СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ТЯЖЕСТИ СИСТЕМНОЙ ВОСПАЛИТЕЛЬНОЙ РЕАКЦИИ В ОРГАНИЗМЕ ЧЕЛОВЕКА ПРИ ЗАБОЛЕВАНИЯХ Российский патент 2023 года по МПК G01N33/50 G01N33/53 

Изобретение относится к медицинской иммунологии, инфекционным заболеваниям, и может быть использовано для прогнозирования тяжести системной воспалительной реакции путем определения комплемент активирующей функции анти-АВ антител и гиперактивности системы комплемента.

Большинство пациентов, заболевших тяжелой формой Covid-19, находятся в критическом состоянии из-за развития острого респираторного дистресс-синдрома (ОРДС). Ухудшение функции легких объясняется дезадаптивным иммунным ответом, а не повышенной вирусной нагрузкой. Одна из теорий заключается в том, что активация резидентных иммунных клеток в легких посредством распознавания рецепторов стимулируют высвобождение провоспалительных цитокинов, выход нейтрофилов и моноцитов из сосудистого русла в бронхи. Эти клетки могут нарушить барьер между воздухом и кровью, вызывая повреждение коллатеральных тканей, особенно эпителиальных клеток дыхательных путей и эндотелиальных клеток сосудов, которые экспрессируют рецептор входа, ангиотензин-превращающий фермент 2 (АСЕ2) для вируса SARS-CoV-2. Повреждения клеток эндотелия сосудов могут быть причиной тромботических микроангиопатий.

В недавних исследованиях SARS-CoV, которые тесно связаны с SARS-CoV-2, было показано, что активация компонента комплемента С3 обостряет заболевание при ОРДС, ассоциированном с SARS-CoV-2. С3-дефицитные мыши, инфицированные SARS-CoV, имели меньше респираторных дисфункций, несмотря на эквивалентную вирусную нагрузку в легких, и это было связано с уменьшением инфильтрации легких нейтрофилами и моноцитами, более низким уровнем цитокинов и хемокинов в легких и в сыворотке крови [Gralinski, L. Е. et al. Complement activation contributes to severe acute respiratory syndrome coronavirus pathogenesis. mBiohttps://doi.org/10.1128/mBio.01753-18 (2018)]. Полученные данные свидетельствуют о том, что ингибирование ключевого компонента С3 комплемента может также уменьшить воспалительные легочные повреждения, обусловленные SARS-CoV-2 инфекцией. Заметное снижение инфильтрации легких нейтрофилами и снижение уровней как внутрилегочного, так и плазменного IL-6, наблюдаемый у инфицированных SARS-CoVC3-дефицитных мышей предполагает возможность комбинирования ингибиторов С3 в схемах лечения для снижения уровня IL-6. Более того, восходящее позиционирование передачи сигналов С3 во врожденном иммунном каскаде также свидетельствуют в пользу более широкого противовоспалительного потенциала блокады С3 с такими агентами как компстатин (AMY-101) [Mastellos, D.С., Ricklin, D., Lambris, J. D. Clinical promise of next-generation complement therapeutics. Nat. Rev. DrugDiscov.18, 707-729 (2018)], который в настоящее время проходит испытания у пациентов с COVID-19. Подавление активации С3 вызывает блокаду генерации С3а и С5а анафилатоксинов, а также внутрилегочной активации С3 и высвобождению IL-6 из альвеолярных макрофагов или других клеток, экспрессирующих С3а рецепторы (C3aR) и/или рецепторы С5а (C5aR), тем самым снижая повреждение легких.

Ex vivo инфицирования цельной крови SARS-CoV в присутствии ингибитора С3, AMY-101, показали, что это препятствует высвобождению IL-6 [Mastellos, D.С., Ricklin, D., Lambris, J. D. Clinical promise of next-generation complement therapeutics. Nat. Rev. DrugDiscov.18, 707-729 (2018)].

Хотя роль активации комплемента в патофизиологии ОРДС, вызванного различными тяжелыми заболеваниями убедительно доказана, клинические же данные о роли гиперактивации комплемента в развитие ОРДС, ассоциированного с SARS-CoV-2, в настоящее время немногочисленны [Zilow, G. et al. Generation of anaphylatoxin С3а in plasma and bronchoalveolar lavage fluid in trauma patients at risk for the adult respiratory distress syndrome. Crit. CareMed. 20, 468-473 (1992)].

