Способ концентрирования эндонуклеазы из яда кобры Советский патент 1992 года по МПК C12N9/22 

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для концентрирования выделенной из яда кобры эндонуклеазы.

Известен способ концентрирования выделенной из яда кобры эндонуклеазы, осу- ществляемый путем упаривания растворителя из целлофанового диализного мешка с раствором фермента в токе холодного (4-б°С) воздуха, последующего диализа эндонуклеазы против буфера 0.02М трис--НС1 (рН 7,8) и последующего замораживания фермента при -20°С.

Недостатками известного способа явля- ются значительные потери активности эндонуклеазы при концентрировании и сложности с условиями хранения эндонуклеазы, предусматривающие наличие надежного кальвинатора.

Цель изобретения - снижение потерь эндонуклеазы при концентрировании и упрощение условий хранений целевого про дукта.

В раствор фермента перед упариванием в токе воздуха добавляют альбумин до конечной концентрации 0,05-0,5 мг/мл, а сконцентрированную и отдиализованную эндонуклеазу лиофилизуют.

Пример. Концентрирование эндонуклеазы проводят при 4-б°С. Фермент, выделенный из 1,5 г сухого яда кобры путем последовательного фракционирования раствора яда гель-фильтрацией на сефадексе G-75 (сверхмелком) и катионообменной хроматографией на SP-сефадексе С-25 (объем 121 мл), помещают в целлофановый диализный мешок, вносят в него 20мг (0,165 мг/мл) альбумина из сыворотки крови человека (Sigma, США) и упаривают мл в течение 3 сут в токе воздуха, периодически ополаскивая внешние стенки мешка дистиллированной водой. Сконцентрированный раствор эндонуклеазы диализуют против двух порций по 1 л 0.02М трис-НС -буфера (рН 7,8) в течение суток. Конечный объем 17,8 мл, потери фермента 18%. Затем препарат лиофилизуют. Потерь фермента нет.

СП

с

VJ ю

о

00 vj

3 17210874

Лиофилиэованный препарат эндонук-растворителя из целлофанового диализного

леазы хранят в герметично закрытых флако-мешка с раствором фермента в токе воздуха

нах при 4-6°С без потери активности, попри 4-6°С и последующий диализ эндонуккрайней мере, в течение 5 лет.леазы против 0,01-0,02 М трис-НС1-буфера,

Способ обеспе «иаает снижение потерь5 рН 7,8, о т л и ч а ю щ и и с я тем, что, с целью эндонуклеазы при концентрировании в 4,8снижения потерь эндонуклеаэы при концен- раза (с 86 до 18%), а также возможностьтрировании и упрощения условий хранения хранения фермента в обычном холодильни-целевого продукта, в раствор фермента пеке при 4-6°С и даже при комнатной темпе-ред упариванием добавляют альбумин до ратуре в течение нескольких недель.10 конечной концентрации 0,05-0,5 мг/мл, а

Формула изобретениясконцентрированную и отдиалиэованную

Способ концентрирования эндонуклеа-эндонуклеаэу лиофилиэуют. зы из яда кобры, включающий упаривание

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для концентрирования выделенной из яда кобры эндонуклеазы с целью производства с помощью этого фермента олигорибонуклеоти- дов. Целью изобретения является снижение потерь эндонуклеазы при концентрировании и упрощении условий хранения целевого продукта. Способ заключается в том, что в раствор фермента перед упариванием в токе воздуха добавляют альбумин до конечной концентрации 0,05-0,5 мг/мл, а сконцентрированную и отдиализованную эндонуклеазу лиофилизуют.