Штамм бактерий YeRSINIa реSтIS, предназначенный для проведения генетических и микробиологических исследований Советский патент 1992 года по МПК C12N1/21 C12N15/01 

Описание патента на изобретение SU1705342A1

Изобретение относится к микробиологии и генетике.

Известны мутанты чумного микроба, зависимые от азотистых оснований. Как правило эти мутанты получены под действием различных физических факторов в химических агентов и используются для проведения различных микробиологических, и генетических экспериментов 1.2,3.

Для изучения генетики возбудителя чумы необходимо создание доступной для специалистов коллекции с максимально возможным набором маркированных штаммов. До настоящего времени не получены цитидинзависимые штаммы чумного микроба.

Целью изобретения является получение штамма для проведения генетических и микробиологических исследований.

Полученный цитидинзависимый штамм чумного микроба Y.pestls C-3332cyd- хранится в коллекции Всесоюзного музея живых культур Всесоюзного научно-исследовательского противочумного института Микроб под номером КМ-250. Штамм имеет следующие морфологические и физиологические характеристики.

Величина клеток двухсуточной бульонной культуры составляет 1-2 мк, грамотри- цательные, овоидной формы, биполярно окрашенные.

Дает агглютинативный рост в прозрачном бульоне с мелкохлопчатым осадком на дне пробирки. На агаре Хоттингера формирует пигментированные колонии с зернистым центром и периферической зоной диаметром 2-2,5 мм. Температура оптимума роста 28°С.

Ферментирует глюкозу, маннит, араби- нозу, дульцит, рамнозу. Не разлагает: лактозу, сахарозу, дульцит, раффинозу, отрицательная урезаная активность, не дает реакцию нитрификации. Отсутствует фибринолитическэя и коагулаэная активность, не пестициногенен и чувствителен к пестицину.

На среде Джексона-Берроуза формирует пигментированные колонии, на магние- во-оксалатной среде Хигучи-Смита вырастают кальцийзависимые клетки. Цити- динзависимый мутант продуцирует фракцию 1, чувствителен к стрептомицину, тетрациклину, пенициллину.

Проявляет чувствительность к чумному фагу Покровской, фагу Л-413 С и псевдотуберкулезному диагностическому бактериофагу.

Вирулентен для белых мышей и авиру- лентен для морских свинок.

Зависим от пиримидинового нуклеози- да-цитидина.

П р и м е р 1. Способ получения штамма Yerslnla pestls KM-250.

Фагоцитирующие клетки - полиморф- ноядерные лейкоциты (ПМЛ) и макрофаги (МФ) оказывают мутагенное действие на ряд микроорганизмов - E.coll, S.typhlmurium, P.flscherl, что было показано в опытах In vitro. Активным началом ПМЛ и МФ являются дериваты кислорода: супер- оксидный анион (ОН), перекись водорода

(Н202) И ДР,

Мутагенное действие фагоцитов на чумной микроб в опытах In vitro продемонстрировано в работе Атчабарова с соавт 4.

Мутант Y.pestls KM-250, получен из природного штамма. Y.pestls С-3332 In vivo под действием стимулированных и резидентных ПМЛ и МФ в брюшной полости большой песчанки (Rombomls oplmus) - основного носителя чумного микроба в пустынных очагах чумы.

В опытах используют, как и In vitro, предварительную стимуляцию выхода в брюшную полость большой песчанки ПМЛ с последующим введением туда чумного микроба и смывом его после умершвления животного. Оценку результатов взаимодействия фагоцитов и возбудителя чумы проводят после изучения свойств субкультур штамма чумного микроба взятого в опыт.

П р и м е р 2. Использование штамма КМ-250 для изучения метаболизма пирими- диновых оснований. Из суточной агаровой культуры чумного микроба КМ-250 и С-3296 (штамм выделенный в высокогорном Закавказском природном очаге) по стандарту мутности (10 единиц) готовят суспензию в

забуференном физиологическим растворе (рН 7.2) с концентрацией микробных клеток 10 в 1 мл. Пипеткой переносят 0,5 мл испытуемой культуры в пробирки с 4,5 мл физиологического раствора, доводят концентрацию микробных клеток до 108 в 1 мл. Из разведения Y.pestls KM-250 бактериологической петлей (диаметр 2 мм) делают посев двумя штрихами (2,5-3 см) на пластинку минималь0 ного агара следующего состава (Минимальная среда - МС): 1000 мл дистиллированной воды; 15,0 г агар-агара; 30° мл 10% раствора хлористого кальция; 7,0 г двухзамещенного ортофосфата калия; 2,0 г однозамещенного

5 ортофосфата калия; 0,5 г цитрата натрия; 0,1 г сульфата магния: 1,0 г сернокислого аммония; 3,0 г глюкозы; 0,5 г сульфита натрия; цистеин, фенилаланин, метионин,треонин, аргинин, тиамин по 50 мг.

