1 1364239
Изобретение относится к получению новых производных митомицина С, а именно 7-ациламино-9а-метоксимитозана общей формулы
О
к
о
Z xJl xCHzOCNHa
l-rtj- -.VT
™ « NRi
О
где R,- водород или метилу
Rj означает группы , R NHCO- , (R40),PS или ,- .где Rj - водород, низший алкил неза- мещенньй или замещенный фтором или хлором, фенил, бензил или циклогек- сил, R4 низший.алкил или бензил, обладающих противоопухолевым свойством.
Целью изобретения является разработка на основе известных методов способа получения новых соединений, обладающих повьш1енной фармакологической активностью при низкой токсичности . .
П р. и м е р 1. 7-Формиламино-9а- метоксимитозан (BL-6859).
В атмосфере аргона добавляют 6 мл диметилформамида к смеси 549 мг (1,78 ммоль) митомицина С и 214 мг 60%-ной дисперсии в масле NaH (4,45 ммоль). После перемешивания в течение 10 мни при комнат ной температуре смесь охлаждают до -20°С и добавляют 0,6 мл фенилформата, содержащего 65% чистого продукта (3,5 ммоль). Реакционную смесь перемешивают полчаса при , после чего в течение часа теглтературу по вьш1ают до комнатной. После прекращения реакции добавлением твердого COj реакционную смесь разбавляют этил., ацетатом (EtOAc). Полученный осадок отделяют фильтрованием и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток хроматографируют на 5% метанола (МеОН) в качестве силикагеля с получением 306 мг (47%) искомого соединения, часть KoTopofo была перекристаллизована из ацетона и эфира, т.пл. 280 С,
Вычислено,%: С 53,04; Н 5,01;. N 15,46,
,gN,Oi
Найдено,%: С 52,75; Н 5,09i N 15,96.
0
5
0
5
49,U Н 4,43j
Заменой фенилформата фенилтиоаце- татом или этилтиоформатом могут быть получены 7-(тиоацетил или тиоформил)- амино-9а-метоксимитозаны.
Пример 2. 7-Трифторацетил- амино-9а-метоксимитозан ().
На основе 300 мг (0,899 ммоль), митомицина и 2,25 ммоль NaH реакцию проводят, как описано в примере 1. В качестве ацилирующего средства применяют п-нитрофенилтрифторацетат. тех на силикагеле (10% MeOH-CHjCl,;) дала 91 мг (24%) искомого вещества в виде пурпурно-красного аморфного твердого вещества с т.пл. 93-95 С.
Вычислено,%: С 47,45; Н 3,98j N 13,01 .
CnH,7N40i Найдено ,%: С
N 12,91.
Пример 3. 7-Ацетш1амино-9а- метоксимитозан (BL-6905).
На основе 668 мг (2 ммоль) митомицина С и 4 ммоль NaH проводят реакцию, как указано в примере 1. В качестве ацилирующего средства применяли 314 мг (2 ммоль) N-гидроксисук- цинимидового эфира уксусной кислоты„ Вытеснительной хроматографией на силикагеле (3% MeOH-CH Cl,j,) получено 200 мг (27%) искомого соединения с т.пло 110-112°С. . Вычислено,%: С 51,77; Н 5,62;
14,21.
С„Н5оК404-Н-20
Найдено,%; С 51,58; Н 5,25 N 14,1.
Пример 4. 7-2-Хлорацетилами- 0 но-9а-метоксимитозан (BL-6904).
На основе 668 мг (2 ммоль) митомицина С и 4 ммоль NaH проводят реакцию, как указано в примере 1. В качестве ацилирующего средства приме- 5 кяют 520 мг (3 ммоль) фенилхлорацета- та. Хроматографией на силикагеле (5% MeOH-CH,jCl,,) получают 60 мг (7,3%) искомого соединения с т.пл. 118-120°С.
5 N
Было также выделено примерно 100 мг исходного продукта.
Вычислено,%: С 49,7; Н 4,66, N 13,64.
C,H,gCl,
Найдено,%: С 51,31i Н 5,05-, N 11,75,
П.ример 5. 7-Метансульфонил- амино-9а-метоксимитозан (BL-6885).