Недавние исследования образцов легких умерших пациентов с тяжелой формой COVID-19, показали гиперактивацию комплемента, которая характеризовалась генерацией С3а в бронхоальвеолярной жидкости, обнаружением большого количества C3b-фрагментов в тканях легких и повышением уровня С5а в сыворотке крови [Gao, Т. et al. Highly pathogenic coronavirus N protein aggravates lung injury by MASP-2-mediated complement over- activation. medRxiv Preprint at https://doi.ors/10.1101/2020.03.29.20041962 (2020)].

Важно отметить, что лечение пациентов с тяжелой формой Ковид-19 анти-С5 моноклональными антителами приводит к быстрому улучшению состояния больных с ОРДС, увеличению степени оксигенации крови и снижению системной воспалительной реакции в организме больного [Gao, Т. et al. Highly pathogenic coronavirus N protein aggravates lung injury by MASP-2-mediated complement over-activation. medRxiv Preprint at https://doi.org/l0.1101/2020.03.29.20041962 (2020)].

Ингибиторы C5 эффективно используются в клинике почти 15 лет, и их использование в клинических испытаниях при тяжелом течении SARS-CoV-2 подкреплены хорошо известной ролью оси С5а-C5aR в патофизиологии ОРДС. Однако ингибирование С5 может быть частичным, что позволяет остаточной активности терминального пути снижать эффективность при гиперактивации комплемента, который наблюдается при инфекциях. Также эти препараты не будут влиять на ось С3а-C3aR. Ингибиторы проксимального комплемента (которые нацелены на С3 или его предшествующие активаторы) могут быть более эффективными, но они все еще находятся на стадии разработки, и ни один из них не одобрен для применения, хотя имеются обнадеживающие данные фазы II клинических испытаний.

Остаются дополнительные вопросы относительно терапевтического использования ингибиторов комплемента при COVID-19. Лишь у небольшой части пациентов развивается тяжелая форма болезни в виде ОРДС. Однако надежные клинические маркеры для прогнозирования тяжести течения на ранней стадии заболевания в настоящий момент отсутствуют. Биомаркеры активации системы комплемента обычно не используются, так как большинство из них нестабильны и имеют очень короткий период полураспада [Mastellos D.C., PiresdaSilva B.G.P., Fonseca B.A.L., Fonseca N.P. et al. Complement C3 vs C5 inhibition in severe COVID-19: Early clinical findings reveal differential biological efficacy // Clin Immunol. 2020 Nov; 220:108598. doi: 10.1016/j.clim.2020.108598. Epub 2020 Sep 19. PMID: 32961333].

Повышенная функциональная активность классического пути системы комплемента свидетельствует о наличии воспалительного состояния в организме человека и является прогностическим маркером тяжести системной воспалительной реакции при COVID-19 инфекции. Данное предположение также подтверждается результатами исследования титра анти-COVID-19 антител, где убедительно показано прямая зависимость тяжести ОРДС от концентрации этих антител [Holter J.C., Pischke S.E., Elinede Boer, Andreas Lindetal. Systemic complement activation is associated with respiratory failure in COVID-19 hospitalized patients // Proc Natl Acad Sci USA. 2020 Oct 6;117(40):25018-25025. doi: 10.1073/pnas.2010540117; Noris M, Benigni A, Remuzzi G. The case of complement activation in COVID-19 multiorgan impact. Kidney Int. 2020 Aug;98(2):314-322. doi: 10.1016/j.kint.2020.05.013. Epub 2020 May 24.PMID: 32461141; Ma L, Sahu SK, Cano M, Kuppuswamy V. et al. Increased complement activation is a distinctive feature of severe SARS-CoV-2 infection // bioRxiv. 2021 Feb 23:2021.02.22.432177. doi: 10.1101/2021.02.22.432177; Vitiello A, La Porta R, D'Aiuto V, Ferrara F. Pharmacological approach for the reduction of inflammatory and prothrombotic hyperactive state in COVID-19 positive patients by acting on complement cascade // Hum Immunol. 2021 Jan20:S0198-8859(21)00014-8. doi: 10.1016/j.humimm.2021.01.007]. Повышенный уровень антител с высокой комплемент-активирующей функцией является причиной неконтролируемой активации системы комплемента по классическому пути и как итог - полиорганная недостаточность.