0 Из конечного разведения штамма С- 3296 производят высев двумя штрихами на ту же чашку с МС следующим образом: первый штрих проводят перпендикулярно посеву штамма C-3332 cyd- на расстоянии 3

5 мм от края штриха, второй - параллельно на том же расстоянии. Посевы таким методом делают на 3-4 пластинках минимального агара. Место посева каждого штамма метят. Чашки с посевами инкубируют при 28°С.

0 На 2-3 сутки вырастают все посевы штамма С-3296, а штамма КМ-250 лишь в местах наиболее близких к посевам штамма С-3296.

Полученные данные позволяют сделать

5 вывод о синтрофизмеобеспечении потребности в пиримидиновых основаниях штамма (Y.pestls KM-250) с блоком их биосинтеза, промежуточными продуктами метаболизма штамма Y.pestls С-3296 с ненарушенными

0 путями их биосинтеза.

П р и м е р 3. Использование штамма Y.pestls KM-250 для изучения пиримидинового оперона. Из суточной агаровской культуры чумного микроба штамма Y.pestls

5 КМ-250 и С-3296 по стандарту мутности (10 единиц) готовят суспензии в забуференном физиологическом растворе (рН 7,2) с концентрацией микробных клеток 10 в 1 мл. Пипеткой переносят 0,5 мл суспензии в про0 бирку с 4 мл физиологического раствора, доводят концентрацию до 10 микробных клеток в 1 мл, Из этого разведения микропипеткой переносят 10.0 мкл (10б микробных клеток) на плотные питательные среды (по5 сев бляшкой) следующего состава: минимальная среда (аналогичная МС в примере 1); МС с добавлением цитидиловой кислоты (50 мг на 1 л среды); МС с добавлением уридинэ (50 мг на 1 л среды); МС с добавлением цитидина (50 мг на 1 л среды).

Чашки с посевами инкубируют 2-3 сутПолученные данные позволяют сделать запри 28 С.ключение о месте блока путей синтеза пириШтамм чумного микроба КМ-250 растетмидиновых оснований у испытуемого

лишь на среде № 4 (с добавлением цитиди-штамма.

на). Тогда как штамм С-3296 растет на всех5 Формулаизобретения

указанных средах.Штамм бактерий Yerslnla pestls KM-250.

Цитидиловая кислота, уридин являютсяпредназначенный для проведения генетичепредшественниками биосинтеза цитидина.ских и микробиологических исследований.

