Способ окрашивания перехватов Ранвье Советский патент 1992 года по МПК G01N1/30 

Изобретение относится к медицине, в частности к нейрогистологии.

Цель изобретения - повышение качества окраски за счет увеличения количества окрашенных перехватов Ранвье нервных волокон.

Окрашивание по предлагаемому способу включает фиксацию в 5%-ном глутараль- дегиде на дистиллированной врде, инкубацию в течение 1 ч в растворе хлорного железа и затем в растворе ферроцианида калия с последующей заливкой для микроскопического исследования, дополнительно после двух vKa dhMh.x инкубации препарат инкуоиру 0т в J -ч /о ном рыСтпсрс нитрата серебра в течение 10-20 и 27-30 мин в 1,5 ± 0,5%-ном растворе феррицианида калия, используют глутаральдегид на дистиллированной воде, а заливку осуществляют в глицерин-желатин.

Пример 1. Кролика после предварительного эфирного наркоза умерщвляли де- капитацией. После этого в районе подколенной ямки обнажали седалищный нерв и вырезали его часть и вырезали его часть длиной 1 см. Нерв фиксировали 2 ч в 5%-ном глутарэльдегиде на дистиллированной воде. Объем фиксирующей жидкости 40 мл. Затем нерв промывали в 5 порциях дистиллированной воды 4 раза. Потом под микроскопом МССО тонкими иглами удаляли с нерпа эпинесрмй. После удаления эпинео- рия основной нервный стеол р сг:л;г т на ряд болие тонких нервных пучкиа (илщи- ной 0,5-1 мм, которые выделяли и далее проводили по растворам отдельно.

С

««I

4

ч. ч

ч

j

Выделенные нервные пучки после этого инкубировали 1 ч в 0,01 М растворе хлорного железа (рН 1,5). рН раствора доводили 0.1 н соляной кислотой, а затем проверяли по рН- метру. Далее нервы промывали 5 раз по 5 мин в дистиллированной воде. Затем нервные пучки инкубировали 20 мин в 1 %-ном растворе желтой кровяной соли (рН 2). рН раствора доводили как указано. Промывали нервы в 5 порциях дистиллированной воды по 5 мин. После этого инкубировали нервы 20 мин в 3%-ном растворе нитрата серебра. Промывали в 5 порциях по 5 мин дистиллированной воды. Затем инкубировали нервы 30 мин в 1 %-ном растворе красной кровяной соли (рН 2). Промывали нервы в 5 порциях дистиллированной воды по 5 мин. После этого заключали нервные пучки на предметные стекла в глицерин-желатин. Сразу после этого препараты можно изучать под световым микроскопом.

Результаты. У 50 произвольно выбранных волокон на протяжении 880 мкм было обнаружено 29 окрасившихся перехватов. У 50 волокон, обработанных по способу-прототипу, на протяжении 880 мкм удалось выявит ь лишь 2 окрашенных перехвата.

Пример 2. Лягушку умерщвляли декапитацией. После этого вырезали участок седалищного нерва в области бедра длиной 0,5 см. Фиксировали, как и в примере 1. После промывки в дистиллированной воде снимали эпиневральную соединитель- нотканую оболочку. Затем нерв проводили по растворам тем же способом, как и в примере 1. Нервы заливали в глицерин-желатин.

Результаты. В перехватах Ранвье выпал темно-кор1:;невый осадок. У 50 произвольно выбранных волокон на протяжении 889 мкм было обнаружено 48 окрашенных перехватов, а у обработанных по способу-прототипу 6.

Пример 3. Лягушку умерщвляли декэпитацией. После этого вскрывали cnvi- номозговой канал и выделяли левый дореальный корешок X пары спиномозгооых нервов. Затем осуществляли с нервом те же операции, что и в примерах 1 и 2.

Результаты. В толстых нервных пучках мякотных афферентных волокон выявились

перехваты Ранвье и насечки Шмидта-Лан- термана. У 50 произвольно выбранных волокон на расстоянии 880 мкм было обнаружено 36 перехватов Ранвье. У такого же количества волокон на расстоянии 880 мкм из нервных пучков, обработанных по.

способу-прототипу, выявлено 19 окрашенных перехватов, насечки Шмидта-Лантер- мана не выявились.

Форм, у л а изобретения Способ окрашивания перехватов Рэн- вье, включа ющий фиксацию в глутаровом альдегиде, инкубацию в течение 1 ч в растворе хлористого железа и затем в растворе ферроцианидэ капия, отличающийся тем, что с повышения качества окраски за счет увеличения в препарате количества окрашенных перехватов Ранвье, дополнительно проводят инкубацию в 3- 4%-ном растворе нитрата серебра в течение 5 10-20и27-30 мин в 1,5±0,5%-ном растворе .феррицианида калия.

Изобретение отмоется к медицине, а именно к нейрогистологии. Цели изобретения - увеличение количества окрашенных перехватов Ранвье нервных волокон. Цель достигается многоступенчатой обработкой нервных волокон. Вначале их фиксируют 2 ч в 5%-ном глютаровом альдегиде на дистиллированной воде, затем инкубируют 1 ч в 0,01 М растворе хлористого железа (рН 1,5) и 20 мин 81%-ном растворе желтой кровяной соли (рН 2,0). Затем нервные волокна инкубируют 10-20 мин с 3-4%-ном растворе нитрате серебра и после зтого 27-30 мин в 1,5 ±0,5% растворе красной кровяной со ли (рН 2). Затем препараты заключают j глицерин-желатин и изучают под микроскопом.