Основная, первичная функция антител - связывание с антигеном, в некоторых случаях оно непосредственно ведет к достижению эффекта, обеспечивая нейтрализацию бактериального токсина или предотвращая проникновение вируса в клетки. Однако чаще взаимодействие антител с антигеном остается безрезультатным, пока они не осуществят свои вторичные, "эффекторные" функции.

К одной из эффекторных функций иммуноглобулинов относится их избирательное взаимодействие с различными типами клеток (мононуклеары, нейтрофилы, тучные клетки, базофилы) при участии специальных рецепторов клеточной поверхности (FcR) [Ройт А., Бростофф Дж., Мейл Д. Иммунология: пер. с англ. М.: Мир, 2000. - 592 с.].

Другой важной эффекторной функцией IgM, IgG1, IgG2 и IgG3 после связывания с антигеном является активация классического пути системы комплемента (СК) [Bogers W.M.J.M., Stad R-K., van Es L., Daha M.R. Immunoglobulin: Interaction with Complement, Phagocytic Cells and Endothelial Cells // Complement Inflamm. 1991. V.8. P. 347-358.]. Альтернативный и лектиновый пути активируются иммунными комплексами (ИК), содержащими IgA [Roos A., Bouwman L.H., van GijIswijk-Janssen D.J., et al. Human IgA Activates the Complement System Via the Mannan-Binding Lectin Pathway // J. Immunol. 2001. V.167. P. 2861-2868.].

Система комплемента является частью иммунной системы и состоит из многих компонентов, которые действуют каскадным механизмом. Эта система играет ключевую роль как в клиренсе ИК, так и в иммунном ответе на инфекционные агенты, чужеродные антигены, опухолевые и вирус-инфицированные клетки.

Система комплемента может активироваться тремя путями (классический, альтернативный и лектиновый).

Классический путь является Ca²⁺/Mg²⁺-зависимым каскадом, который в норме активируется при формировании ИК. С1, первый ферментный комплекс в каскаде, является пентамолекулярным комплексом. Включает одну молекулу C1q и по две молекулы C1r и C1s. С1 компонент связывается с Fc-фрагментом иммуноглобулинов в ИК через C1q домен и инициирует ферментативный каскад комплемента. Как только активируется C1, C1s расщепляет компонент С4, приводя к образованию C4b, который затем связывает С2. Иммобилизованный компонент С2 расщепляется при помощи фермента C1s с образованием С3-конвертазы (C4b, С2а) классического пути.

Альтернативный путь является Mg²⁺-зависимым и активируется рядом разнообразных веществ, включающих полисахариды клеточных стенок дрожжей и бактерий, определенные биополимерные материалы. При иммобилизации C3b на поверхности на него садится фактор В, который расщепляется фактором D и образуется С3-конвертаза (C3b, Bb) альтернативного пути.

Лектиновый путь активирует комплемент при помощи маннан-связывающего лектина (MBL) через две сывороточные протеазы (MASP-1 и MASP-2) (подобно с C1r и C1s в классическом пути активации комплемента). MBL связывается с клеточными стенками патогенов, содержащих маннозу. Как и в классическом пути активации комплемента, для лектинового пути также требуются компоненты С4 и С2. Активация лектинового пути приводит к формированию С3-конвертазы, аналогичной с С3-конвертазой классического пути (C4b, С2а) [Ройт А., Бростофф Дж., Мейл Д. Иммунология: пер. с англ. М.: Мир, 2000. - 592 с.].

Субстратом С3-конвертазы трех путей является ключевой компонент комплемента С3, при гидролизе которого образуются С3а (анафилатоксин) и C3b (опсонин). Присоединяя дополнительно молекулу C3b, С3-конвертаза обретает способность гидролизовать компонент С5, который запускает реакцию формирования мембрано-атакующего комплекса (МАК).

При активации комплемента генерируются биологически активные фрагменты белков С3, С4 и С5 (С3а-, С4а- и С5а-анафилатоксины) и C5b-9 (МАК), которые опосредуют воспалительные активности, включающие лейкоцитарный хемотаксис, активацию макрофагов, нейтрофилов и тромбоцитов, тучных и эндотелиальных клеток, повышение сосудистой проницаемости, цитолиз и тканевое повреждение [Sahu A., Lambris J.D. Complement inhibitors: are surgent concept in anti-inflammatory therapeutics // Immunopharmacology. 2000. V.49. P.133-148].