В атмосфере аргона к смеси 668 мг (2 ммоль) и 4 ммоль NaH добавляют 6 мл димет пформамида. После перемешивания в течение 20 мин при комнатной температуре смесь охлаждают до -25°С и к ней добавляют 454 мг (2 ммоль) п-нитрофенилметансульфона- та. Реакционную смесь вьщерживают 4 ч при -25°С. После добавления в реакционную смесь твердого СО к ней прибавляют EtOAc и промьтают рассолом. Высушиванием над и удалением растворителя получают пурпурно- красный остаток, который хроматогра- фируют на нейтральной окиси алюминия (3% МеОН-СН С) с получением 100 мг (12%) искомого соединения, т.пл. 126-128 С.
Вьиислено,%: С 43,14j Н 4,75,
N 12,58.
C,,H,,N Og-HjO
Найдено,%: С 42,99; Н 4,67,- N 12,6.
Пример 6. (трет.-Буток сика рбониламино)пропионил1 амино-9а- метоксимитозан.
На основе 350 мг (1,05 ммоль) митомицина С и 2,62 ммоль NaH реакцию проводят так, как указано в при- мере 1. В качестве ацилирующего средства применяют N-гидроксисукциними- довый эфир М-БОК-/3-аланина. ТСХ хроматографией на снликагепе (10% CHjOH-CH Clj) получают 181 мг (34%) искомого соединения с т.пл. 121-125. С
Вычислено,%: С 52,76 Н 6,33; N 13,28.
Cj,Hj,NjOg-H20
Найдено,%: С 52,85; Н 6,22; N 12,83.
Пример 7. 7-Метоксикарбо- ниламино-9а-мвтоксимитозан (ВМУ- 25069).
К смеси 334 мг (1 ммоль) митоми- цина С и 96 .мг (2 ммоль) NaH в виде 50%-ной дисперсии в масле добавляют в атмосфере N 5 мп сухого диметил- формамида (ДМФ). Смесь перемешивают 10 мкн при комнатной температуре, после чего охлалф;ают до -30°С. В твердом виде добавляют 4,82 мг (2,3 ммоль) метил-п-нитробензилкар- боната и перемешивание продолжают 1 ч при . В реакционную смесь добавляют небольшое количество твердой двуокиси углерода (сухого льда), а затем воды и EtOAc. Органический слой промыт рассолом и высушен над ,. Полученный после испарения растворителя остаток хроматографиру- ют на SiOi(2% CHjOH-CHjClj) с получением 150 мг (38%) искомого соединения, т.пл. 106-107 с.
Вычислено,%: С 52,04; Н 5,14; N 14,28,
C.,
Найдено,%: С 52,03; Н 5,15; N 14,2.
Пример 8. 7-Этокс.икарбонил амино-9а-метоксимитозан (ВМУ 25082) .
На основе 334 мг (1 ммоль) митомицина С, 96 мг 50%-ной дисперсии в мгГсле(2 ммоль) NaH и 450 мг этил-п-нит- робензилкарбоната получено заглавное соединение,.аналогично примеру 7, в количестве 150 мг (37%), т.пл.ЮО- 102°С..
Вычислено,%: С 51,55; Н 5,64; N 13,34.
,75
Найдено,%: С 51,52; Н 5,64; N 13,47.
Пример 9. 7-(2-Meтoкcи- этoкcи)кapбoнил aминo-9a-мeтoкcими- тoзaн (ВМУ-23071).
. На основе 688 мг (2 ммоль) ми го- мицина С, 192 мг NaH в виде 50%-ной дисперсии в масле и 960 мг (4 ммоль) 2-метоксиг тил-п-нитробензилкарбона- та получено искомое соединение путем аналогичным описанному в примере 7, в количестве 300 мг (35%), т.ш1.82- 84°С.
Вычислено,%: С 51,76; Н 5,6; N 12,71.
,25
Найдено,%: С 52,09-, Н 5,5; N 12,72.
Пример 10. 7-Изопропилами- нокарбониламино-9а-метоксимитозан
(ВМУ-25003),
К смеси 668 мг (2 ммоль) ,митомици на С, 192 мг (4 ммоль) NaH в виде 50%-ной дисперсии в масле добавляют в N2 8 мл сухого дай. Полученный раствор перемешивают 20 мин при комнатной температуре, после чего ох- . лаждают до Добавляют 340 мг (4 ммоль) изопропилизоцианата и перемешивание продолжают при еще 1 ч. В реакционную смесь добавляют небольшое количество сухого льда, затем EtOAc и воду. Органический сло промывают рассолом и сушат над Na2S0 Полученный после испарения растворителя остаток хроматографируют на
SiO, (3% СНзОН-СН,,С12) с получением 140 мг (17%) искомого соединения, т.пл. 163-165°С.
