Способ определения степени тяжести травмы у детей Советский патент 1991 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, касается преимущественно травматологии.

Целью изобретения является упрощение и ускорение способа.

У больного, получившего травму, забирают 5 мл крови или 1 мл из разовой мочи и определяют в этих биологических жидкостях содержание дофамина по следующей схеме.

Первичная обработка,

Для крови - получение безбелкового фильтрата путем добавления к5-10 мл цельной, взятой с ЭДТА крови 5-10 мл 20%ТХУ. и последующего центрифугирования гомо- гената при 3000-4000 об/мин и температуре не выше +4°С.

Для мочи - к 1 мл профильтрованной мочи добавляют 9 мл бидистиллированной воды.

Хроматографическая очистка и выделение дофамина.

Полученный безбелковый фильтрат крови или разведенную мочу, доведенные 1

н.раствором аммиака до рН 8,2-8,5, пропускают через колонку с окисью алюминия со скоростью истечения 1-2 мл/мин, при этом катехол.амины и, в частности, дофамин, адсорбируется на окиси алюминия. После промывания колонки 10 мл бидистиллированной воды (рН 8,2) дофамин элю- ирует 5 мл 0,25 н.раствором уксусной кислоты.

Дополнительная очистка элюата (применяется только в случае исследования крови).

2 мл полученного с колонки элюата обрабатывают 10 мл бутанола. К бутанольной фракции добавляют 20 мл гептана и из этой органической смеси экстрагируют дофамин 2 мл 0,1 н.раствором соляной кислоты.

Окисление и спектрофлюориметрию дофамина, содержащегося в исследуемой пробе, проводят в двух параллельных пробирках: контрольной и опытной - в следующем порядке:

3 сл

SJ

о

Оч

РеагентыКонтроль

Фосфатйый буфер 0,1 М (рН 6,2-6,4)0,5

Уксуснокислый элюат мочи или соля-1 мл

нокислый элюат крови 0,1 н.раствор йода в этаноле

2,5%-ный раствор сульфида натрияЭкспозиция

(безводного) в 5Н NaOHЭкспозиция

10 н.уксусная кислота0,5 мл

0,1 н.раствор йода в этаноле.0,1 мл

Опыт 0,5мл

1 мл

0.1 мл 2 мин 2 мин 0,5 мл

Способ определения степени тяжести трэамы у детей. Изобретение относится к области медицины, касается преимущественно травматологии. Цель изобретения -упрощение и ускорение способа. Оценку тяжести травмы у детей осуществляют на основании анализа цифровых значений концентрации дофамина. Содержание его Б крови в границах 0,1-3 иг/мл или в моче 10-70 нг/мл указывает на наличие легкой-травмы, повышение концентрации дофаминэ в крови до 8-17 нг/мл или в моче до 140-380 нг/мл характеризует тяжелую (пограничную с шокогенной) травму.

После нагревания проб в водяной бане при 100°С в течение 10 мин и последующего охлаждения проводят спектрофлюоримет- рический анализ дофамина при длине волны возбуждающего света 330 нм и эмиссии 375 нм.

Параллельно исследуемым пробам обрабатывают стандартный раствор дофамина, концентрации 20 нг/мл.

Расчет концентрации дофамина в исследуемой пробе крови или мочи проводят по следующей формуле:

„ (А-а)х20хУЭл. К(B-b)xV

где (А-а) - величина флюоресценции исследуемой пробы за вычетом ее неспецифической флюоресценции (контроля а);

(В-Ь) - величина флюоресценции стандартного раствора дофамина за вычетом контроля на реактивы (Ь);

20 - концентрация стандарта дофамина, нг/мл;

. V - объем крови (5) или мочи (1 мл), взятый для исследования;

N/эл. - объем уксуснокислого элюата, полученного с колонки (5 мл).

Результаты биохимического исследования уровня эндогенного дофамина в крови и моче практически здоровых детей и детей с легкими и тяжелыми травмами представлены в таблице.

В скобках указаны границы индивидуальных колебаний концентрации дофамина в крови и моче детей в различных обследованных группах.

Результаты сопоставительного анализа исследований показывают, что определение метанефрина и норметанефрина в крови составляет 120 мин (известный), а в

предлагаемом способе определение для дофамина в крови необходимо 70 мин, в моче 35 мин.

Для исследования в крови биохимических метаболитов требуется 20 мл венозной крови (известный), а в предлагаемом способе лишь 5-10 мл и разовая порция мочи 1 мл. Как следует из изложенного изобретение более эффективно в плане клинико-лабораюрной практики, поскольку дает возможность использовать в целях диагностики различные биологические жидкости: кровь или мочу.

Точность метода определения дофамина в крови составляет около 10%, в моче 2,1 % (предлагаемый), в то время, как ошиб- ка метода определения метанефрина в крови составляет 12,1%, норметанефрина 13,5% (известный).

Как показывает проведенный анализ метод определения дофамина является более точным, причем точность метода резко увеличивается при использовании в качестве исследуемого материала мочи вследствне высоких концентраций дофамина в этой биологической жидкости.

.Формула изобретения Способ определения степени тяжести

травмы у детей, включающий биохимическое исследование биологической жидкости, отличающийся тем, что, с целью упрощения и ускорения способа, в крови или в разовой порции мочи определяют концентрацию дофамина и при содержании его в крови в пределах 0,1-3,0 нг/мл или в моче 1,0-70,0 кг/мл определяют легкую травму, а при концентрации его в пределах 8,0-17.0 нг/мл в крови или 140-380 нг/мл в моче

определяют тяжелую (пограничную с шоко- ген ной) травму.