Литий-магниевая соль бис-4-аминопентан-1,5-дикарбоновой кислоты, обладающая литолитической активностью Советский патент 1992 года по МПК A61K31/195 

Изобретение относится к новым химическим соединениям, конкретно к литий-магниевой соли бис-4-аминопентан 1,5-дикарбоновой кислоты формулы

-мч-о-с о

J I/ I

СН2

I

СН2

(О

н /

/

HC-NH, H2N-CH

I I

0 C-0-Li Ll-0-C 0

обладающей литолитической активностью.

Указанное свойство предполагает возможность применения соединения в медицине для растворения мочевых камней.

Известно средство для растворения мочекислых камней - Магурлит. Однако применение его с лечебной и профилактической целью сопряжено с частыми осложнениями.

и к ан

(О

ю.

ет я в мияко тижЦелью изобретения является поиск веществ, обладающих литолитической актив ностью.

Поставленная цель достигается соединением вышеуказанной формулы.

Литий-магниевая соль бис-4-аминопен- тан-1,5-дикарбоновой кислоты имеет мол. массу, рассчитанную по формуле, 326,397. Мол. масса, определенная крисоскопиче- ским методом, равна 322,669. Температура плавления 140-142°С с разложением. Растворимость в воде при 20°С равна 3,2 г в 100 мл. Растворимость в этиловом спирте 70 мг в 100 мл.

Литий-магниевая соль бис-4-аминопен- тан-1,5-дикарбоновой кислоты получают путем последовательного введения в водный раствор глютаминовой кислоты в эквивалентных соотношениях карбоната лития и окиси магния. Полученную суспензию препарата после охлаждения до 18-20°С фильтруют через обеззоленный фильтр, упаривают при 50-60°С. а затем высушивают до постоянной массы.

Пример 1. Способ получения.

Ё

4 Ј

6,830 г глютаминовой кислоты растворяют в 1000 мл дистиллированной воды при 40-50°С. Полученный раствор имеет рН 3,0- 3,2.

В приготовленный раствор вносят 1,710 г карбоната лития и перемешивают стеклянной палочкой до прекращения выделения пузырьков. Полученный раствор глютамата лития имеет рН 5,40-5,55. Раствор глютамата лития нагревают до 50-55°С, а затем постепенно, небольшими порциями при интенсивном помешивании вносят в него 0,945 г окиси магния. После перемешивания полученный раствор фильтруют через обез- золенные бумажные фильтры и охлаждают до 20-25°С, а затем высушивают.

Полученный препарат представляет собой белый порошок со слегка желтоватым оттенком и является литиево-магниевой соль альфа-амино-адипиновой кислоты.

Растворимость составляет 3,20 г в 100 мл воды при 20°С.

П р и м е р 2. Изучение фармакологического действия..

Изучение токсичности было произведено на 260 белых беспородн ых мышах массой около 20 г. Определение минимальной смертельной дозы (ЛД), дозы половинной выживаемости (ЛД5о) проведено по методике Г.И.Першина (1971). Сто белых мышей массой около 20 г разделено на 10 групп животных, в каждой группе по 10 (табл.1). После внутрибрюшинного введения избранных доз животные наблюдались на протяжении 10 сут.

ЛДво рассчитывались по формуле Г.И.Першина (1971):

Лд50 Е (а + Ь) х (М - п)

ЛД50 -2fXf

где (а+в) - сумма смежных доз;

(М - п) - разница процента смертности от двух последующих доз.

Как видно из табл.1, минимальная смертность дозы препарата, вызвавшая в 100%. гибель белых мышей при внутрибрющин- ном введении, была равна 307,44 мг на 1 кг массы, а половинная летальная доза, рассчитанная по приведенной формуле, составила 24 мг на 1 кг,

В связи с тем, что в качестве способа введения средства выбран пероральный, по описанной выше методике были определены минимальная и .половинная смертельные дозы при введении различных доз средств per os (таблица 2).

