Способ дифференциальной диагностики ревматизма и пограничных с ревматизмом заболеваний стрептококковой этиологии у детей Советский патент 1991 года по МПК G01N33/53 

СО

с

Изобретение относится к медицине, а именно х педиатрии, ревматологии, и может быть использовано в клинической практике для дифференциальной диагностики ревматизма и пограничных с ревматизмом заболеваний стрептококковой этиологии у детей. Цель - повышение точности способа. Исследуют показатель хемотаксиса нейтрофилоа к стрептолизину-0, вычисляют хемо- таксический индекс и при уровне его, равном и выше 200%, диагностируют ревматизм, а при значении меньше 200% диагностируют пограничные с ревматизмом заболевания стрептококковой этиологии. Точность способа возрастает на 31 -50% по сравнению с прототипом. 3 табл.

Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии, ревматологии, клинической иммунологии, и может быть использовано в клинической практике для дифференциальной диагностики ревматизма и пограничных с ревматизмом заболеваний стрептококковой этиологии у детей.

Цель изобретения - повышение точности диагностики.

Способ осуществляют следующим образом.

У больного берут из вены 2 - 3 мл крови в стерильную силиконированную пробирку с гепарином. Добавляют питательную среду (199, Хенкса, Игла) в отношении 1:1. На двойном градиенте фиколлверографин центрифугированием при 1800 об/мин, температуре 4°С в течение 30 - 40 мин выделяют субпопуляцию полиморфноядерных лейкоцитов (ПЯЛ) (нейтрофилов). Лейкоциты трижды отмывают питательной средой с последующим центрифугированием (1000 об/мин, в течение 10-15 мин). Лейкоциты используют в концентрации 1 - 2x106 в 1 мл взвеси.

В качестве хемоаттрактанта используют высушенный лиофильным методом экстракта бульон ной культуры гемолитического стрептококка - стрептолизин-0 (НИИ вакцин и сывороток, г.Ленинград). Препарат разводят средой Хенкса в обьеме 6 мл, при этом 0.3 мл его содержат 1 гемолитическую единицу стрептолизина-0. В реакции хемотаксиса используют стрептолизин-0 с активностью в 0,25 гемолитической единицы

Реакцию хемотаксиса определяют в камере Бойдена модифированным методом И.С.Подосинникова с соавт. В качестве контроля используют питательную среду с добавлением 5% эмбриональной телячьей сыворотки, определяя спонтанную подвижность нейтрофилов (хемокинез).

о ю

N

СП

Хемокинез и хемотаксис к стрептолизи- ну-0 определяют путем подсчета лейкоцитов под микроскопом в пяти полях зрения в выведения отношения между количеством клеток, находящихся на старте и прошедших через фильтр. Показатели выражают в условных единицах.

Хемотаксический индекс определяют по формуле

ХИ

XT к СО . ХК

X 100 % ,

где ХИ - хемотаксический индекс, %: XT - хемотаксис в условных единицах;

ХК - хемокинез в условных единицах;

СО - стрептолизин-0.

При значении ХИ к СО, равном и выше 200%, диагностируют ревматизм, а при значении его меньше 200% диагностируют пограничные с ревматизмом заболеваний стрептококковой зтиологии.

Способ подтверждается следующими примерами.

