Питательная среда для выделения бифидобактерий Советский патент 1992 года по МПК C12N1/20 

Изобретение относится к биотехнологии и медицине и может быть использовано для приготовления питательных сред для выделения бифидобактерий при различных исследованиях, например, при исследованиях на дисбактериоз.

Цель изобретения - повышение чувствительности среды.

Пример 1. Питательная среда для выделения бифидобактерий содержит сухую питательную основу из смеси ферментативных гидролизатов печени и мясо-костного фарша тюленя, а также хлорид натрия, лактозу, агар-агар при следующем соотношении компонентов, г на 1 л среды:

Ферментативный

гидролизат мясо-костного

фарша тюленя11-15

Ферментативный

гидролизат печени тюленя12-15 Хлорид натрия 4,5-5,5 Лактоза 9-12 Агар-агар 0,75-1 Дистиллированная вода Остальное рН 7,0 + 0,2

Пример 2. С целью выявления оптимального сооношения основных компонентов при конструировании питательной среды опробованы различные ее варианты. Данные приведены в табл. 1. Основным критерием оценки качества среды в опытах является чувствительность ее к росту тест-штаммов бифидобактерий. Испытания сред проведено на тест-штаммах BlfldobacterJum longum Я-3 и Blfldobacterlum bifldum ЛВА-3 при посеве методом десятикратных разведении.

V|

О

г

U

Принимая во внимание данные табл. 1, оптимальной концентрацией гидролизатов печени и мясо-костного фарша тюленя является - 12-15 г гидролизата печени и 11 --15 г гидролизата мясо-костного фарша тюленя, так как при этом достигается максимальная чувствительность (10 ), а также не изменяются морфология и размеры клеток, (по срав- нению с контролем). При изменении концентрации указанных компонентов ниже 12 г (гидролизат печени) и 11 г (гидроли- зат мясо-костного фарша) уменьшается чувствительность среды, клетки утончаются, исчезает бифуркация.

ПримерЗ. Для приготовления 1000 мл питательной среды 11 г ферментативного гидролизата мясо-костного фарша, 12 г ферментативного гидролизата печени тюленя, 9 г лактозы, 4,5 г хлорида натрия, 1 г агар-агара растворяют в небольшом количестве горячей дистиллированной воды, доводят объем среды до 1 л дистиллированной водой и кипятят 1-2 мин, не допуская при- горания, фильтруют через ватно-марлевый фильтр и разливают в стерильные флаконы по 300-350 мл. Стерилизуют текучим паром в течение 30 мин 2 дня или при 0,5 атм 30 мин 2 дня. Разливают в стерильные пробирки по 9 мл. Непосредственно перед посевом регенерируют кипячением в течение 30-45 мин и быстро охлаждают под струей холодной воды. Чувствительность среды определяют, высевая по 1 мл приготовленной суспензии фекалий из разведении 105-10 10 в полужидкую среду Блаурокка в модификации Гончаровой и в предлагаемую среду па- раллельно. Через 48 ч инкубирования делают мазки, начиная с последней пробирки, где имеется рост. Пастеровской пипеткой отбирают характерные колонии в виде гвоздиков, комет, крупинок, или в случае равномерного помутнения, производят забор со дна пробирки. На предлагаемой среде имеется видимый рост в 9-й пробирке, на контрольной (среда Блаурокка в модификации Гончаровой)- в 8-й. При просмотре мазков, окрашенных по Граму, учитывают разведение, при котором в мазке выявляются грамположительные палочки, слегка изогнутые, с бифуркацией на одном или двух концах, расположенные в виде римской цифры V, гантелевидной формы, с булаво- видными утолщениями или в виде скоплений, напоминающих китайские иероглифы. В данном случае типичные клетки выявляются в мазке, сделанном из 9-й пробирки с предлагаемой средой и в 7-й с контрольной. Таким образом чувствительность предлагаемой среды . контрольной 10 .

П р и м е р 4. Для получения 1000 мл питательной среды 15 г ферментативного гидролизата мясо-костного фарша тюленя, 15 г ферментативного гидролизата печени

тюленя, 12 г лактозы, 5,5 г хлорида натрия, 0,75 агар-агара растворяют в небольшом количестве горячей дистиллированной воды, доводят объем среды дистиллированной водой до 1 л и кипятят в течение 1-2 мин, не

0 допуская пригорания. Фильтруют через ватно-марлевый фильтр, разливают в стерильные флаконы по 300-350 мл, стерилизуют автоклавированием при 0,5 атм 2 дня по 30 мин. Разливают в стерильные пробирки по