. Минимальная смертельная доза составила 4915,2 мг На 1 кг массы тела животного. Доза половинной выживаемости равнялась 1228,8 мг на 1 кг. За лечебную дозу после

многочисленных экспериментов была принята доза 4 мг/кг.

Гистоструктурные изменения в тканях и органах подопытных животных при введеним в организм.

Изучено гистоморфологические состояние внутренних органов (печень, почки, головной мозг) и скелетных мышц после 30-дневного введения различных доз средства.

60 белых мышей массой около 20 г были разделены на 6 групп, по 10 животных в группе. В каждой группе животным на протяжении 30 сут per os вводились различные

дозы средства (от 153,6 до 4,8 мг/кг массы тела).

Все животные на протяжении эксперимента остались живы. По истечении 30 сут опыта животных умерщвили. На гистологическое исследование забирались следующие органы: почки, печень, головной Мозг, мышцы. Препараты окрашивались гематок- силинэозином.

Почки - при введении средства в дозе

. 153,6 мг на 1 кг массы наблюдаются значительные расстройства кровообращения, которые выражались в полнокровии сосудов. Выявлены дистрофические изменения со стороны проксимальных отделов нефроновзернистая, а местами гидропическая дистрофия эпителия извитых канал.ьцев, десквамация клеток. В просвете канальцев наблюдается скопление бесструктурной белковой массы. В дистальном отделе нефрона в просвете канальцев выявляются зернистые цилиндры. При введении в дозе 76,8 мг/кг выявлены расстройства кровообращения, полнокровие клубочков, зернистая дистрофия эпителия извитых канальцев.

В дистальном отделе нефрона отмечаются единичные цилиндры.

При введении средства в дозе 38,4 мг/кг

отмечается выраженное полнокровие. В эпителии проксимальных отделов нейрона

наблюдается зернистая дистрофия, вакуолизация клеток. В просвете канальцев небольшое количество белковой зернистой массы. В дистальных отделах нефрона обнаружены гиалиновые и зернистые цилиндры.

При введении средства в дозе 19,2 мг/кг отмечается полнокровие сосудов, зернистая дистрофия эпителия извитых канальцев. Деструктивные изменения отсутствуют. В просвете единичных канальцев - белковая масса.

При введении средства в дозе 9,6 мг/кг выявлены умеренные расстройства кровообращения.

В дозе 4,8 мг/кг морфологических изменений в почках не выявлено.

Печень - при введении в дозе 153,6 мг/кг наблюдаются резкие расстройства кровообращения, полнокровие центральных вен, прилегающих капилляров. В гепа- тоцитах отмечается зернистая и вакуольная дистрофия, дискомплексация балок, очаговые некрозы тканей с лейкоцитарной пери- фокальной инфильтрацией. Встречаются единичные двухядерные гепатоциты с ги- перхромными ядрами.

При введении препарата в дозе 38,4 мг/кг отмечается расстройство кровообращения, полнокровие сосудов, дискомплексация балок, зернистая дистрофия гепатоцитов, очаговая лимфогистоцитарная инфильтрация. По ходу междольковых сосудов и триад выражена лимфоидная клеточная инфильтрация.

При введении средства в дозе 19,2 мг/кг выявлено полнокровие, дискомплексация балок, очаги инфильтрации по ходу триад..

При введении средства в дозе 9,6 мг/кг установлено, что морфоструктурных изме нений со стороны печени нет. Выявлены лишь незначительные расстройства кровообращения. При введении средства в дозе 4,8 мг/кг. не выявлено никаких .морфологических изменений.

Головной мозг - при введении средства в дозах от 153,6 до 4,8 мг/кг морфологических изменений не выявлено.

Мышцы - при введении средства в дозах от 153,6 до 4,8 мг/кг морфологических изменений не выявлено.

Как видно из вышесказанного, возникающие гистоструктурные изменения в исследуемых органах зависят от величины введенной дозы Лимаглюта и наиболее значимы в почках. Терапевтическая же доза Средства не вызывает сколь-либо значимых изменений в почках, печени, головном мозге и мышцах экспериментальных животных.

