Способ индикации возбудителя чумы Советский патент 1992 года по МПК C12Q1/04 G01N33/569 

s С

Изобретение относится к микробиологии, в частности к специфической индикации биологических объектов методом флуоресиир ющих антител. Целью изобретения является повышение чувствительности способа. Поставленная цель достигается тем. что биопробным животным подкожно в область спины вводят 0.5-1 .С мл исследуемой пробы. Исследуемый материал вводят в одном шприце г. равным объемом смеси гепэричизированной крови морской свинки, желтка куриного яйца и кортизона. В месте введения делают мазок-отпечаток, которь.й фиксируют в хлороформе с последующей обработкой пюминесцирующими антителами и учетом результатов. Способ позволяет выявлять отдельные клетки еоз- будит-:-ля. введенного биопробным животным 2 i ч б.г

Изобретение относится к микробиологии, в частности к специфической индикации биологических объектов методом флуоресцирующих антител.

Цель изобретения - повышение чувствительности способа.

П р и м е р 1. Приготавливают смесь гепариниэированной крови морской свинки с желтком куриного яйца в соотношении 1:1 в количестве 2 мл. К смеси добавляют 2 мл исследуемого материала, содержащего 10 микробных клеток возбудителя чумы в 1 мл, и кортизон из расчета 5 мг на одно животное. Приготовленную смесь набирают в шприц и вводят под кожу спины четырем белым мышам поровну. Две белые мыши вскрывают через 24 ч, а две другие - через 48 ч. С места введение делают мазки-отпечатки, фиксируют в хлороформе 10 мин и

окрашивают коммерческими флуоресцирующими иммуноглобулинами.

Под люминесцентным микроскопом через сутки при просмотре 10-15 полей зрения обнаруживают единичные микробные клетки, а через 48 ч - в каждом поле зрения обнаруживают 10-15 микробных клеток.

П р и м е р 2. Приготавливают смесь гепаринизированной крови морской свинки с желтком куриного яйца в соотношении 6:4 в количестве 2 мл. К смеси добавляют 2 мл исследуемое материала, содержащего 10 микробных клеток возбудителя чумы в 1 мл. и кортизон из расчета 6 мг на одно животное. Приготовленную смесь избирают в шприц и вводят под кожу спины четырем белым мышам поровну. Две белые мыши вскрывают через 24 ч, а две другие - через 48 ч. С места введения делают мазки-отпечатки, фиксируют вхлороформе 15 мин и окрашиеают коммерческими флуоресцирующими иммуноглобулинами. Под люминесцентным микроскопом через сутки при просмотре 10-15 полей зрения обнаруживают единичные микробные клетки, а через 48 ч в каждом поле зрения обнаруживают 10-15 микробных клеток.

П р и. м в р 3. Приготавливают смесь гепэринизированной крови морской свинки с желтком куриного яйца в соотношении 7:3 в количетве 2 мл. К смеси добавляют 2 мл исследуемого материала, содержащего 10 микробных клеток возбудителя чумы в 1 мл. и кортизон из расчета 7 мг на одно животное. Приготовленную смесь набирают в шприц и вводят под кожу спины четырем белым мышам поровну. Две белые мыши вскрывают через 24 ч, а две другие - через 48 ч. С Места введения делают мазки-отпечатки, фиксируют в холроформе 20 мин и окрашивают коммерческими флуоресцирующими иммуноглобулинзми. Под люминесцентным микроскопом через сутки при просмотре 10-15 полей зрения обнаруживают единичные микробные клетки, а через 48 ч в каждом поле зрения обнаруживают ID- 15 микробных клеток.

Примечание. - в каждом поле зрения обнаружено 10-15 микробных клеток;

Ед. кл. - при просмотре Ю-15 полей зрения обнаружены единичные микробные клетки: - - возбудитель не обнаружен.

0

5

0

5

Результаты биопробы представлены в табл.1 и 2.

Таким образом, при использовании известного способа повышается чувствительность биологической пробы при обнаружении возбудителя чумы прямым методом флуоресцирующих антител.

Формула изобретения

Способ индикации возбудителя чумы, включающий введение исследуемого материала животным с последующим взятием патологического материала, изготовлением мазков-отпечатков, их фиксацией, нанесе-- нием флуоресцирующих иммуноглобулинов и учетом результатов при люминесцентно- микроскопическом исследовании, отличающийся тем. что, с целью повышения чувствительности способа, исследуемый материал предварительно смешивают с гепа- ринизированной кровью морской свинки и желтком куриного яйца в соотношении 1:1:1-1:7:3 соответственно, к полученной смеси добавляют 5-7 мг кортизона, введение осуществляют подкожно в области спины в дозе 0,5- 1 мл, патологический материал берут с места введения, а фиксацию мазков осуществляют хлороформом в течение 10-20 мин.

30

а б л и ц а 1

Примечание. - в каждом поле зрения обнаружено

100 микробных клеток; -::| - в кг- -дом поле зрения обнаружено 10-15 микосбкь х клеток; Ед.кл. - при просмотре 10-15 г.олей Зрения обнаружень1 единичные микробные клетки; - - возбудитель не обнаружен

а б л и ц а 2