Вычислено,%: С 52,71; Н 5,99; N 16,17.-
C,3Hj,N50, 0,75 HiO
Найдено,%: С 53,01; Н 6,03; N 15,86.
Ранее элюирующаяся фракция дала в количестве 120 мг 1а-изопропиламино- карбонил-7-(изопропиламинокарбонш1) амино-9а-метоксимитозан (24%).
Пример 11. 7-Циклогексш1- аминокарбониламино- 9а-метоксимитозан (ВМУ-6936).
На основе 334 мг (1 ммоль) мито- мицина С, 96 мг (2 ммоль) NaH в виде 50%-ной дисперсии в масле и 250 мг (2 ммоль) циклогексилизо1щаната в количестве 100 мг (22%) получено искомое соединение способом, описанным в примере 10, т.пл, 138-140°С. Вычислено,%: С 55,86; Н 6,5- N 14,81 fO,75
Найдено: С 55,83, Н 6,22, N 14,44
Ранее вымывающаяся, фракция дала 70 мг (14%) 1а-циклогексш1аминокарбо нил-7-циклогексиламинокарбониламино- 9а-ме1 оксимитозана.
Пример 12, 7-Бензиламинокар бонил-9а-метоксимитозан (BL-6955),
На основе 668 мг (2 ммоль) митоми цина С, 192 мг (4 ммоль) NaH в виде 50%-ной дисперсии и 536 мг (4 .ммоль) бензйлизоцианата получено 110 мг (12%) искомого соединения по методике, описанной в примере 10, т.пл, 145-1474.
Вычислено,%: С 58,53; Н 5,45, N 14,84,
C jHjsNsOfe
Найдено,%: С 58,93; Н 5,45; N 14,12,
Пример 13, 7-Циклопропанкар бонила№1но-9а-метоксимитозан (BL- 6906),
,На основе 668 мг (2 ммоль) митомицина С, 4 ммоль NaH и 370 мг (2 ммол (2 ммоль) N-гидроксисукцинимидового эфира циклопропанкарбоновой кислоты проводят реакцию по методике, описанной в примере 1, Хроматографировани- ем на силикагеле (2% СН ОН-СНjClj) получают 65 мг (8%) искомого соедине ния т,пл, 102-104 С,
Вычислено,%: С 55; Н 5,59; N 13,5
С 19Н2iN О4,-0,75 HjO
5
д
Q g
5
Найдено,%: С 55,16; Н 5,88; N 12,86,
Пример 14, 7-Диэтилтиофос- фориламино-9а-метоксимитозан (BL- 6938),
На основе 450 мл (1,35 ммоль) ми- томицина С, 2,7 ммоль NaH и 280 мг (1,49 ммоль) диэтилфосфорилхлорида проводят реакцию по методике, указанной в примере 1. Колоночной хроматографией на силикагеле (2% ) с последующей ТСХ на силикагеле получают 39 мг (8%) 1а-диэтш1- тиофосфорил-7-дизтилэтилтиофосфорил- амино-9а-метоксимитозан (BL-6934), т,пл, 47-49 С,
Вычислено,%: С 43,26; Н 5,68; N 8,77,
С,зНз Н405Р252
Найдено,%: С 43,29; Н 5,41; N 8,83,
Более полярная фракция дала 91 мг (14%) искомого соединения, т.пл, 76-79°С.
Вычислено,%: С 46,91; Н 5,6; N 11,52.
CI,,O,PS
Найдено,%: С 47,02; Н 5,53, N 11,88.
Пример 15, N -Бензилокси карбонил-7-бензилоксикарбониламнно- 9а-метоксимитозан (ВМУ-25072),
На основе 668 мг (2 ммоль) мито- мицина С, 4 ммоль NaH и 997 мг (4 ммоль) бeнзил-N-гидpoкcиcyкп ни- мидкарбоната проводят реакцию в соответствии с примером 7. Хроматографией на С1шикагеле (2% CHjOH-CH Cl) получено 490 мг (41%) искомого соединения, т.пл. 68-70 С.:
. Вычислено,%: С 61,79; Н 5,24 N 9,63.
C3,H,,N40s
Найдено,%: С 61,68; Н 5,02;N
Пример 16, 7-Ацетиламино- 9а-метокси-1а-метилмитозан (BL-6916).
На основе 348 г (1 ммоль) порфиро- мицина, 2 шоль NaH и 314 г (2 ммоль) N-гидроксисукцинимидового эфира ук- .сусной кислоты проводят реак1щю соответственно примеру 1. Препаративно ТСХ на силикагеле (10% CH OH-CH-jCl) получают 40 мг (10%) искомого соединения, т.пл. 101-103°С.