Воспроизведение модели экспериментального уролитиаза и проверка эффективности предлагаемого средства.

Исследования выполнены на 10 поло- врзрелых крысах-самцах массой около 200,0 г. В начале эксперимента определяли. рН и суточное количество мочи животных в условиях физиологической нормы, проводили микроскопическое исследование осадка мочи. Затем у животных была воспроизведена модель мочекаменной болезни по методу Е.К.Калантаровой. С целью проверки эффективности Лимаглюта 5 животным е моделью уролитиаза ежидневно вводили per os терапевтическую дозу средства (из расчета 4 мг/кг массы тела). 5 животных служили контролем. В течение эксперимента определяли рН мочи,, величину суточного диуреза, проводили микроскопию осадка. На 5 сутки эксперимента все животные были умерщвлены и у них взята ткань почек для изучения 5 гистотопографии кальция методом окраски по Косса.

Изучение влияния лечебных доз на рН мочи при экспериментальном уролитиазе. У экспериментальных животных с восп0 роизведенной моделью мочекаменной болезни отмечается сдвиг рН мочи в кислую сторону. На 5 сутки эксперимента рН мочи составляет 4,93±0,25. В то же время у животных, получавших терапевтические дозы,

5 рН мочи на 1 сутки - нейтральное, а на 3 и 5 сутки эксперимента рН мочи приближается к соответственным для литолиза величинам (6,54 ±0,63).

Формирование модели мочекаменной

0 болезни сопровождается резким сдвигом рН мочи в кислую сторону, а введение терапевтических доз дает возможность управлять степенью алкализации мочи.

Исследование осадка мочи и суточного

5 диуреза..

При микроскопии нативных мазков мочи в первые сутки формирования мочекаменной болезни выявлено довольно большое количество кристаллов оксалата

0 кальция, количество которых прогрессивно возрастает на 3 и 5 сутки эксперимента. При микроскопии мазков мочи животных, которые на фоне воспроизведенной модели мо- чекаменной болезни получали

5 терапевтическую дозу, в первые сутки эксперимента выявлено небольшое количество кристаллов оксалата кальция, а на 3 и 5 сутки обнаруживались лишь единичные кристаллы в поле зрения. Отмечено также зна0 чительное увеличение суточного диуреза у экспериментальных животных, получавших терапевтические дозы (16,387±3,196 мл) по сравнению с нормой (9,841 ±2,264 мл ) и животными с воспроизведенной моделью

5 мочекаменной болезни (11,325±3,687 мл). Изучение гистотопографии кальция. В результате гистохимических исследований (окраска по Косса) установлено, что экспериментальная модель мочекаменной

0 болезни сопровождается пристеночным отложением гомогенной черной массы в дис- тальном отделе нефрона, а также пылевидной зернистостью черного цвета

5 находящихся свободно в просвете канальцев среди белковых масс. Макроскопически определяется скопление кристаллов солей кальция в чашечках и лоханке почек. В почках животных, которым вводили вещество (1) в терапевтических дозах отложения

солей кальция незначительны или вовсе отсутствуют.

При сопоставлении.полученных результатов экспериментальных исследований ли- толитические свойства вещества (1). более выражены по сравнению с таковыми Магур- лита.

Формула изобретения Литий-магниевая с.оль бис-4-аминопен- тан-1,5-дикарбоновой кислоты формулы

С-0-Мд-0-С 0

i I

1.,/ NАи

СНг

снг /

НС-1$Нг

сн,

I

СН2

I

H2N-CH

10

0 C-0-Li Il-O-C-0 обладающая литолитической активностью.

Изобретение относится к новому химическому соединению, конкретно к литий-магниевой соли бис-4-аминопентан- 1,5-дикарбоновой кислоты. Цель изобретения - поиск веществ, обладающих литолитической активностью. Изобретение позволяет расширить арсенал средств, воздействующих на организм. 2 табл.

Таблиц

Определение минимальной смертности дозы при внутрибрюшинном введении

Т а б л и ц а

Определение минимальной смертельной дозы при пероральном введении средства Лимаглют