(Л
С
название | год | авторы | номер документа |
---|---|---|---|
Способ определения адреналина в биологическом материале | 1988 |
|
SU1681268A1 |
Способ определения биогенных моноаминов | 1984 |
|
SU1282006A1 |
Способ определения адреналина в биологическом материале | 1987 |
|
SU1562858A1 |
Способ количественного определения биогенных моноаминов | 1987 |
|
SU1518375A1 |
Способ получения ферментсодержащих пленок для определения моноаминов | 1987 |
|
SU1564187A1 |
Способ определения концентрации сульфидов в физических средах | 1989 |
|
SU1814065A1 |
Способ количественного определения N-нитрозоаминов: N-диметилнитрозоамин, N-метилэтилнитрозоамин, N-диэтилнитрозоамин, N-дибутилнитрозоамин, N-дипропилнитрозоамин, N-пиперидиннитрозоамин, N-пирролидиннитрозоамин, N-морфолиннитрозоамин, N-дифенилнитрозоамин, в пробах копченых мясопродуктов методом хромато-масс-спектрометрии | 2017 |
|
RU2657822C1 |
ТЕСТ-СИСТЕМА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НИЗКОМОЛЕКУЛЯРНЫХ МАРКЕРОВ НЕЙРОМЕДИАТОРНОГО ОБМЕНА В ОБРАЗЦАХ БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЕЙ, СПОСОБ ЕЕ ПОЛУЧЕНИЯ И СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КАТЕХОЛАМИНОВ И ИХ МЕТАБОЛИТОВ С ЕЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ | 2017 |
|
RU2708917C2 |
Способ получения модифицированного кремнеземного носителя для иммобилизации биоспецифических лигандов | 1987 |
|
SU1477439A1 |
Способ подготовки проб мочи на принципах мицеллярной экстракции для определения содержания адреналина | 2022 |
|
RU2800474C1 |
Изобретение относится к физико-химическим методам анализа моноаминов и может быть использовано для клинического и токсилогического анализов в медицине и фармакологии. Цель изобретения - повышение чувствительности способа. Способ включает в себя следующие операции: к анализируемой пробе добавляют нитрит натрия и соляную кислоту концентрации 0,1- 0,2М, продувают воздухом не менее 20 мин, далее вносят серотонин и инкубируют в присутствии биокатализатора с моноаминокси- дазной активностью до полного дезаминирования серотонина с последующим потенциометрическим определением выделившегося аммиака. Предел обнаружения адреналина 1 моль/л, что а 2 раза ниже, чем по известному способу.
Изобретение относится к физико-химическим методам анализа моноаминов и может быть использовано для клинического и токсикологического анализов в медицине и фармакологии.
Цель изобретения - повышение чувствительности способа.
Способ осуществляется следующим образом.
К исследуемой пробе, содержащей адреналин, добавляют соляную кислоту до конечной концентрации 0,1-0,2 М, затем нитрит натрия до конечной концентрации 0.1-0,2 М. Через 20 мин реакционную смесь продувают воздухом в течение не менее 20 мин.
Полученную пробу, содержащую нитрозо- амин адреналина, добавляют к биоспецифическому катализатору с моноаминоксидазной
(МАО) активностью и термостатируют, пропуская через ячейку кислород, затем в реакционную смесь добавляют серотонин (5 М) и измеряют время падёййя рН на 20 мВ в присутствии и в отсутствии серотонина. По градуировочной зависимости с использованием метода стандартных добавочных проб определяют содержание адреналина в по- следуемой пробе, исходя из формул
V/Vix-1-КПх};(1)
V/Vn-l-Kflx+a ;(2)
V/Vi2-1 K lx+2a,(3)
где V - скорость ферментативной реакции в
отсутствии серотонина (холостой опыт);
V| - скорость ферментативной реакции в присутствии серотонина (ингибитора):
Vn, V,2 - скорости ферментативных реакций в присутствии различных количеств добаотенного серотонина.
VI
сл о
00
го сл
К - константа;
Ix - концентрация адреналина в исследуемом растворе;
а - стандартная концентрация адреналина в добавленной пробе,
П р и м е р 1. Для построения градуиро- вочной зависимости 8,24 мг адреналина растворяют в 4,5 мл 0,1 н. HCI, затем добавляют 31 мг NaN02. Через 20 мин реакционную смесь продувают воздухом в течение 20 мин. Получают 4,5 мл 0,01 моль/л нитрозо- амина адреналина, который используют в дальнейших определениях в концентрациях 4,5- моль/л -7,2 моль/л.
0,5 г биоспецифического катализатора с МАО-актионостыо помещают между мембранами ячейки (1) и промывают 0,01 моль/л раствором боратного буфера (рН 7,6) и би- дистиллированной водой. Ячейку помещают в сосуд для измерений с. газовым зазором, добавляют 1,8 мл 0,1 моль/л боратного буфера рН 9,0, 2 мл стандартного раствора нитрозоамина адреналина концентрацией 45- . 9- 10, 1,8- , 3,6х , 7.2- моль/л, или 1,8мл Н20.
