Способ определения микобактерий туберкулеза в диагностической пробе Советский патент 1991 года по МПК G01N33/48 A61B10/00 

Изобретение относится к медицине, в частности к микробиологии, и может быть использовано во фтизиатрии при проведении микробиологических исследований.

Целью изобретения является повышение точности и разрешающей способности бактериоскопического определения микобактерии в диагностическом материале.

Способ осуществляют следующим образом.

Диагностический материал (мокроту больного) гомогенизируют в присутствии 10%-ного раствора МэзРО 1 (добавляют равный объем 1:1) при интенсивном встряхивании со стеклянными бусами в течение 30 мин. Гомогенат нейтрализуют HCI до рН 7,0. К обработанному материалу добавляют взвесь феррочастиц. Используют высокодисперсный порошок феррочастиц. полученный плазмохимическим .способом, с размером частиц 50-100 А и удельной поверхностью 100-130м2/г. Гидрозольфер- рочастиц (0,1-0,2%) получают в фосфатно- солевом буфере непосредственно перед исследованием путем ультразвуковой обработки суспензии феррочастиц в течение 3-5 мин на стандартном ультразвуковом диспергаторе УЗДН-2Т при частоте колебаний 22 кГц, мощности излучения 80-100 Вт/см . Озвученную ферросуспен- зию инкубируют при комнатной температуре с гомогенизированным материалом в течение 1 ч при встряхивании.

Пробирку с исследуемым материалом помещают на 10-15 мин в поле постоянного магнита размером 40x40x10 мм , выполненного из сплава SuCos с напряженностью на

О 00

ь о

о

поверхности 103-2 10 Э с градиентом поля от 500 до 1000 Э/см.

При отсутствии магнитной ловушки, создающей необходимое магнитное поле для осаждения феррочастиц, осуществление способа возможно путем концентрирования феррочастиц центрифугированием на обычных центрифугах (1,5-2 тыс. об/мин). Полученный осадок наносят на предметные стекла в виде мазков, которые фиксируют при 80°С в течение 1 ч. Мазки окрашивают люминесцентным красителем на основе аурамина и родамина С, обесцвечивают 3%-ным раствором HCI на 70° этаноле, докрашивают 0,025%-ным раствором метиленового синего. Микроскопию мазков проводят на микроскопе ЛЮМАГИ и определяют флюоресцирующие золотисто-желтые микробные палочки при просмотре не менее 100 полей зрения.

П р и м е р 1. Исследовали мокроту больного туберкулезом. К мокроте добавляли равный объем 10%-ного раствора МазРОз. Гомогенизировали при встряхивании со стеклянными бусами 30 мин. Нейтрализовали гомогенат HCI до рН 7,0. К 9 мл обработанного материала добавляли 1,5 мл 0,2%-ной ферросуспензии, приготовленной ex tempore путем озвучивания в течение 3-5 мин водной суспензии феррочастиц размером 50-100 А (полученных плазмохи- мическим способом) на ультразвуковом диспергаторе УЗДИ-2Т мощностью 80- 100 Вт/см с частотой колебаний 22 кГц. Инкубировали при комнатной температуре при встряхивании в течение 1 ч. Пробирку с исследуемым материалом помещали на 10- 15 мин в поле постоянного магнита размером 40x40x10 мм3, выполненного из сплава SmCos, напряженностью 2000 Э. Полученный осадок наносили на предметные стекла в виде мазков, высушивали и фиксировали при 80°С в течение 1 ч. Окрашивали люминесцентным красителем (аурамин 00 + родамин С), обесцвечивали 3%-ным раствором HCI в 70° этаноле, докрашивали раствором метиленового синего.

При люминесцентной микроскопии мазков, приготовленных указанным способом, выявлено 15 МВТ, что позволило диагностировать туберкулез. При просмотре мазков, подготовленных после традиционной обработки материала, получен отрицательный результат.

П р и м е р 2. Мокроту больного туберкулезом предварительно гомогенизировали

10-ным МазРО и нейтрализовали HCI. К 9 мл гомогенага добавляли 1,5 мл 0.2%- ный ферросуспензии, приготовленной ех lempore путем озвучивания в течение

3-5 мин воднрй суспензии феррочастиц размером 600 А (полученных плазмохимиче- ским способом) на ультразвуковом диспергаторе УЗДН-2Т мощностью 80- 100 Вт/см2, частотой 22 кГц. Смесь инкубировали при встряхивании в течение 1 ч. Магнитное концентрирование проводили в течение 10-15 мин, помещая пробирку с диагностическим материалом в поле постоянного магнита, выполненного из сплава

SmCos, напряженностью 2000 Э. Приготовленные из осадка мазки фиксировали и окрашивали люминесцентным красителем как о примере 1. При люминесцентной микроскопии мазков, приготовленных указанным

способом, а также по методу прототипа, МВТ не обнаружены. Однако при исполь о- нании феррочастиц размером 50-100 А с соответствующей ультразвуковой обработкой и последующей люминесцентной микроскопией осадка феррочастиц выявлены бактерии в значительном количестве. При посеве диагностического материала на плотную питательную среду также получен положительный результат (обильный рост

колоний микобактерий). Подтвержден диагноз туберкулеза.

Таким образом, использование предлагаемого способа концентрирования микобактерий при бактериоскопическом

анализе клинических образцов мокроты обеспечивает увеличение числа положительных результатов по сравнению с прототипом. Кроме того, способ позволяет повысить чувствительность экспрессного

бактериоскопического выявления бактерий при ранней диагностике туберкулеза,

Формула изобретения

Способ определения микобактерий туберкулеза в диагностической пробе путем eie гомогенизации, осаждения, приготовления мазков с последующим их окрашиванием аурамином, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа путем концентрации микобактерий, пробу до осаждения инкубируют в течение 20-60 мин в водной суспензии феррочастиц размером

Е 0-100 А, предварительно озвученных ультразвуком мощностью 80-100 Вт/см.

Изобретение относится к медицине, а именно к пульмонологии. Целью изобретения является повышение точности способа за счет концентрации бактерий в пробе. Пробу инкубируют в течение 20-60 мин в водной успензии феррочастиц размером 50-100 А, предварительно озвученных ультразвуком мощностью 80-100 Вт/см. Далее бактерии осаждают, готовят мазки, окрашивают и исследуют под микроскопом. Способ позволяет выявить микобактерии в небольшом количестве экссудата.