П рим ер 1. Больная Ш., 8 лет(№ 7673) поступила в кардиоревматологическое отделение с жалобами на повышение температуры до 37,8°С, слабость. В анамнезе частые ОРВИ, ангина. За 2 недели до настоящего заболевания перенесла ангину, после которой появились выше описанные симптомы. При поступлении состояние удовлетворительное. Температура нормальная, кожные покровы бледные. Пульс 88 в минуту, АД 110 мм рт.ст. Физикальные методы исследования выявляют неубедительное смещение левой границы сердца на 0,5 см к наружи, ослабление 1 тона, у верхушки выслушивается систолический шум неопределенного характера. Больная была обследована по заявляемому способу. Из вены брали 3 мл крови в стерильную сили- конированную пробирку с гепарином. Добавляли питательную среду 199 в отношении 1:1. На двойном градиенте фи- колл- верографии центрифугированием при 1300 об/мин s течение 40 мин выделяли субпопуляцию ПЯЛ (нейтрофилов). ПЯЛ трижды отмывали питательной средой 199 с последующим центрифугированием в течение 15 мин при 1000 об/мин. Брали взвесь ПЯЛ в концентрации 1 - 2x10 в 1 мл. В качестве хемоаттрактанта брали СО, разведенный средой Хенкса, в дозе 0,25 гемолитической единицы. Реакцию хемотаксиса ставили в камере Бойдена, мспользуя в качестве контроля среду 199 с эмбриональной телячьей сывороткой. Подсчитывали хемотаксис э 5 полях зрения с последующим расчетом хемотаксическиго индекса по формуле. Значение ХИ к СО составляло 199,7%. Это позволило поставить предварительный диагноз ревматизма.

Для сравнения больнал была обследована по способу-прототипу. Сыворотка от 3 мл крови в разных разведениях смешивалась со трептолизином-0, инкубировалась 25 мин, затем к ней добавлялись эритроциты барана, которые разрушались несвязан0 ным СО. Разведения сравнивали со стандартом, умножали соответствующее разведение на 0,5. Полученное значение титра АСЛ-0 625 АЕ достоверно отличается от нормального (250 АЕ) и может с равной

5 вероятностью свидетельствовать о ревматизме и любом другом стрептококковом заболевании.

Обследование в динамике через 4 недели выявило значение ХИ к ,9% и

0 титра АСЛ-0 250 АЕ. Данные, полученные при использовании заявляемого способа, позволили достоверно диагностировать ревматизм, тогда как данные, полученные по способу - прототипу, свидетельствуют об

5 отсутствии и ревматизма, и другой стрептококковой инфекции.

Контрольное комплексное клинико-инс- трументальное обследование (семиотика, лабораторные данные, данные ЭКГ, ФКГ и

0 рентгенографии) и наблюдение в динамике подтвердило наличие у больной активного ревматизма с поражением сердца. Данные контрольного обследования таким образом подтвердили диагноз, поставленный заяв5 ляемым способом,

П р и м е р 2. Больная К., 14 лет (№ 9788) поступила в кардиоревматологическое отделение с жалобами на недомогание, слабость, Анамнез без особенностей. 2 недели

0 назад перенесла фолликулярную ангину. Настоящее заболевание характеризовалось повышением температуры до 38 С и появлением указанных выше жалоб. Перкуторно границы сердца не изменены, I тон у вер5 хушки ослаблен, выслушивается дополнительный III тон. Здесь же выслушивается систолический шум, достаточно интенсивный, тембр которого меняется в зависимости от перемены положения тела.

0 Определение ХИ к СО проводили аналогично примеру 1. Значение ХИ составило 75%, Это позволило поставить диагноз реконва- лесцент ангины. Определение титра антител проводили аналогично примеру 1.

5 Значение АСЛ-0 составило 625 Ае. Это свидетельствует либо о ревматизме, либо о рецидивирующей острой стрептококковой инфекции. При повторном обследовании через 3 недели ХИ к СО составлял 127%, титр АСЛ-0 - 625 АЕ. Достоверных данных за

ревматизм нет. Комплексное контрольное обследование с использованием биохимических показателей, ЭКГ, ФКГ и данных рентгенографии позволило поставить диагноз: реконвалесцент ангины, вегетососуди- стая дистония пубертатного периода, пролапс митрального клапана. Таким образом, контрольное обследование подтвердило поставленный диагноз заявляемым способом.