Для исследования системы комплемента определяют его гемолитическую активность. Суть метода заключается в следующем: 1) разные разведения исследуемой сыворотки добавляют к эритроцитам барана, сенсибилизированным антителами кролика (ЕА_к); 2) степень гемолиза оценивают фотометрически по выходу гемоглобина в раствор. Активность комплемента выражают в гемолитических единицах. За одну 50% гемолитическую единицу комплемента (CH₅₀) принимают такое его количество, которое вызывает гемолиз 50% 0,5 мл стандартной суспензии ЕА_к при 37°С в течение 45 мин. В 1 мл сыворотки здоровых доноров обычно содержится 20-40 СН₅₀ [Лабораторные методы исследования в клинике: Справочник / Меньшиков В.В., Делеторская Л.Н., Золотницкая Р.П. и др.: под ред. В.В. Меньшикова. М.: Медицина, 1987. - 368 с.].

Однако существенным недостатком этого метода является использование анти-Форссмановских антител кролика для сенсибилизации эритроцитов барана, что ограничивает тест только гемолитической активностью комплемента. С этой точки зрения понятен интерес к способам определения комплемент активирующей функции человеческих иммуноглобулинов.

Существует метод определения титра гетерофильных антител (ГА) к эритроцитам барана с помощью реакции гемагглютинации при лабораторной диагностике инфекционного мононуклеоза (ИМ) (проба Пауля-Буннеля). ГА представляют собой IgM, взаимодействующие с антигенами животных неродственных видов, например, барана или быка. Эти антитела выявляются примерно у 90% больных ИМ. ГА в низком титре могут присутствовать и у здоровых людей. ГА при ИМ отличаются от ГА, присутствующих в сыворотке здоровых и больных сывороточной болезнью, по способности абсорбироваться тканью почек морской свинки и эритроцитами быка. Диагностическим считается титр 1:128-1:256. Кроме инфекционного мононуклеоза, проба бывает положительной при лейкозах, вирусных гепатитах, цитомегаловирусной инфекции, лимфоме Беркитта, ревматоидном артрите и после введения иммунных сывороток [Клиническая иммунология и аллергология. Под ред. Г. Лолора-младшего, Т. Фишера и Д. Адельмана. Пер. с англ. М.: Практика, 2000. - 806 с.].

Однако проба Пауля-Буннеля характеризует способность ГА к гемагглютинации, но не отражает одну из эффекторных функций гетерофильных антител - способность активировать систему комплемента.

Известен способ определения нарушения иммунного статуса человека, включающий исследование в сыворотке крови антител и циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК). Предварительно определяют титр гетерофильных антител по методу Пауля-Буннеля, относительный уровень ЦИК методом преципитации ПЭГ 6000 и комплемент-активирующие свойства гетерофильных антител, путем инкубации стандартизированных эритроцитов барана при температуре 37°С в течение 30 мин с 0,8% сывороткой и с последующим измерением степени лизиса эритроцитов, после чего проводят расчет коэффициента эффекторной функции гетерофильных антител по системе комплемента (К_{эфга-ск}) по формуле:

К_{эфга-ск}=У/Т_га,

где У - степень лизиса, %, Т_га - обратный титр гетерофильных антител к эритроцитам барана, а определение нарушений иммунного статуса проводят путем сопоставления коэффициента эффекторной функции гетерофильных антител с относительным уровнем содержания (ЦИК) в сыворотке [Способ определения нарушения иммунного статуса. Патент РФ №2247381. Опубл. 27.02.2005 г.].

Недостатком данного способа является использование гетерологичных эритроцитов барана, а также использование низких концентрации сыворотки крови человека, что является нефизиологичным и не отражает комплемент-ингибиторный потенциал крови человека.

Известен способ определения функциональной активности классического пути системы комплемента человека для прогноза тяжести течения системной воспалительной реакции путем проведения реакции лизиса эритроцитов человека группы А [Е(А)] сывороткой крови человека. Для этого используют 12,5% сыворотку крови человека, 1% суспензию Е(А), сенсибилизированных анти-А моноклональными IgM антителами [Е(А)мА/Т], в условиях вероналового солевого буфера (VBS²⁺) при температуре 37°С, инкубируют в течение 15 мин, реакцию комплемент-зависимого лизиса Е(А)мА/Т оценивают турбидиметрически по снижению оптической плотности суспензии Е(А)мАТ при длине волны 620 нм. Повышенную функциональную активность классического пути системы комплемента отмечают при степени лизиса эритроцитов человека более 60%, при степени лизиса от 31% до 59% как нормальную и при степени лизиса менее 30% как пониженную функциональную активность классического пути системы комплемента [Способ определения функциональной активности системы комплемента человека для прогноза тяжести течения системной воспалительной реакции // Патент РФ №2756764. Опубл. 05.10.2021. Бюл. №28.].