Вычислено,%: С 54,13; Н 5,8, N 13,72.
C,jH,j,(,-0,5
N
Найдено,%: С 54,37, Н 5,71, 13,88.
Пример 17. 7-ГЗ-(Этоксикар боршл)пропионил амино-9а-метоксими- тозан (BL-6920)„
На основе 334 мг (1 ммоль) IVIHTO- мицина С, 2 ммоль NaH и 486 мг (2 ммоль) N-гидроксисукцинимидового эфира моноэтилсукцината проводят реакцию соответственно примеру 1, Хро матографированием на окиси алюминия (2% CHjOH-CH-jClp получено 130 мг (30%) искомого соединения, т.пл. 52-55 с.
Вычислено,%: С 52,61; Н 6,19; 12,51.
. 0,75
Найдено,%: С 53,99 Н 5,69; 12,12.
Пример 18. 7-Бензош1амино- 9а-метоксимитозан (BL-6930).
На основе 668 мг (2 ммоль) митом цина С, 4 ммоль NaH и 730 мг (3 ммоль) п-нитрофенилбензоата проводят реакцию соответственно пример 1. Хроматографированием на окиси алюминия (2% СН ОН-СН С) получено 150 мг (17%) искомого соединения, т.пл. 129-130°С.
Вычислено,%: С 57,89; Н 5,29; 12,27.
N
N
N
.
Найдено,%: С 575,71; Н 5,29; N 12,27.
Пример 19. 7-(2- Хлорэтил- амино)карбонилj амино-9а-метоксими-- тозан (BL-6931).
На основе 334 мг (1 ммоль) мито- мицина С, 2 ммоль NaH и 211 мг (2 ммоль) 2-хлорэтилизоцианата про- водят реакцию соответственно примеру 10. Колоночной хроматографией на окиси алюминия (3% CH OH-CHjClj) получено 50 мг (11%) искомого соединения, т.пл. 118-120 0.
Вычислено,%: С 48,16; Н 5,16 N 15,6.
C gHj2CIN50 V0,5- HjO
Найдено,%J С 48,21,, Н 5,16; N15,27.
Полученные соединения обладают более высокой противоопухолевой активностью и относительно низкой токсичностью по сравнению с митомицином Cj из них наиболее предпочтительными являются 7-формиламино 9а-метокси- митозан (пример 1), 7-ацетиламино- 9а-метоксимитозан (пример 3) и 7-цик
5
0
лопропанкарбониламино-9а-метоксими- тозан (пример 13).
Активность против мышиной лейкемии Р-388.
Табл.1 содержит результаты лабораторных испытаний на женских особях мьпией CDF , которым имплантировали внутрибрюшинно опухоль с помощью прививки 10 клеток серозной жидкости мьгашнной лейкемии Р-388 и которых затем обрабатывали различными дозами либо предлагаемого соединения, либо митомицином С. Соединения вводили инъекциями внутрибрюшинно. Каждую дозировку испытывали на группе из шести мьшей, в день прививки им вводили соединение в одной дозировке. В каждую серию экспериментов включали группу из 10 мышей, которьм для контроля вводили солевой раствор. Также для контроля выделяли группу, которой вводили митомицин. Опыт про- g должался 30 дней, для каждой группы определяли среднее время выживания в днях, кроме того, определяли число выживших к концу 30-дневного периода особей. Мьш1ей взвешивали перед опытом и через 6 дней. Изменение веса црини- мали за меру токсичности. Исследовали весрм 20 г, потеря веса примерно до 2 г считалась несущественной. Результаты вьфажали в виде Т/С, что является отношением среднего времени выживания обработанных мьшгей к среднему времени выживания обработанных солевьм раствором мышейг Как правило, мыши, обработанные раствором, умирали в течение 9 дней. Выражение максимальный эффект в табл.1 означает, при каком значении данной дозы значение Т/С имеет место. Цифры в скобках в табл.1-4 относятся к митомицину С, взятому для контроля в той же серии, что дает возможность установить относительную активность предлагаемых соединений относительно митомицина С. Минимальный эффект в единицах % Т/С считали равным 125. Минимальная эффективная доза, приводимая в табл.1 - это доза, приводящая к значению Т/С примерно 125. Два значения, приводимые -в табл.1 в графе Среднее изменение веса друг за другом соответствуют средней потере веса мыши при максимальной эффективной дозе и при минимальной эффективной дозе.