П р и м е р 3, Больной Д., 13 лет(№ 174). 3 года назад перенес атаку ревматизма. На момент обследования жалуется на летучие боли в суставах. Состояние удовлетворительное. Суставы не изменены. Границы сердца в пределах возрастной нормы. I тон ослаблен, на верхушке выслушивается мягкий систолический шум. Со стороны других органов изменений не выявлено. Определение ХИ к СО проводили аналогично примеру 1. Значение ХИ составило 459,8%. Это позволило поставить диагноз активного ревматизма с поражением сердца и суставов. Определение титра антител к СО проводили аналогично примеру 1. Титр АСЛ-0 составил 250 АЕ, значение этого показателя не позволяет поставить диагноз не только ревматизма, но и доказать наличие в организме стрептококковой инфекции. Ребенок был госпитализирован в стационар, где проведенное комплексное клинико-лаборатор- но-инструментальное обследование подтвердило диагноз активного ревматизма с поражением сердца и суставов,

Таким образом, клинические примеры достаточно убедительно демонстрируют преимущества предлагаемого способа в дифференциальной диагностике ревматизма и пограничных с ревматизмом заболеваний стрептококковой этиологии.

Доказательства достижения положительного эффекта.

Для доказательства специфичности предлагаемого способа дифференциальной диагностики ревматизма и пограничных с ревматизмом заболеваний стрептококковой этиологии были проведены дополнительные экспериментальные исследования больных детей с достоверными диагнозами.

Были обследованы следующие группы больных детей.

I группа: больные дети с достоверным диагнозом ревматизма (диагноз установлен на основании комплексного клинико- лабораторного, функционального и инструментального исследования, а также наблюдения в катамнезе и динамике) - 77 человек.

IIгруппа: больные с пограничными заболеваниями стрептококковой этиологии, например, узловая эритема, реактивный артрит, стрептококковый миокардит и другие

(диагноз установлен на основании комплексного исследования)- 30 человек.

IIIгруппа: больные с хроническим тонзиллитом (диагноз установлен на основании комплексного обследования, включая ос0 мотр специалистов) - 13 человек.

IY группа: больные, имеющие изменения в сердечно-сосудистой системе невоспалительного характера (функциональные кар- диопатии).

5 Диагноз установлен на основании комплексного исследования, включая определение исходного вегетативного статуса, электрокардиографию с функциональными пробами, осмотр специалистов, - 26 человек.

0 Y группа: (контрольная) - здоровые дети - 18 человек.

Все больные были обследованы с использованием предлагаемого способа, способа - прототипа, основанного на опре5 делении титра антител к стрептолизину-0 и способа, основанного на определении хе- мотаксического индекса к казеинату натрия. Диагностическим критерием предлагаемого способа являлось значение хемотак0 сического индекса к стрептолизину-0 (ХИ СО) больше 200%, способа-прототипа - значение титра антител к антистрептолизину-0 (АСЛ-0) выше способа-аналога - ХИ каз,нат. 218,2 ± 19,1% (превышение ис5 ходного значения за пределы доверитель- ного интервала).

Сравнительная оценка диагностических возможностей различных способов обследования больных с достоверным диагнозом

0 представлена в табл.1.

Из данных табл.1 видно, что только предлагаемый способ обеспечивает специфическую диагностику ревматизма с высокой точностью (99%) и позволяет от5 дифференцировать ревматизм от других заболеваний стрептокковой этиологии. Предлагаемый способ не позволил поставить диагноз ревматизма только у очень небольшой части больных (1 %), как правило,

0 это больные с нейроревматизмом. Способ- прототип не обеспечивает специфичности диагностики ревматизма и не обеспечивает возможность дифференциальной диагностики, так как является показателем

5 ответной реакции организма на любую стрептококковую инфекцию. Титр антител выше диагностического уровня, как правило, наблюдался при заболеваниях острой стрептококковой инфекцией (II группа боль- ных). У больных с латентным и непрерывно

рецидивирующим течением ревматизма титр антител, как правило, оставался ниже диагностического (у 51 %) и не позволил использовать его в качестве диагностического критерия ревматизма.

При использовании способа-аналога, основанного на определении хемотаксиче- ского индекса к казеинату Na, достоверное повышение ХИ казеината Na выше диагностического наблюдалось только в группе больных с острой стрептококковой инфекцией (20%) и у 2,-х больных с хроническим тонэилитом (15%). Поэтому указанный способ не может быть использован для дифференциальной диагностики ревматизма и других стрептококковых заболеваний.

