный раствор серной кислот или 3%-ный раствор соляной кислоты слоем 5-8 мм и закрывают крышкой. После того, как фронт растворителя поднимется на высоту 80 мм от стартовой линии, пластинки вынимают, сушат в течение 1-2 мин под феном и проявляют. Проявление проводят путем опускания в 10%-ный водный раствор фосфорномолибденовой кислоты на 2-3 с, последукичаго выдерживания на воздухе g течение 1-1,5 мин для стекания избытка реагента, промывки в проточной воде в течение 30 мин, npocsouKy под феном в течение 2-4 мин, опускания в 0,8%-ный водный раствор двухлористого олова (аналогично первой операции), ополаскивания в водопроводной воде и просушки под феном до воздушно-сухого состояния. На светло-голубом фоне проявляются темносиние пятна фосфорномолибденового к омплекса хлорхолинхлорида на расстоянии 14-15 мм от -стартовой линии и еще выше на 7-8 мм XXX,а над ним хлорзг-идрата трйметиламина. Проявление хроматограммы просветляют 65%-ным иммерсионным маслом в гексане или петролейном эфире и измеряют оптическую, плотность участков, содержащих пятна хлорхолинхлорида, (Относительно соответствующих участков пластинки под пятнами при длине волны 730+10 нм на спектрофотометре. (СФ-16). Полученную величину оптической плотности переводят в количество мкг XXX по калибровочному графику, предварительно построенному по результатам фотоколориметрирования хроматограмм стандартных растворов чистого XXX. Градуировочный (калибровочный) график строят следующим образом. На аналитических весах взвешивают 1 г хлорхолинхлорида с точностью до 0,01 г. Навеску переносят в мерную колбу на 200 мл и растворяют в 1%-ной соляной, кислоте. Объем доводят до метки. С помощью бюретки переносят в 4 мерные колбы на 100 мл соответственно 1, 4, 7 и 10 мл полученного стандартного раствора XXX и разбавляют до 100 мл дистиллированной водой.. . 50 г катионитовой смолы типа КУ-2-8 разматывают на шаровой мельнице и просеивают через сито с отверстиями 0,1 мм. 40 г измельченной смолы переносят в коническую колбу на 250 мл,заливают 100 мл ОД н. NaOH и взбалтывают 1 ч. Затем суспензию переносят на бумажный фильтр в воронку Бюхнера и промывают дистиллированной водой до нейтральной рН. Зава:ривают 1 г крахмала или ,,поливинилового спирта в 15-20 мл дистиллированной воды,охлаждают, разбавляют дистиллированной водой до 110 мл, засыпают катирнообмённую смолу, переведенную в Na -форму, и перемешиваю Полученную однородную массу наносят слоем толщиной 0,20-0,25 мм на стек лянные (1-1,5 з«l) или полистироловы (0,20 мм) пластинки, предварительно нарезанные размером 70x100 мм и суш на воздухе 12-14 ч. На приготовленнгЗх таким образом тонкослойных катионитовых пластинах поверх катионита параллельно одной из меньших сторон и на расстоянии 15 мм от нее мягким карандашом проводят стартовую линию, на которой размечают зоны нанесения стандартных растворов шириной 5 мм и интервалами 10 мм (4 зоны). С помощью микропипеток на размеченные зоны наносят разбавленные стандартные растворы по 0,01 мл в порядке увеличени концентрации, что составит градацию количества XXX по зонам соответствен но 0,5:2,0; 3/5 и 5,0 мкг. Нанесение осуществляют путем многократного касания крнца микропипетки с катионитом вдоль стартовой линии в границах размеченной зоны, с промежуточны высушиванием под феном. В хроматографическую камеру наливают 23%-Hyi6 Ч ерную (или 4%-ную соля:ную) кислоту слоем 5-7 мм и, ставят в нее хроматографические пластинки на ребро, вдоль которого нанесен хлорхолинхлорид. После продвижения фронта раствора кислоты на.