Способ диагностики атопической бронхиальной астмы Советский патент 1991 года по МПК G01N33/48 A61B10/00 

Изобретение относится к медицине, в частности к аллергологии, и может быть использовано для диагностики атонической (неинфекционно-аллергической) бронхиальной астмы, не осложненной бронхолегочной инфекцией, и инфекционно-зависимых неспецифических бронхолегочных заболеваний, включающий хронический неаллергический бронхит.

Целью изобретения является повышение точности способа за счет дифференциальной диагностики от неспецифических заболеваний.

Способ осуществляется следующим образом.

Больных с бронхоспатическим синдромом в анамнезе обследуют в период клинической ремиссии. Забирают 2-3 мл венозной крови в пробирку с антикоагулянтом и 0,3 мл всухую пробирку для получения сыворотки. Из крови выделяют мононукле- арные клетки в градиенте плотности и отмывают общепринятым способом Готовят

суспензию клеток в среде 199 с концентрацией (10-12)110 кл/мл, окрашивают (конечная концентрация красителя 25 мкм); перемешивают и экспонируют при комнатной температуре в течение 5 мин. Затем каплю суспензии наносят на предметное стекло, накрывают покровным стеклом, сверху наносят каплю иммерсионного масла и помещают под объектив микроскопа. Измерение интенсивности флуоресценции красителя в лимфоцитах проводят на люминесцентном микроскопе (например, серии ЛЮМАМ) с фотометрической насадкой. Максимум спектра возбуждения флуоресценции в лимфоцитах 400-420 нм, флуоресценции - 520-540 нм. Измеряют интенсивность флуоресценции 50-100 лимфоцитов, рассчитывают среднюю величину свечения для данного больного.

В сыворотке крови больных параллельно определяют концентрацию кортизола или тиреоидстимулированного гормона или оба вместе радиоиммунным методом.

со

с

о

XJ

СП

VI

ho

00

В системе координат откладывают ве личины измеренных параметров, наносят точку пересечения на плоскость. Если эта точка лежит ниже заранее обозначенной границы форм бронхоспастического синд рома, то диагностируют атоническую бронхиальную астму, а если точка лежит выше границы, то - неспецифическое заболева ние.

Границу разделения форм бронхоспа- стического синдрома в указанной системе координат строят перед началом применения способа и используют во всей последующей диагностике при неизменном режиме работы приборов.

П р и м е р 1. Мононуклеарные клетки выделяют из гепаринизированной (10 ед./мл) венозной крови больного центрифугированием в градиенте плотности фиколла-верографина при 400 g в теме- ние 40 мин, затем отмывают трижды в физиологическом растворе с фосфатным буфером (рН 7,4) и один раз в среде 199 при 200 g по 5-7 мин. Клетки ресуспендируют в среде 199 до нужной концентрации. В стек- лянной пробирке к 0,1 мл суспензии добавляют микрошприцом 1 мкл 2,5 мГ1 раствора красителя в диметилформамиде.

Измерение интенсивности его флуоресценции в лимфоцитах проводят налюминес- центном микроскопе. Освещение объекта осуществляют сверху через опак-иллюминатор и объектив.

В качестве стандарта люминесценции используют эталонную флуоресцирующую пластинку из уранового стекла ЖС 19 толщиной 0,03 мм, входящую в комплект насадки. Эталонную пластинку ставят под объектив.

В сыворотке крови концентрация корти- зола или тиреоидстимулирующего гормона определяют радиоиммунным методом. С помощью калибровочной кривой, построенной на основании радиоактивности стандартов, рассчитывают значения кон-

центрации гормонов в исследуемых пробах. Для коршзолэ граница проходит через ось ординат в точке, равной 25 мВ. и под углом 11° к горизонтальной оси, для тиреоидстимулирующего гормона - в точке, равной 41 мВ, под углом 3°.

Клинический диагноз: бронхиальная астма инфекционного генеза 1 стадии легкого течения, фаза ремиссии, сенсибилизация к аллергену домашней пыли.

П р и м е р 2, Больной, 22 г, жалобы на приступы удушья с затрудненным выдохом, кашель с небольшим количеством трудноотделяемой мокроты. Более 2 г, клинико-анам- нестические данные не позволяли уточнить диагноз. При исследовании функции внешнего дыхания выявлена положительная проба с бронхолитиком,

При измерении свечение красителя в лимфоцитах равно 61,4 мВ, концентрация кортизола в сыворотке 540 нМ/л, гормона 1,6 мМЕ/л, Точки пересечения этих координат на плоскостях для соответствующих гормонов расположены выше принятых линий деления, следовательно, у больного предполагают наличие неспецифического заболевания.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет выявить хроническую бронхиальную инфекцию у больного атопического бронхиальной астмой, что существенно влияет на дальнейшую тактику лечения.

Формула изобретения Способ диагностики атонической бронхиальной астмы путем флуоресцентного исследования лимфоцитов крови, окрашенных 3-метоксибензатроном, отличающий- с я тем, что, с целью повышения точности способа, в крови дополнительно определяют содержание кортизола или тиреоидстимулирующего гормона и при значениях кортизола 50011,7 нМ/л или тиреоидстимулирующего гормона 2,5 ±0,15 мМЕ/л диаг- носцируют заболевание.

Изобретение относится к медицине, а именно к аллергологии. Целью является повышение точности способа. Цель достигается тем, что в крови дополнительно определяют содержание кортизола или ти- реоидстимулирующего гормона. Диагностику заболевания проводят по системе расположения точек этих показателей в системе координат. Способ позволяет отдифференцировать атоническую бронхиальную астму от неспецифических заболеваний легких.