Похожие патенты SU1705342A1

название год авторы номер документа
Штамм чумного микроба YeRSINIa реSтIS, используемый в качестве тест-объекта для определения строения и функции новой дополнительной плазмиды возбудителя чумы 1991
  • Мартиневский Иван Лукьянович
  • Степанов Владимир Михайлович
  • Некрасова Лариса Евгеньевна
  • Проценко Ольга Алексеевна
  • Филиппов Андрей Александрович
  • Плотников Олег Петрович
  • Солодовников Николай Сергеевич
SU1825375A3
Штамм бактерий JeRSINIa реSтIS, используемый для контроля цепи синтеза L-аргинина на этапе образования L-аргининосукцината 1988
  • Валенцев Виталий Егорович
  • Мишанькин Борис Николаевич
  • Рыжков Владимир Юрьевич
SU1661207A1
Способ получения мутантов чумного микроба 1991
  • Атчабаров Бахыт Бахиевич
  • Сулейменов Бахтияр Мукашевич
  • Майканов Нурбек Смагулович
  • Тугамбаев Тлеули Идрисович
SU1831499A3
Рекомбинантная плазмидная ДНК РЕК 8, кодирующая фибринолизин YeRSINIa реSтIS, способ ее конструирования и штамм бактерий ЕSснеRIснIа coLI - продуцент фибринолизина YeRSINIa реSтIS 1990
  • Булгакова Елена Германовна
  • Попов Юрий Алексеевич
SU1751206A1
Штамм бактерий ЕSснеRIснIа coLI - продуцент капсульного антигена фракция 1 чумного микроба 1990
  • Кириллина Ольга Анатольевна
  • Попов Юрий Алексеевич
  • Шишкина Ольга Григорьевна
  • Булгакова Елена Германовна
SU1680768A1
Штамм бактерий JeRSINIa реSтIS - продуцент цАМФ-связываюшего белка 1989
  • Валенцев Виталий Егорович
  • Шевченко Людмила Алексеевна
SU1668386A1
Штамм бактерий JeRSINIa реSтIS, предназначенный для проведения генетических и эпизоотологических наблюдений 1989
  • Сулейманов Бахтияр Мукашевич
  • Атчабаров Бахыт Бахиевич
  • Исин Жамиль Мауленович
  • Сатыбалдиев Нурлан Абенович
  • Рахманкулов Рашид Рахматулович
  • Майканов Нурбек Смагулович
SU1712405A1
Способ получения мутантов чумного микроба дефектных по синтезу капсульного антигена фракции I 1990
  • Карлышев Андрей Владимирович
  • Кравченко Виктор Иванович
  • Красильникова Валентина Михайловна
  • Анисимов Андрей Павлович
SU1754779A1
ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ПЛОТНАЯ ДЛЯ КОНТРОЛЯ КОЛИЧЕСТВА ЖИВЫХ МИКРОБНЫХ КЛЕТОК ВАКЦИННОГО ШТАММА ЧУМНОГО МИКРОБА Y. PESTIS EV 2020
  • Катунина Людмила Семеновна
  • Куличенко Александр Николаевич
  • Курилова Анна Алексеевна
  • Ковтун Юрий Сергеевич
  • Абзаева Наталья Вячеславовна
  • Гостищева Светлана Евгеньевна
  • Василенко Екатерина Игоревна
  • Богданова Юлия Викторовна
  • Красовская Татьяна Леонидовна
  • Таран Татьяна Викторовна
  • Борздова Ирина Юрьевна
RU2748492C1
ШТАММ БАКТЕРИЙ YERSINIA PESTIS - ПРОДУЦЕНТ ФРАКЦИИ I ЧУМНОГО МИКРОБА 1991
  • Мартиневский И.Л.
  • Степанов В.М.
RU2031938C1

Реферат патента 1992 года Штамм бактерий YeRSINIa реSтIS, предназначенный для проведения генетических и микробиологических исследований

Изобретение относится к микробиологии и генетике, в частности для генетических и микробиологических экспериментов в качестве маркированных штаммов. Целью изобретения является получение штамма для проведения генетических и микробиологических исследований при изучении ге- нотипических и фенотипических свойств чумного микроба. Путём мутагенного воздействия фагоцитирующих клеток большой песчанки получен мутант чумного микроба, стабильно сохраняющий зависимость от ци- тидина. Штамм депонирован в коллекции Научно-исследовательского противочумного института Микроб под номером КМ-250. Ё

Формула изобретения SU 1 705 342 A1

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 1992 года SU1705342A1

Биохимия и генетика возбудителей чумы, М.: Медицина, 1974, Генетика
Сплав для отливки колец для сальниковых набивок 1922
  • Баранов А.В.
SU1975A1
XI
Аппарат для очищения воды при помощи химических реактивов 1917
  • Гордон И.Д.
SU2A1
Способ закалки пил 1915
  • Сидоров В.Н.
SU140A1
Микробиология и биохимия ООИ, Саратов.: 1982
с
Выбрасывающий ячеистый аппарат для рядовых сеялок 1922
  • Лапинский(-Ая Б.
  • Лапинский(-Ая Ю.
SU21A1
Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии, 1989
Очаг для массовой варки пищи, выпечки хлеба и кипячения воды 1921
  • Богач Б.И.
SU4A1
Печь-кухня, могущая работать, как самостоятельно, так и в комбинации с разного рода нагревательными приборами 1921
  • Богач В.И.
SU10A1

SU 1 705 342 A1

Авторы

Атчабаров Бахыт Бахиевич

Сулейменов Бахтияр Мукашевич

Сатыбалдиев Нурлан Абенович

Исин Жамиль Мауленович

Даты

1992-01-15Публикация

1989-07-31Подача