Способ диагностики аутоаллергических заболеваний Советский патент 1989 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к клинической иммунологии, в частности к способам диагностики хронических воспалительных заболеваний внутренних органов с. аутоиммунным механизмом патогенеза.

Цель изобретения - повышение точности диагностики и упрощение способа.

Способ осуществляют следующим образом.

Дпя исследования берут 10 мл периферической крови из локтевой вены в пробирку с гепарином (20 ед/мл). После отстаивания в течение 1 ч при 37 С из пробирки производят забор гшаэьы и разводят средой 199 в соот- ношении 1:2. Разведенную плазму осторожно наслаивают на градиент плотное- .

ти 1,078 г/см фиколл-верографина и центрифугируют 30 мин при 1500 об/мин. После центрифугирования пастеровской пипеткой отбирают лимфоцитарное кольцо на границе разделения фаз фиколл- верографин. Полученные клетки трижды отбывают средой 199 при 1000 об/мин .в .течение 10 мин. В камере Горяева производят подсчет клеток для определения концентрации взвеси с пос- ледующим доведением ее до 1 -loS 1 кп В первую пробирку вводят 0,25 мл клеточной взвеси указанной концентрации, 0,25 мл 0,5%-ного раствора эритроцитов барана и 0,1 мп водно-соле-i вой вытяжки из тканевых антигенов, содержащей 1,5% белка (опыт). Центрифугируют при комнатной температуре- 5 мин при 1000об/ з н с последующей

О5

СП

инкубацией в холодильнике при 4°С в

течение 1 ч. После инкубации осадок ресуспендируют и в камере Горяева определяют процент клеток, образовавших розетки q тремя и более эритроцитами барана. По разнице Т-РОК в контроле и опыте судят о сенсибилизации Т-лимфоцитов к вводимому антигену.

Пример. Больной К. , 36 лет, поступил в клинику с диагнозом хронический обструктивный бронхит в фазе обострения. При проведении предлагаемого способа с введением в реакцию

1467514

,05), и предлагаемого способа (% РОК (больные) 14,ltO,4 и 7, РОК (здоровые) 2,010,45, соответственно ,001) видно, что предлагаемой способ более достоверен, так как показатель достоверности различий между данными практически здоровых и больных лкдей максимален - ,001; в 10 то время как при известном способе он составляет лишь ,05, что обеспечивает большую точность диагностики,

Кроме того при параллельном сраврозеткообразования 0,1 мл водно-соле- 5 нении известного и предлагаемого сповой вытяжки из неизмененной ткани легкого, содержащей 1,5% белка, были получены следующие результаты: контроль Т-РОК 60%, .опыт Т-РОК 37%. Таким образом, 23% Т-лимфоцитов сенсибилизированы к нормальной легочной ткани. При введении в реакцию розет- кообразования 0,1 мл водно-солевой вытяжки из неизменной ткани печени, содержащей 1,5% белка, были получены следующие результаты: контроль Т-РОК 60%j опыт Т-РОК 45%, т,е, выявлена сенсибилизация 15% Т-лимфоцитов к не- изменной ткани печени. При целенаправленном клиническом обследовании у больного К, бьш выявлен хронический персистирующий гепатит. При проведении предлагаемого способа с лимфоцитами больного К, и водно-солевыми вытяжками из других органов и тканей сенсибилизации Т-лимфоцитов не выявлено, Т-лимфоциты здоровых людей не снижали розеткообразующих свойств при проведении предлагаемого способа.

Таким образом, предлагаемый способ дозволяет с высокой степенью достоверности определять степень ауто- сенсибилизации Т-лимфоцитов и при ис20

25

30

35

40

собов выявлено преимущество последнего в скорости исполнения.исследований , Время исследования при известном способе 132,,6 мин, при предлагаемом способе n3,3iO,5 мин (,001). Следовательно, на проведение исследования по предлагаемому способу требуется в 1,2 раза меньше времени, .чем при исследовании по известному способу.

Так как известный способ не удалось воспроизвести в 6 случаях из 25 (24%), а предлагаеМ)Ш спосо.б воспроизводится во всех 100% случаев, можно сделать вывод, что предлагаемый способ более точен по сравнению с известным,

Формула изобретения

Способ диагностики .аутоаллерги- ческих заболеваний, включающий забор крови у больных, выделение лимфоцитов, инкубацию их с антигеном и эритроцитами барана, определение розеткообразующих клетЬк и при уменьшении количества розеткообразующих клеток по отношению к контролю диагностируют аутоаллергические заболевания.

пользовании набора стандартных антит. j отличающийся тем, что, с

генов диагностировать патологический процесс на ранних стадиях, а также при латентном течении.

Из сравнения известного способа (% РОК (больные) 15,8t3,2 и % РОК (здоровые) 5,2t2,5, соответсвенно

50

целью повышения точности и упрощения способа, инкубацию лимфоцитов, антигена и эритроцитов барана осуществляют одновременно, при этом антиген используют в объеме 0,1 мл и концентрации белка 1,5%,, .

Редактор Н,Тупица

Составитель В.Литовченко Техред И.Верес

Корректор Л,Пилипенко

нении известного и предлагаемого спо

собов выявлено преимущество последнего в скорости исполнения.исследований , Время исследования при известном способе 132,,6 мин, при предлагаемом способе n3,3iO,5 мин (,001). Следовательно, на проведение исследования по предлагаемому способу требуется в 1,2 раза меньше времени, .чем при исследовании по известному способу.

Так как известный способ не удалось воспроизвести в 6 случаях из 25 (24%), а предлагаеМ)Ш спосо.б воспроизводится во всех 100% случаев, можно сделать вывод, что предлагаемый способ более точен по сравнению с известным,

Формула изобретения

Способ диагностики .аутоаллерги- ческих заболеваний, включающий забор крови у больных, выделение лимфоцитов, инкубацию их с антигеном и эритроцитами барана, определение розеткообразующих клетЬк и при уменьшении количества розеткообразующих клеток по отношению к контролю диагностируют аутоаллергические заболевания.

отличающийся тем, что, с

целью повышения точности и упрощения - способа, инкубацию лимфоцитов, антигена и эритроцитов барана осуществляют одновременно, при этом антиген используют в объеме 0,1 мл и концентрации белка 1,5%,, .

Корректор Л,Пилипенко

Изобретение относится к клинической иммунологии, в частности к способам диагностики хронических воспалительных заболеваний внутренних органов с аутоиммунным механизмом патогенеза. Целью изобретения является повышение точности диагностики и упрощение способа. У больных берут кровь, выделяют лимфоциты, отмывают в среде центрифугированием, ресуспен- дируют- и доводят концентрацию клеток до I lO /мл, инкубируют с эритроцитами барана в присутствии тканевого антигена в количестве 0,1 мл, содержащем 1,5% белка, при температуре в течение I ч. После чего определяют количество розеткообразуюпщх клеток. При увеличении розеткообразукщих клеток .по сравнению с контролем (без антигена) диагностируют аутоаллерги- ..ческое заболевание. S (Л