Полимерный реагент для ковалентной иммобилизации сывороточного альбумина и способ его получения Советский патент 1991 года по МПК C08F212/14 C08F8/34 C12N11/08 C08F212/14 C08F212/08 

Изобретение относится к химии полимеров, а именно к полимерному реагенту для ковалентной иммобилизации сывороточного альбумина и к способу его получения, и может быть использовано в химической энзимологии и биотехнологии.

Цель изобретения - повышение количества иммобилизированного сывороточного альбумина и упрощение способа получения полимерного реагента.

В качестве исходного полимера использован блочный полистирол в виде гранул..

Пример1.5г промышленного блочного полистирола с мол.м. 270000 растворяют в 100 мл монохлордиметилового эфира, прибавляют 0,6 г безводного хлористого цинка и кипятят 8 ч. Затем реакционную смесь разбавляют водным диоксаном, нижний слой, содержащий монохлордиметиловый эфир, отделяют, а раствор хлорметили- рованного полистирола в диоксане медленно приливают в воду (или 70%-ный водный метанол). Осадок отфильтровывают, промывают дистиллированной водой до исчезновения ионов хлора и высушивают при комнатной температуре. Получают белый, порошок в количестве 4,97 г(75% от теории), растворимый в ацетоне, диоксане, метилэтилкетоне, бензоле, толуоле. Найдено: CI 13,5%. ИК-спектр наряду с полосами поглощения СН-, СН2-групп и бензольного кольца показывает четкую полосу поглощения C-CI- связи при 1260 , отсутствующую в ИК- спектре исходного полистирола. Степень замещения полистирола 58%. Мол.м. 300000.

Смесь 1,5225 г (0,01 осново-моль) хлор- метилированного полистирола, получениеС 00

ел

2

00

го по примеру 1, и 1,94 г (0,02 моль) роданида калия кипятят при 81°С в 25 мл аце- тонитрила в течение 10 ч. Осадок отфильтровывают, многократно промывают водой и высушивают при остаточном давлении 0,2 мм рт.ст, при 30°С, получают 1,696 г полимерного реагента.

Найдено, %: N 3,68; CI 2.75, что соответствует 46 мол.% звеньев 4-(изоти- оцианометил)винилбензола, 12 мол.% 4-{хлорметил)винилбензола и 42 мол.% ви- нилбензола. ИК-спектр показывает интенсивную полосу поглощения в области 2160 (колебания группы ) и слабоинтенсивную полосу поглощения в области поглощения 1260 см (колебания группы -H2C-CI).

Ковалентное связывание сывороточного альбумина на полученном полимерном реагенте осуществляют при (21 ± 1)°С в боратном буферном растворе с рН 8,45 в течение 48 ч, используя массовое соотношение полимер: белок, равное 100:50 мг. Количество иммобилизованного белка определяют двумя методами: спектрофото- метрическим по оптической плотности растворов белка при 280 нм и методом Лоури по поглощению при 750 нм (спектрофотометр СФ-46). Количество иммобилизованного белка в данном примере составляет 94 мг на 1 полимерного реагента.

Примеры 2-9. Данные приведены в таблице.

Формула изобретения

1. Полимерный реагент общей формулы

i- -fchVCH

1

где х 46-54 моль.%;

у «3-12 мол.%;

z-42-43 мол.%;

k - 2400-2900,

для ковалентной иммобилизации сывороточного альбумина.

2. Способ получения полимерного реагента для ковалентной иммобилизации сывороточного альбумина общей формулы

-fCH2-CH:

где х 46-54 мол.%;

у 3-12 мол.%;

z 42-43 мол.%;

k 2400-2900,

нагреванием хлорметилированного полистирола со степенью полимеризации 2400- 2900 и степенью хлорметилирования 57-58% с роданидом калия в ацетонитриле, изопропаноле, метилэтилкетоне или ацетоне при температуре кипения растворителя в течение 10-20 ч.

Изобретение относится к химии полимеров и позволяет создать полимерный реагент с повышенной способностью к кова- лентной иммобилизации сывороточного альбумина (94-110 мг белка на 1 г полимерного реагента), что достигается новой структурой вещества общей формулы {-f СН2 - СН (СбН4СН2 NCS)uf СН2 - -СН (СеН4 CH2CI) СН2 - СН (CeHsHzгде х 46-54 мол.%, у 3-12 мол.%. z 42-43 мол.%, k 2400-2900, а также способом его получения, заключающемся в нагревании хлорметилироранногс полистирола со степенью полимеризации 2400-2900 и сте- пению замещения 57-58% с роданидом калия в ацетонитриле,ацетоне, изопропаноле или метилэтилкетоне при температуре кипения растворителя в течение 10-20 ч. 1 табл, Ё