0
5
0
5
0
5
Табл.2 содержит результаты противоопухолевых испытаний при меланоме В16 на мышах. Мышам BDFy подкожно имплантировали опухоль. Опыт продолжался 60 дней. Каждую дозировку ис- пытывали на группе из десяти мышей, для которой определяли среднее время выживания. Контрольные зверьки, зараженные одновременно, которым вводили инъекцию носителя без лекарства, показали среднее время выживания в 24, дней. Время выживания по отношению к времени выживания контрольных зверьков (т/С) .использовали для вьфа- жения эффективности, для каждого ис- пытуемого соединения определяли максимальную и минимальную эффективные дозы. Минимальная эффективнай доза Т/С 125 о Для каждого уровня дозировки испытуемым зверькам вводили лекарство На 1-й, 5-й и 9-й день.
Табл.3 содержит дополнительные результаты противоопухолевых испьгганий на мышах BDFy с меланомой В1б, зараженных внутрибрюшинно. опухолью (0,5 мл 10%). Опыт продолжался 60 дней. Каждую дозировку испытывали на группе из десяти мьшей, для каждой группы определяли среднее время вы- живания. Контрольные зверьки, зараженные одновременно тем же путем, что и испытуемые, которым вводили инъекции носителя без лекарства, показали среднее время выживания в 20,5 дней. Времы выживания по отношению к контролю (т/с) использовали для определения эффективности,дпя каждого испытуемого соединения определяли максимальную и минимальную эффективные дозы. Шнимальная эффективная доза соответствовала значению % Т/С 125. Каждую дозировку испытуемого соединения вводили внутрибрюшинно на 1-й, 5-й,и 9-й день.
Табл.4 показьшает результаты-подавляющего действия на спинной мозг соединений примеров 1,3 и 13 при их внутривенном введении мышам по сравнению с митомицином Со Мьйаам вводили единственную дозу испытуемого соеди
нения в день О, а в дни О, 4 и 7 вели полный подсчет лейко1:1 1тов. Цифры . для дней 4 и 7 представлены в табл44 как процент изменения (j %) . Другие подсчеты произведены в дни О и 4, и их записывают как процентную разницу (4%) на день 4 Как показано в табл,4 группам из 10 зверьков давали разные дозы испытуемых соединений. Значения ii,данные в скобках, соответствуют сравнительным значениям для митомицина С. Был сделан вывод, что соединения по примерам 1,3 и 13 в меньшей стелени подавляют деятельность спинного мозга чем митомицин С, При дозах с равной летальностью указанные соединения показывают значительно меньшее действие при подсче- те нейтрофилов, чем митомицин С.
Фор м у ла изобре те н и я
г Способ получения 7-ациламино-9а- метоксимитозана общей формулы
О
30
CHzOCNHg ОСНз
NRi
где R - водород или метилу
Rj - груАпы КэСО -, R NHCO-, , ()jPS или ,j-, где Rj- водород, низший алкил, незамещенный или замещенный фтором или хлором, фенил, бензил или циклогексил, R4 низший апкил или бензил,
отличающийся тем, что на митомицин С в растворе диметилформа- мида действуют 1-1,5 мол,ч гидрида натрия с последующей обработкой образовавшейся при этом анионной формы митомицина С 1-2 мол.ч. соответствующего ацилирующего агента при температуре -30 до +25 С в среде диметил- формамида.
1228(195)2(4),6; +0,2
220(220)2(4) 0,5-2,8; -1,1
3186(195)1(4),6; +0,6:
13
Uba/ЗУ14
Таблица 3
Изобретение касается замешенных митомицина С, в частности получения 7-ациламино-9а-метоксимитозана (МТ) общей формулы R2-yVH-c-c(o;-c- с... cHj3-c(o/--vH. // Л I асн Н,С-С-Cft)-с-//-С з СИ-СИ- СИ-НК где R H,CHj;, R i группьГКз-сТо)-; R5-NHC(0)-; (0)-i (),гР-В-, , низший алкшт,не-или замещенный хлором или F, фенил, бензил или цик- логексил ; R. низпшй алкил или бензил, которые обладают противоопухолевым действием Цель изобретения - создание более активных веществ указанного класса. Синтез МТ ведут из митомицина С, который восстанавливают гидридом натрия (1-1,5 моля) в среде диметилформамнда (ДМФА) последующим ацилированием необходимым агентом 
| I.Am | |||
| Chem | |||
| Soc., 84, 3185-87, 1962, Internat | |||
| I | |||
| Pharm., 15, 49, 1983. |