Недостатком данного способа является использование гетерологичных моноклональных IgM антител, что ограничивает информацию только функциональной активностью системы комплемента.

Таким образом, на настоящий момент не существует способа определения нарушений иммунного статуса, включающего комплексный анализ титра антител человека, их комплемент активирующих свойств и гиперактивности системы комплемента для прогноза тяжести Covid-19.

Задачей настоящего изобретения является расширение ассортимента способов определения комплемент активирующих функции антител и гиперактивности системы комплемента для прогноза тяжести течения Covid-19.

Поставленная задача решается путем забора крови у пациента, получения из нее сыворотки и определения в сыворотке крови сначала титра антител к антигенам А и В на поверхности эритроцитов группы АВ методом гемагглютинации, комплемент-активирующей функции анти-АВ антител путем инкубации 1% суспензии эритроцитов человека группы АВ при температуре 37±0,5°С в течение 15±1 мин с 50% сывороткой крови обследуемого человека и с последующим измерением степени лизиса методом турбидиметрии, после чего проводят расчет коэффициента комплемент активирующей функции анти-АВ антител (К_кафа) по формуле:

К_кафа=У/Т,

где У - степень лизиса, %, Т - обратный титр анти-АВ антител к эритроцитам человека с группой 0(I), А(II), В(III).

Затем определяют гиперактивность системы комплемента путем инкубации 12,5% сыворотки обследуемого человека с 0,5% суспензией эритроцитов человека группы А, сенсибилизированных моноклональными IgM антителами, инкубируют в течение 15 мин и степень лизиса определяют турбидиметрически по калибровочному графику. При высоких значениях К_кафа и гиперактивности системы комплемента прогнозируют тяжелое течение Covid-19.

Разработанный способ включает забор крови, приготовление сыворотки, определение комплемент-активирующей способности анти-АВ антител в сыворотке по лизису эритроцитов человека группы AB(IV),определение титра анти-АВ антител, расчет коэффициента комплемент активирующей функции этих антител, определение гиперактивности системы комплемента с использованием эритроцитов человека группы А, сенсибилизированных моноклональными IgM антителами. При высоких значениях комплемент активирующей активности анти-АВ антител и гиперактивности системы комплемента прогнозируют тяжелое течение Covid-19.

Таким образом, технический результат, получаемый при реализации изобретения, заключается в индивидуальном прогнозировании тяжести течения Covid-19 и выборе тактики лечения с использованием специфических ингибиторов системы комплемента.

Способ прогнозирования тяжести течения Covid-19 включает забор крови, приготовление сыворотки и поэтапное определение комплемент-активирующей активности анти-АВ антител, определение их титра в тесте гемагглютинации, расчет коэффициента комплемент-активирующей функции анти-АВ антител, определение гиперактивности системы комплемента.

Этап 1

Определение комплемент-активирующей активности анти-АВ антител. В лунки иммунологической 96-ти луночной планшеты с плоским дном вносят по 50 мкл сыворотки крови человека и 1% суспензии эритроцитов человека с группой АВ (Е(АВ). Одновременно ставят контроли на спонтанный лизис Е(АВ) (50 мкл 1% Е(АВ)+50 мкл физиологического раствора) и контроль на полный лизис (50 мкл 1% Е(АВ)+50 мкл дистиллированной воды). Планшету тщательно перемешивают и измеряют мутность суспензии Е(АВ) на фотометре для иммуноферментного анализа при длине волны 620 нм (показатель 0 мин), далее пробы инкубируют 10 мин при 37°С в планшетном термостате. После инкубации тщательно перемешивают и измеряют изменение мутности при лизисе Е(АВ). Степень лизиса определяют в % по калибровочному графику, где 100% лизис представляет величину оптической плотности контроля на полный лизис Е(АВ) при 620 нм, 0% лизиса, соответственно, оптическая плотность контроля Е(АВ) на спонтанный лизис.

