Способ получения производных 3-фенил-5,6-дигидробенз/с/акридин-7-карбоновой кислоты Советский патент 1992 года по МПК C07D219/04 

% Т/С Средний период выживания обработанных особей х 100% Ср ёд ни и ffejpй бд в ы и о н т р о л ь н

Изобретение касается гетероциклических веществ, в частности получения производных 3-фенил-5.6-дигидробенз с акридин-7-кар- боновой кислоты общей ф-лы RI Иь Ч где RI С(0)ОН или C(0)ONa: R2 Н. F: R3 и R4 (независимы) Н или (R3 + RI) S. когда RI C(0)ONa и R2 F. обладающих противоопухолевой активностью, что может быть ис пользовано в медицине. Цель - создание новых;более активных веществ указанного класса. Синтез в условиях реакции Пфицин- гера ведут из соответствующего изатина и 6-фенил-3,4-дигидро 1(2Н) нафталенона или кетона с последующей обработкой при необходимости NaOH. Новые вещества активны в отношении лейкемии L1210.4 табл. сл С

Мышей, выживших до 30-го дня, считали л вылеченными. Их в подсчете среднего периода выживания не учитывали.JQ

Для определения активности соединения использовали критерий института NCI.

Соединение считалось имеющей умеренную активность против лейкемии L 1210, когда его % Т/С составлял 125% и име- 15 ющей хорошую активность против лейкемии L 1210, когда его % Т/С составлял 150%.

Результаты этого испытания приведены в табл. 1. Они показывают, что соединения 20 I более эффективны против лейкемии L 1210 Для определения активности соединения использовали критерии института NCI. мышей по сравнению с аналогичным соединением примера 118 патента СССР Мг 1.393.314.

Испытание Xenograft Test человеческой карциномы толстой кишки DLD-2.

Клеточную линию опухоли DLD-2 получали из первичной опухоли толстой кишки пациента мужского пола в результате хирургического вмешательства. Клеточную линию подвергали последовательному пассажу в побритых лишенных зобной железы мышах.

25

30

ре поваренной соли. Прощупываемые опухоли появляются в течение 7-10 дней и имеют вес ок. 50 мг. Мышей подбирают по парам относительно веса опухоли и пола мышей, объединяя их в группы по 10особей. Им раз в сутки в течение 9 следующих друг за другом дней внутрибрюшинно вводят испытуемые соединения и контрольную жидкость. Потерю веса тела 20% в день 5 рассматривают как критерий токсичности. Размер и вес опухолей регистрируют раз в неделю. Чеоез 18 дней после впрыскивания кашицы взвешивают и умерщвляют мышей, а затем вырезают и взвешивают опухоли.

Эффективность испытуемых соединений определяют на основе степени ингиби- рования роста опухолей, у обработанных ими мышей по сравнению с контрольными мышами, обработанными всего лишь контрольной жидкостью. Вес исходных опухолей (в мг) подсчитывают на основе их размера (в мм) с использованием формулы для определения объема продолговатого эллипсоида (ДхШ2/2). Для каждой группы об- работанных особей и для группы, обработанной контрольной жидкостью, подсчитывают чистый вес опухоли, вычитыВ день 0 аутбредным мышам-самцам и сам- 35 вая первоначальный (расчетный) вес оп ухокам породы Swissmice, имеющим ген NU/NU и вес 22-30 г вводили 0,2 мл 25%-ной опухолевой кашицы. Последнюю получают размельчением свежих опухолей DLD-2, подкожно выращенных при пассаже в мышах, в стерильном физиологическом растео40

ли из конечного (фактического) веса в день 19. Приемлемый средний вес опухоли контрольной группы составляет 1 г. Результаты выражаются в проценте ингибирования роста опухоли по сравнению с контролем по формуле:

% ингибиро- Средний рост опухоли обработанных особей

ванияСреХнйй ТГост1ту1П5лтТкС1нтр Ольн1б1х оСо 6е й х 100%

лась спонтанно в 1У54 г на коже у основания 45 уха мыши C57BL. Линию сохраняли путем последовательного пассажа в мышах-самках C57BL

, Для определения активности соединения использовали критерии института NCI Соединение считалось имеющим умеренную активность против карциномы толстой кишки DLD-2, когда процент ингибирования им роста опухоли составляет 58-89% и имеющим хорошую активность против карциномы толстой кишки DLD-2, когда процент ингибирования им роста onv- х оли составляет 90%.

Результаты этих испытаний приведены в табл. 2. Они показывают, что в гесте Xenograft соединения I эффективны против человеческой карциномы толстой кишки в мышах.

Испытание мышиной меланомы В16 Клеточная линия опухоли В16 образова50

65

В день 0 мышам-самкам B6C3F1 внутрибрюшинно вводят 0.5 мл 10%-ной опухо- левой кашицы. Последнюю получают гомогенизацией свежих опухолей В16, подкожно.выращенных в мышах C57BL, н холодном физиологическом растворе поваренной соли. Мышей подразделяют на группы по 10 особей в каждой, причем 20 мышей образуют контрольную группу. Им раз в сутки в течение 9 следующих друг за другом дней, начиная с дня 1, внутрибрю

5

0

5

0

ре поваренной соли. Прощупываемые опухоли появляются в течение 7-10 дней и имеют вес ок. 50 мг. Мышей подбирают по парам относительно веса опухоли и пола мышей, объединяя их в группы по 10особей. Им раз в сутки в течение 9 следующих друг за другом дней внутрибрюшинно вводят испытуемые соединения и контрольную жидкость. Потерю веса тела 20% в день 5 рассматривают как критерий токсичности. Размер и вес опухолей регистрируют раз в неделю. Чеоез 18 дней после впрыскивания кашицы взвешивают и умерщвляют мышей, а затем вырезают и взвешивают опухоли.

