Способ получения биологически активных веществ элеутерококка колючего ЕLеUтнеRососсUS SеNтIсоSUS RUpR. ет МахIм. Советский патент 1993 года по МПК C12N5/04 

Изобретение относится к биотехнологии и касается способа получения культуры ткани элеутерококка колючего, продуцирующей биологически активные вещества - фёнольные гликозиды (элеутерозиды), используемые в медицине в качестве общести- мулирующих препаратов, обладающих адаптогенным действием.

Известны способы получения биологически активных веществ из культивируемых, клеток растений. Однако получаемая на искусственных питательных средах клеточная биомасса накапливает, как правило, значительно меньше биологических веществ, чем это свойственно растениям в природе. В большинстве случаев спектр биологически активных вещества, идентифицируемых в культивируемых клетках, также резко отличается от такового в исходных растениях.

Существуют различные способы получения продуктивных клеточных культур. Сводятся они чаще всего к подбору оптимальных условий культивирования и подбору оптимальных составов питательных сред. Для элеутерококка такие способы не разработаны.

Цель изобретения - разработка способа получения культуры ткани эутерококка колючего, биомасса которой накапливает фе- нольные гликозиды (элеутерозиды), свойственные интактному растению.

Способ состоит , что культуру тканей элеутерококка получают на питательной среде Мурасиге-Скуга, дополненной 1 мг/л 2,4-Д и 0,1 мг/л кинетна, и в дальнейшем выращивают в пересадочной культуре на агаризованной либо жидкой питательной

XI

ю

N3 СО СЛ Qs

СО

среде Мурасиге-Скуга, дополненной 4 мг/л а- НУК и 1 мг/л БАП.

Пример. Различные части молодых листьев, стеблей или корней после поверхностной стерилизации общепринятыми методами высаживают на питательную среду Мурасиге-Скуга, дополнительно содержащую 1 мг/л 2,4-Д и 0,1 мг/л кинетина. Пробирки или колбы с высаженными в асептических, условиях первичными эксплантатами переносят 6 термостатированное темнрҐ г)С)Ме щеДие (t 24-28°C, относительная влажность - 70-80%). Через 30-50 суток на эксплантатах появляется каллус. На средах, содержащих другие концентрации ауксина и цитокинина каллусо- обрэзование не происходило (табл.1).

Полученные каллусы характеризуются медленным темпом роста и имеют коричневый цвет. С целью повышения темпа роста каллуса и получения пассируемой продуктивной культуры ее переносят в жидкую или агаризованную питательную среду Мурасиге-Скуга, дополненную 4 мг/л а -НУК и 1 мг/л БАП. На других типах питательных сред пассируемая культура характеризуется более медленным темпом роста и темным цветом (табл.2).

Биомассу, полученную указанным способом, на 30-40 сутки роста отделяют от питательной среды, высушивают до воздушно-сухого состояния при t и определяют в ней наличие фенольных гликози- дов (элеутерозидов). Результаты хроматог- рафическогр анализа показывают наличие в полученной биомассе всех главных элеутерозидов, свойственных фармакопейному экстракту (табл.3).

Количественный анализ показал, что в 1 г сухой биомассы культивируемых клеток элеутерокохка содержится 10,5 мг фенольных гликозидов и 167 мкг элеутерозида В. Продуктивность культуры тканей элеутеро- кокка по фенольным гликозидам и элеутеро- зиду В составляет, соответственно, 116 мг и 1,47 мг на 1 л питательной среды на 20-е

сутки роста культуры.

Фор м у ла изобретения Способ получения биологически активных веществ элеутерококкз колючего

Eleutherococcus senticosus Rupr. et Maxim., включающий индукцию роста л выращивание биомассы культуры ткани на модифицированной питательной среде Мурасиге-Скуга и получение целевого про:

дукта, отл ича ю щийсятем, что индукцию роста биомассы проводят на питательной среде в присутствии 1 мг/л 2,4 Д и 0,1 мг/k кинетина, а выращивание биомассы осуществляют в жидкой или на агазированной питательной среде в присутствии 4 мг/л а - нафтилуксусной кислоты и 1 мг/л 6-бензи- ламинопурина.

Использование: биотехнология, медицина. Сущность изобретения: биологически активные вещества элёутёрЬкокка колючего получают из биомассы, полученной и выращиваемой в два этапа на модифицированной питательной среде Мурасиге-Скуга. 3 табл. Ч- Ё

35Т а б л и ц а 1 Каллусообразование элеутерококка колючего на разных типах питательных сред

Примечание: - образование первичного каллуса - отсутствие каллусообразования

Таблицэ2

Темп роста кульивируемых клеток элеутерококка колючего на разных типах питательных сред

Примечание

Темп роста обозначен - отсутствие роста;

+ увеличение биомассы за пассаж не более чем в 2 раза; ++увеличение биомассы за пассаж не менее чем в 2,5 раза.

Таблица 3

Хроматографический анализ содержания элеутерозидов в биомассе культивируемых

клеток

Продолжение табл.3