Проведены исследования комплемент-активирующей активности анти-АВ антител 23 проб сыворотки крови человека. Полученные результаты представлены в таблице 1.

Как видно из данных, представленных в таблице 1, в 6 пробах наблюдается высокая комплемент-активирующая функция анти-АВ антител сыворотки крови. Для расчета коэффициента комплемент-активирующей функции анти-АВ антител были проведены исследования титра анти-АВ антител.

Этап 2

Определение коэффициента комплемент-активирующей функции анти-АВ антител в сыворотке крови человека. Для этого предварительно определяли титр анти-АВ антител. Проводили прогрессивное разведение исследуемых проб сыворотки крови человека в иммунологических планшетах с круглым дном. Добавляли равный объем 1% суспензии Е(АВ), тщательно перемешивали и оставляли на 30 мин при комнатной температуре. За титр анти-АВ антител принимали конечное разведение сыворотки, где наблюдается агглютинация Е(АВ). Полученные результаты представлены в таблице 2.

Как видно из данных таблицы 2, колебания титра анти-АВ антител наблюдались от 1:4 до 1:512 разведения, причем чем выше степень лизиса Е(АВ) в 50% сыворотке, тем выше титр анти-АВ антител. Для расчета удельной комплемент активирующей функции предлагается коэффициент, представляющий собой отношение степени лизиса Е(АВ) к обратному титру анти-АВ антител. Расчетный коэффициент в ЕД представлен в таблице 2. Для более удобного восприятия данного коэффициента данные в ЕД были умножены на 20, для представления в 1 мл. Единственным ограничивающим фактором данного способа является принадлежность пробы сыворотки крови к группе АВ по системе АВ0. Действительно, отсутствие анти-АВ антител в пробах сыворотки крови делает невозможным использование данного анализа у лиц с группой крови АВ. Подтверждения данных положений представлены в таблице 2.

Этап 3

Определение функциональной активности системы комплемента сыворотки крови человека. Функциональную активность классического пути системы комплемента определяли, как описано в работе «Способ определения функциональной активности системы комплемента человека для прогноза тяжести течения системной воспалительной реакции» // Патент РФ №2756764. Опубл. 05.10.2021 г. Кратко: в лунки иммунологических 96-ти луночных плоскодонных планшет вносят последовательно 12,5 мкл сыворотки крови человека, 37,5 мкл вероналового буфера с солями Са и Mg (VBS²⁺) и 50 мкл Е(А), сенсибилизированных моноклональными IgM антителами. В качестве контроля используют: 1 - контроль эритроцитов на спонтанный лизис (50 мкл Е(А)мАт+50 мкл VBS²⁺); 2 - контроль на полный лизис (50 Е(А)мАт+50 мкл Н₂О). Степень лизиса Е(А)мАт в % определяют по калибровочному графику, где 100% лизис представляет контроль на полный лизис и 0% лизиса представляет контроль эритроцитов на спонтанный лизис. Пробы инкубируют в течение 15 мин при 37°С. Определяют лизис Е(А)мАт методом турбидиметрии по снижению мутности при 620 нм на планшетном фотометре для ИФА анализа. Полученные результаты представлены на таблице 3.

Как видно из данных, представленных в таблице 3, в трех пробах (13%) наблюдается повышенная функциональная активность системы комплемента (более 60% лизиса эритроцитов), в 2 пробах - сниженная (9%), а в остальных тестированных пробах сыворотки активность комплемента в пределах нормальных значений (от 31 до 59% лизиса). Повышенная функциональная активность классического пути системы комплемента свидетельствует о наличии воспалительного состояния в организме человека и является прогностическим маркером тяжести системной воспалительной реакции при COVID-19 инфекции.

Этап 4

Сравнительный анализ комплемент-активирующей функции анти-АВ антител и общей функциональной активности системы комплемента сыворотки крови обследуемых лиц. Ниже представлена сводная таблица данных показателей (таблица 4).