Высокие диагностические возможности заявляемого способа и его специфичность можно объяснить тем, что предлагаемый способ основан на определении эффектор- ного звена клеточного ответа иммунной системы в отличие от способа-прототипа, который позволяет фиксировать гуморальную неспецифическую реакцию иммунного ответа организма. Поэтому, именно использование заявленного информативного параметра (хемотаксический индекс к стрептолизину-0) приводит к появлению нового свойства - возможности выявления генетически детерминированного клеточного дефекта, специфического для ревматизма, что позволяет повысить точность дифференциальной диагностики ревматизма и других стрептококковых заболеваний по сравнению со способом-прототипом,

8 табл.2 представлены доказательства уникальности хемотаксиса иейтрофилов к стрептолизину-0 при ревматизме.

Были обследованы больные дети с достоверными диагнозами, распределенные на пять групп. Достоверность результатов определяли по критерию Стьюдента (Т).

Из данных табл.2 видно, что значения ХИ СО достоверно отличается от порогового уровня контрольной группы только у больных ревматизмом, что свидетельствует о наличии гиперрективности ПЯЛ к СО при ревматизме и наличии хемотаксической деактивации ПЯЛ к СО при пограничных с ревматизмом заболеваниях стрептококковой этиологии.

Значения хемотаксического индекса полиморфноядерных лейкоцитов (ПЯЛ) и стрептолизину-0 при различных нозологических формах заболевания даны.в табл.2.

Для доказательства уникальности выявленного свойства - гиперреактивности ПЯЛ (нейтрофилов) при ревматизме были рассмотрены изменения других иммунологических показателей, характеризующих иммунный ответ организма на клеточном уровне при ревматизме и пограничных с ревматизмом заболеваний стрептококковой этиологии. Были обследованы следующие группы больных детей: I группа - больные дети с достоверным диагнозом ревматизм, 15 чел; I группа - больные дети с пограничными с ревматизмом заболеваниями стрептококковой этиологии (наличие стрептококковой инфекции подтверждено определением титра антител к СО), 13 чел; III группа - контрольная группа (здоровые дети), 18 чел.

Наряду с определением ХИ к СО (заявляемый способ) исследовали реакцию бла- сттрансформации лимфоцитов (РБТЛ) в присутствии СО и реакцию розеткообразо- вания лимфоцитов, Из табл.3 видно, что в значениях показателей РБТЛ и розеткообразования при ревматизме и пограничных состояниях стрептококковой этиологии отсутствуют достоверные различия, тогда как ХИ к СО значимо выше в группе больных ревматизмом по сравнению с группой

больных пограничным ревматизмом заболеваниями стрептококковой этиологии. Это подтверждает уникальность выявленного специфического свойства нейтрофилов при ревматизме, положенного в основу дифференциальной диагностики.

Сравнительная характеристика изменения иммунологических показателей, характеризующих иммунный ответ организма на клеточном уровне, при ревматизме и пограничных с ним заболеваниях стрептококковой этиологии представлена в табл.3.

Таким образом, использование предлагаемого способа позволяет повысить точность дифференциальной диагностики на

30 - 51 % по сравнению со способом-прототипом за счет возможности выявления генетически детерминированного клеточного дефекта, специфического для ревматизма.

Формула изобретения

Способ дифференциальной диагностики ревматизма и пограничных с ревматизмом заболеваний стрептококковой этиологии у детей путем исследования иммунологического показателя, отличающийся тем, что. с целью повышения точности диагностики, в качестве иммунологического показателя используют хемотаксический индекс нейтрофилов к

стрептолизину-0, и при значении индекса, равном или выше 200%, диагностируют ревматизм, при значении его меньше 200% диагностируют пограничные с ревматизмом заболевания стрептококковой этиологии.

Таблица 1

Таблица 2

Таблица 3