Измерительный сосуд закрывают, помещают в термостат при 25°С, включают магнитную мешалку и пропускают 02 без С02 до установления постоянного значения потенциала на потенциометре (около 10 мин). Далее поток 02 перекрывают, в реакционную смесь добавляют 0,2 мл серогони- на в концентрации 1 -10 моль/л (в смеси 5- 105 моль/л), герметически закрывают сосуд и измеряют время падения рН от 7,05 до 7,38 (на 20 мВ) в присутствии ингибитора нитрозозм тна адреналина и в его отсутствии. Рассчитывают отношение V/Vn и строят градуировочную зависимость,
П р и м е р 2. К 1,5 мл 1 моль/л раствора адреналина добавляют 4,5 мл 0,137 М соляной кислоты (концентрации в пробе 0,1 моль/л), затем добавляют 42 мг нитрита натрия (концентрация в пробе 0,1 моль/л). Через 20 мин реакционную смесь продувают воздухом в течение 20 мин. Получают 6 мл 2,5 10 моль/л нитрозоамина адреналина, который делят на 2 порции, и определение активности МАО проводят аналогично примеру 1, только в реакционную смесь вводят 0,2 мл серотина в концентрации 1-104 моль/л (в смеси 5, моль/л). По градуировочному графику находят концентрацию адреналина а пробе, т.е. 1,25 10 моль/л, но при определении активности МАО происходило разбавление начальной пробы в 8 раз, следовательно, исходная концентрация 1 моль/л.
П р и м е р 3. К 1,5 М 1 10 моль/л раствора адреналина добавляют 4,5 мл 0,2, М НС (концентрация в пробе 0,15 моль/л), затем добавляют 62 мг №N02 (концентрация о пробе 0,15 моль/л). Через 20 мин реакционную смесь продувают воздухом в течение 20 мин. Получают 6 мл 2,5 моль/л нитрозоамина адреналина, который делят по 2 мл на порции и далее определение ведут аналогично примеру 1), только используют 0,1 мл 1- 10 моль/л раствора серотонина (в пробе концентрация 1 -10 5 моль /л).
По градуировочному графику находят концентрацию адреналина в пробе, т.е. 1,25- 10 моль/л, но при определении активности МАО происходило разбавление начальной пробы в 2 раза, следовательно, исходная концентрация составляет 2,5 -10 моль/л..
П р и м е р 4. К 1,5 мл 1.105 моль/л раствора адреналина добавляют 4,5 мл 0,275 М HCI (концентрация в пробе 0,2 моль/л), затем добавляют 84 мг NaN02 (концентрация в пробе0,2 моль/л). Через 20 мин реакционную смесь продувают воздухом о течение 30 мин. Получают 6 мл 2,5- 10s моль/л нитрозоамина адреналина, который деляг по 2 мл па порции и определение активности МАО проводят аналогично примеру 1.
По градуировочному графику находят концентрацию адреналина в пробе, т.е. 1,25- 10 моль/л, по при определении активности МАО происходило разбавление начальной пробы и 2 раза, следовательно, исходная концентрация 2,5- 106 моль/л.
П р и м е р 5. Для анализа биологической пробы (плазма крови крысы) ее делят на три части, где к первой части ничего не добавляют, к второй часта добавляют адреналина концентрацией 1 -10 6 моль/л (концентрация в пробе 5 моль/л) и к третьей части добавляют адреналина 2- моль/л (концентрация в пробе 1 моль/л).
Далее во асе три пробы добавляют 0,5 г №N02 и 0,1 мл 2М НС и пропускают через раствор воздух в течение 20 мин для удаления окислов азота. В реакционную смесь добавляют 2 мл 0,1 моль/л боратного буфера рН 9,0 и 1,8 мл подготовленной пробы без добавки и с добавкой адреналина 5 и i моль/л, далее проводят все операции аналогично примеру 1.
Концентрацию адреналина рассчитывают по формулам (1)-{3). Обнаружено, что плазме кроьи крысы концентрация адреналина 5 10 моль/л.
П р и м е р 6. Для анализа биологической пробы - крови человека - необходимо анализируемую пробу разделить на три части, где к первой ничего не добавляют, к второй части добавляют адреналин в концентрации 1 -10 моль/л (концентрация в пробе 5 моль/л) и к третьей части добавляют адреналин в концентрацию 2 моль/л (концентрация в пробе 1-Ю6 моль/л). Далее определение ведут аналогично примеру 5.
Концентрацию адреналина в крови рассчитывают по формулам (1)-(3). Обнаружено, что в крови куонцентрация адреналина составляет 2,55 -10 молк/л.
Пример. Аналогично, как в примере 5, определяют адреналин в экстракте мышцы крысы. Концентрацию адреналина также рассчитывают по формулам (1}-{3). Обнаружено, что в экстракте мышцы крысы содержится 2- моль/л адреналина.
Примере. Для анализа биологической пробы-экстракта мышцы кролика - необходимо анализируемую пробу разделить на три части, где к первой части ничего не добавляют, к второй части добавляют адрена- лин в концентрации моль/л (концентрация в пробе 5 моль/л) и к третьей части - адреналин в концентрации 1 моль/л (концентрация в пробе 1 моль/л).
Далее определение ведут аналогично примеру 5. Концентрацию адреналина рассчитывают по формулам (1)-{3)- Найдено, что в экстракте мышцы кролика концентрация
адреналина составляет 1.65 .
Известным способом концентрацию адреналина в экстракте мышцы кролика определить невозможно.
По сравнению с известным использование предлагаемого способа позволяет повысить чувствительность определения адреналина в биологических объектах в 2 раза. Предел обнаружения адреналина в заявляемом способе составляет 1-
моль/л, по известному способу предел обнаружения равен 2 М.
Формула изобретения Способ определения адреналина, включающий добавление в исследуемую пробу
серотонина, дезаминирование с использованием биоспецифического катализатора с моноаминоксидазной активностью и потен- циометрическую регистрацию аммиака, о т- личающийся тем, что, с целью повышения чувствительности способа, перед введением э пробу серотонина в нее добавляют соляную кислоту и нитрит натрия в конечной концентрации 0,1-0,2 мдля каждой добавки, затем пробы продувают воздухом в течение
не менее 20 мин.
Авторское свидетельство СССР по заявке № 4460126/30-14, кл.С01 N33/74, 14.07.88. |
Авторы
Даты
1992-08-23—Публикация
1988-12-12—Подача