Из данных, представленных в сводной таблице 4, видно, что наибольшая комплемент активирующая функция анти-АВ антител наблюдается в пробах с повышенным уровнем этих антител. С увеличением концентрации анти-АВ антител снижается их коэффициент (удельная активность), что вполне объяснимо. Если бы у этих пациентов анти-АВ антитела обладали бы высокой удельной активностью, то это привело бы к системной активации системы комплемента вплоть до летального исхода. Учитывая то, что данные анти-АВ антитела циркулируют длительное время, наблюдается их модификация, окисление или другие реакции модификации, которые и приводят к снижению комплемент активирующей функции данных антител. В случае Covid-19 показано, что уровень антиковидных антител положительно коррелирует с тяжестью заболевания. Клинически показано, что иммуносупрессивная терапия значительно снижает тяжесть воспалительных процессов при Covid-19. Нужно отметить, что первые 2 недели заболевания Covid-19 идет усиленный синтез IgM, которые являются мощными активаторами классического пути системы комплемента при формировании иммунных комплексов с вирусами SARS-Cov-2.

Вторым моментом является исходно повышенная активность системы комплемента, что свидетельствует о наличии хронического воспалительного процесса в организме обследованных лиц.

Таким образом, иммунная реакция организма при инфицировании вызывает усиленный синтез антител с высокой эффекторной (комплемент-активирующей) функцией (IgM) к Covid-19, что приводит к неконтролируемой активации системы комплемента по классическому пути и как итог - острый респираторный дистресс-синдром и полиорганная недостаточность (тяжелое течение инфекции). Раннее выявление лиц с повышенными показателями комплемент-активирующей функции анти-АВ антител и гиперактивностью системы комплемента позволит сформировать группу риска по COVID-19 инфекции и тем самым снизить тяжесть течения ОРДС путем использования экулизумаба, моноклональных антител к С5 компоненту системы комплемента.

Изобретение относится к медицинской иммунологии, а именно к способу прогнозирования тяжести системной воспалительной реакции. Способ прогнозирования тяжести системной воспалительной реакции (СВР) путем определения гиперактивности системы комплемента, проведения реакции лизиса эритроцитов группы АВ [Е(АВ)] сывороткой крови человека, отличающийся тем, что используют 50% сыворотку, 0,5% суспензию Е(АВ), в условиях буфера VBS²⁺ при (37,0±0,5)°С, инкубируют в течение 10 мин, реакцию комплемент-зависимого лизиса Е(АВ) оценивают турбидиметрически по снижению оптической плотности суспензии Е(АВ) при длине волны 620 нм, строят калибровочный график зависимости оптической плотности А₆₂₀ от лизиса эритроцитов человека, по которому определяют степень лизиса эритроцитов в исследуемых пробах, определяют титр антител к антигенам эритроцитов человека АВ группы в тесте гемагглютинации, проводят расчет коэффициента комплемент-активирующей функции анти-АВ антител (К_кафа) по формуле: К_кафа=(У/Т)×20, где У - степень лизиса, %; Т - обратный титр анти-АВ антител к эритроцитам человека группы АВ; 20 - переводной коэффициент в ЕД/мл, при повышенном К_кафа (более 100 ЕД/мл) и гиперактивности системы комплемента (более 60%) прогнозируют тяжелое течение СВР. Вышеописанный способ позволяет индивидуально прогнозировать тяжесть течения Covid-19 с выбором тактики лечения с использованием специфических ингибиторов системы комплемента. 4 табл.

Способ прогнозирования тяжести системной воспалительной реакции (СВР) путем определения гиперактивности системы комплемента, проведения реакции лизиса эритроцитов группы АВ [Е(АВ)] сывороткой крови человека, отличающийся тем, что используют 50% сыворотку, 0,5% суспензию Е(АВ), в условиях буфера VBS²⁺ при (37,0±0,5)°С, инкубируют в течение 10 мин, реакцию комплемент-зависимого лизиса Е(АВ) оценивают турбидиметрически по снижению оптической плотности суспензии Е(АВ) при длине волны 620 нм, строят калибровочный график зависимости оптической плотности А₆₂₀ от лизиса эритроцитов человека, по которому определяют степень лизиса эритроцитов в исследуемых пробах, определяют титр антител к антигенам эритроцитов человека АВ группы в тесте гемагглютинации, проводят расчет коэффициента комплемент-активирующей функции анти-АВ антител (К_кафа) по формуле:

К_кафа=(У/Т)×20,

где У - степень лизиса, %; Т - обратный титр анти-АВ антител к эритроцитам человека группы АВ; 20 - переводной коэффициент в ЕД/мл, при повышенном К_кафа (более 100 ЕД/мл) и гиперактивности системы комплемента (более 60%) прогнозируют тяжелое течение СВР.