высоту 80 мм от стартовой линии пластинки вынимают из камеры, обтирают фильтро вальной бумагой капли раствора кислоты и сушат под феном в течение 10-20 с. Для проявления хроматограмм пластинки опускают на 2/3 высоты в 11Sный раствор фосфорномолибденовой кис лоты, который предварительно готовят в химическом стакане на 400 мл в количестве 300 мл. Выдержав 2-3 с в проявителе, пластинки вынимают,дают стечь избытку раствора и промывают в пяти порциях водопроводной воды по 5 мин и затем 5 мин - в дистиллированной воде. Дают стеч.ь свободной воде, поставив пластинки вертикально на фильтровальную бумагу на.3/4 мин, и обрабатывают 1%-ныгл раствором дву хлористого олова в 10%-ной соляной кислоту аналогично первой процедуре. Ополаскивают проявленные пластины в водопроводной воде и сушат под феном до воздушно-сухого состояния, предварительно дав стечь свободной воде. Ка светло-голубом фоне образуются темно-синие пятна комплекса хлорхолинхлорида с фосфорномолибденовой кислотой на расстоянии 14-15 мм от стартовой линии (Rf 0,20 + 0,01). Другие соли аминов - холинхлорид и хлоргидрат триметиламина не мешают определению ( равны 0,34±0,01 и 0,36t ±0,01 соответственно), а бетаин при этом способе не проявляется. Проявление хроматограммы просветляют посредством мазйов мягкой кисточкой, смеченной в 70%-ном иммерсионном масле, не менее, чем за 1 ч до измерения их оптической плотности. Одновременно с этой операцией включают спектрофотометр на прогрев. Для измерения оптической плотности хроматограмм в держатель плоских твердых образцов (имеющийся в комплексе спектрофотометров) вставляют диафрагму из тонкого картона, прессшпана, фольги или других непрозрачных материалов, окрашенны : в чёрный цвет. Содержание хлорХолинхлорида в анаЛизируемом образце вычисляют по формуле . де А - содержание хлорхолинхлорида, мг/кг или мг/л; количество хлорхолиихлорида на хроматогра1Ф1е, вычисленное по измеренной оптической, плотности и коэффициенту пропорциональности, полученного из градуировочного графика, мкг; масса анализируемого образца, г, или объем, например, воды, л; объем pacTBojja сухого остатка элюата, мл; объем раствора, нанесенный. на пластинку, мл. В таблице приведены результаты опеделения XXX. По известному .способу не достигатся полной очистки хлорхолинхлорида т холинхлорида. Поэтому результаты нализов получаются завышенными следствие присутствия холинхлорида в. отометрируемом растворе. Время определения сокращается до -3 суток.

Результат определений количества хлорхолинхлорида (XXX) в различных образцах по известному и предлагаемому способам Формула изобретения Способ колйчёс ёеййбго отйрейёлёния хлорхолинхлорида путем обработки анализируемой пробы этанолом/ упарйвйния растворителя и пропускания остатка череэ колонку с окисью алюми ййй- Споследующим элюированием хлорхолинхлорида, включающий спектрофото метрирование, отличаю-щийс eMv что, с целью сокращения времени Й Ш5йе Шёния точности определения, элюат выпаривают, сухой остаток растворяют в воде и хроматографируют в тенком ;слое катионита с последующей обработкой полученной хроматограммы 21-25%-ным раствором серной кислоты или 3-5%-ным раствором соляной кисло ты и пос ледовательной обработкой хроматограммы 10-12%-ным раствором фосфорномолибденовой кислоты и 0,81,2%-ным раствором двухлористого олова и просветлением полученной хроматограммы 65-75%-ным раствором иммерсионного масла в гексане или петролейном эфире и спектрофотометрированием хроматограммы. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1. Вляим К. Колориметрический микрометод определен ия остатков ССС (хлорхолинхлорида) в зерне пшеПрикладная биохимия и микроницы. биология 1970, 1, с. 230. 2. Временные методические указания по применению и зональному производственному использованию препарата тур на землянике, МСХ, СССР,1976 (протоТип).