Эффективность испытуемых соединений определяют на основе степени ингиби- рования роста опухолей, у обработанных ими мышей по сравнению с контрольными мышами, обработанными всего лишь контрольной жидкостью. Вес исходных опухолей (в мг) подсчитывают на основе их размера (в мм) с использованием формулы для определения объема продолговатого эллипсоида (ДхШ2/2). Для каждой группы об- работанных особей и для группы, обработанной контрольной жидкостью, подсчитывают чистый вес опухоли, вычитывая первоначальный (расчетный) вес оп ухо

ли из конечного (фактического) веса в день 19. Приемлемый средний вес опухоли контрольной группы составляет 1 г. Результаты выражаются в проценте ингибирования роста опухоли по сравнению с контролем по формуле:

В день 0 мышам-самкам B6C3F1 внутрибрюшинно вводят 0.5 мл 10%-ной опухо- левой кашицы. Последнюю получают гомогенизацией свежих опухолей В16, подкожно.выращенных в мышах C57BL, н холодном физиологическом растворе поваренной соли. Мышей подразделяют на группы по 10 особей в каждой, причем 20 мышей образуют контрольную группу. Им раз в сутки в течение 9 следующих друг за другом дней, начиная с дня 1, внутрибрюшинно вводят испытуемые соединения и контрольную жидкость. Потерю веса тела 20% в день 5 рассматривают как критерий токсичности. Приемлемым средним периодом выживания контрольных животных счи% Т/С Средний период выживания обработанных особей

Средний период вьГжйвания контрольный особей х 100%

Мышей, выживающих до 90-го дня, считают вылеченными. Их в подсчете среднего периода выживания не учитывают.

Для определения активности соединения использовали критерии института NCI.

Соединение 1 считается имеющим умеренную активьоить против меланомы В16. когда его % Т/С составляет 125% и имеющим хорошую активность против меланомы 816, когда его % Т/С составляет 150%.

Результаты этого испытания приведены в таб. 3. Они показывают, что соединения I эффективны против меланомы В16 в мышах.

Испытание человеческой меланомы RPMI-7272 ин витро.

Испытывали также способность предлагаемых соединений к ингибированию роста клеток человеческой меланомы RPMI-7272 ин витро.

Клетки человеческой меланомы RPMI-| 7272 (Quinn с comp, I. Natl. Cancer Inst, 59, 301-5 (1977), разводят в среде RPMI-1640,- содержащей дополнительно 10 ммолей три-, цина {рН 7,8), 10 ммолей HEPES (рН 7.3), 0,075% бикарбоната натрия, и 10 об.% термически дезактивированной эмбриональ- ной бычьей сыворотки в .увлажненной атмосфере, содержащей 95% воздуха и 5% . В начале испытания высеивают клетки, в количестве 3x10 на чашку (35 мм). Для культур, которые предназначены для получения всего лишь питательной среды (контрольные культуры), предусматривают по 4 чашки, а для культур, предназначенных для введения разных концентраций соединений - по одной чашке для каждой дозы соединения. Через 24 ч после высева в две одинаковые контрольные клеточные культуры вводят трипсин и сосчитывают клетки. применяя счетчик/кольтер (1 день контрольного подсчета). В это время к культурам добавляют испытуемые соединения разных концентраций (от 100 до 0.00001 мкг/мл: а к контрольным- всего лишь питательную среду. Через 72 ч после добавления соединений клетки обрабатывают трипсином и их сосчитывают. Подсчитывают количество удвоений числа клеточных популяций (день 4) в присутствии или отсутствии соединений.

Значение IDso выражает дозу соединетают 14-22 сут. Результаты испытаний выражаются как процент среднего периода выживания контрольных животных, обработанных одной лишь контрольной жидкостью, согласно формуле

10 ния (в мкг/мл), которая необходима для ин- гибирования удвоения клеток на 50%. Соединение считается активным ин витро против меланомы RPMI-7272, когда его значение ID50 Ю мкг/мл. Количество удвое- 15 ний популяций контрольных культур в тече- . ние 72 ч колеблется в пределах 3-4.

Соединения растворяют в диметилсуль- фоксиде в концентрации 10-25 мг/мл. Приготовляют разбавления до 1 мг/мл в полной о питательной среде. Из этих растворов приготовляют последовательно 10-кратные разбавления и добавляют их к культурам.

Результаты испытаний приведены в

табл. 4. Они показывают, что соединения

5 являются сильнодействующими ин витро

ингибиторами роста клеток человеческой

меланомы RPMI-7272.

Формула изобретения Способ получения производных 3-фе- 0 нил-5,6-дигидробенз с -акридин-7-карбоно вой кислоты общей формулы I

1

Кь

где RI - СООН или COONa:

R2 - Н или F;

Кз и R/J- независимо друг от друга Н или вместе S при условии, что в случае, когда RI - COONa, R2 - не является F. отличающийся тем, что изатин общей формулы .

, Н

где R2 имеет указанные значения, подвергают взаимодействию в условиях реакции Пфицингера с 6-фенил-3,4-дигидро- 1(2Н)-нафталеноном или кетоном формулы

полученное при этом соединение I. где RI - СООН. выделяют или. в случае необходимости, обрабатывают гидроокисью натрия.

Лейкемия 1210

Мышиная меланома В 16

Меланома RPMI-7272

Т а б л и ц а 1

ТаблицаЗ

Таблица