5 9 мл. регенерируют кипячением и быстро охлаждают. В ампулу с лиофилизированным штаммом вносят 1 мл физиологического раствора, растворяют содержимое и переносят в пробирку с питательной средой, счи0 тая это разведение за первое. Далее культуру титруют, методом десятикратных разведении до 10 в предлагаемой среде и в контрольной среде Блаурокка и инкубируют в течение 48 ч при температуре 37,35 37,5°С. В данном случае на предлагаемой среде имеется видимый рост (4 колонии в виде комет) на 9-ом разведении и 18 колоний на 8-ом. На контрольной среде в 9-ом разведении роста не было, на 8-ом 1 коло0 ния, на 7-ом - 11 колоний в виде комет. Из каждого разведения с видимым ростом берут мазки и окрашивают по Граму. Морфология клеток типична как в контрольной среде, так и в экспериментальной. Таким

5 образом, чувствительность контрольной среды , предлагаемой .

П р и м е р 5. Для приготовления 1000 мл питательной среды 14 г ферментативного гидролизата печени тюленя, 13 г фермен0 тативного гидролизата мясо-костного фарша тюленя, 5 г хлорида натрия, 10 г лактозы, 1 г агар-агара суспендируют в небольшом количестве горячей дистиллированной воды, затем доводят объем среды до

5 1 л дистиллированной водой, кипятят в течение 1-2 мин, не допуская пригорания, фильтруют через ватно-мэрлевый фильтр и разливают в стерильные флаконы по 300- 350 мл, стерилизуют в автоклаве при 0,5 атм

0 в течение 30 мин 2 дня. Непосредственно перед посевом среду, предварительно разлитую в стерильные пробирки по 9 мл. регенерируют кипячением в течение 30-45 мин. Посев производят из разведении фекалий

5 Ю -КГ10 (по схеме, принятой для анализов на дисбактериоз). Посевы помещают в термостат на 38 ч. После инкубации делают мазки, начиная с последней пробирки, где имеется видимый рост. На предлагаемой среде в 8-й пробирке отмечается интенсивмое помутнение, на контрольной среде в 7-й. Типичные клетки выявляются при микроскопии в 8-ом разведении в предлагаемой среде и на 7-ом в контрольной. Таким образом, чувствительность предлагаемой среды КГ8, контрольной .

П р и м е р 6. Для изучения качества предлагаемой среды для выделения бифи- добактерий из фекалий проводят посевы из разведении , 1СГ6, , ЮЛ 10, 1СГ10, которые затем помещают в термостат при 37,5°С на 48 ч. Делают мазки из всех пробирок с видимым ростом, окрашивают по Гра- му и микроскопируют.

Результаты экспериментов показаны в табл.2.

Таким образом, предлагаемая среда является более чувствительной, более простой по составу и стандартной.

Упрощение среды достигается уменьшением числа компонентов за счет исключения наиболее дорогостоящих и дефицитных из них (твина. цистеина).

Для приготовления среды используется непищевое сырье, а именно отходы зверобойного промысла, что уменьшает ее себестоимость. Данная среда позволяет получить более точный диагноз бифидодефици- та при исследованиях на дисбактериоз, удобна в хранении и транспортировке, так как может быть приготовлена в сухом виде. Формула изобретения Питательная среда для выделения би- фидобактерий, содержащая питательную основу, лактозу, хлорид натрия, агар-агар и воду, отличающаяся тем, что, с целью повышения чувствительности, в качестве питательной основы она содержит ферментативные гидролизаты мясо-костного фарша и печени тюленя при следующем соотношении компонентов, г/л: Ферментативный гидролизат мясо-костного фарша тюленя11-15 Ферментативный гидролизат печени

тюленя12-15 Лактоза 9-12 Хлорид натрия 4,5-5,5 Агар-агар 0,75-1 Дистиллированная

водаДо 1 л

Изобретение относится к биотехнологии и медицине и может быть использовано для приготовления питательных сред для выделения бифидобактерий при различных исследованиях, например, при исследовании на дисбактериоз. Цель изобретения - повышение чувствительности. Питательная среда имеет следующее соотношение компонентов, г/1 л среды: ферментативный гидролизат мясо-костного фарша тюленя 11-15, ферментативный гидролизат печени тюленя 12-15; лактоза 9-12; хлорид натрия 4,5-5.5; агар-агар 0,75-1; вода дистиллированная остальное. Чувствительность предлагаемой среды рН 7,0 ±0,2 к росту тест-штаммов бифидобактерий . 2 табл. Ё

Таблица 1

Чувствительность питательных сред с различным содержанием ферментативных гидроли- затов печени и мясо-костного фарша тюленя при посевах тест-штаммов Blfldobacterlum

longum Я-3 и Blfldobacterlum blfidum ЛВА-3

Сравнительные данные чувствительности экспериментальной и контрольной сред при посевах фекалий на дисбэктериоз.

Продолжение табл. 1

Таблица 2