ПРОТИВООПУХОЛЕВОЕ СРЕДСТВО Советский патент 1996 года по МПК A61K9/08 A61K31/17 

Изобретение относится к медицине и касается лекарственных средств, предназначенных для лечения злокачественных опухолей.

Целью изобретения является повышение активности и снижение побочных эффектов. Цель достигается тем, что прелагаемое лекарственное средство для лечения злокачественных новообразований содержит 9-(2-хлорэтил)-7-нитрозо-L-гомоцитруллин, 9-(2-хлорэтил)-9-нитрозо-L-гомоцитруллин, декстран (м. м. 40000) или полиглюкин (м. м. 60000), или поливинилпирролидон низкомолекулярный (м. м. 12600), лимонную или сорбиновую кислоту, воду или 5% раствор глюкозы, или 0,9% раствор натрия хлорида для инъекций в следующих соотношениях, мас. 9-(2-хлорэтил)-7-нитрозо-L-гомоцитруллин 0,60-0,95, 9-(2-хлорэтил)-9-нитрозо-L-гомоцитруллин 0,5-0,40, декстран (м.м. 40000) или полиглюкин (м.м. 60000) или поливинилпирролидон (м.м. 12600) 0,5-2, лимонная или сорбиновая кислота 0,025-0,100, воды или 5%-ного раствора глюкозы, или 0,9% раствора натрия хлорида для инъекций до 100.

Лекарственное средство готовят следующим образом: ингредиенты растворяют в воде для инъекций или другом указанном растворителе при слабом встряхивании, избегая нагревания и вводят больному внутривенно.

П р и м е р 1. 9-(2-Хлорэтил)-7-нитрозо-L-гомоцитруллин 0,95
9-(2-Хлорэтил)-9-нитрозо-L-гомоцитруллин 0,05
Поливинилпирролидон (м.м. 12600) 0,5
Сорбиновая кислота 0,025
Изотонический раствор натрия хлорида До 100,0 мм
П р и м е р 2. 9-(2-Хлорэтил)-7-нитрозо-L-гомоцитруллин 0,80
9-(2-Хлорэтил-9-нитрозо-L-гомоцитруллин 0,20
Полиглюкин (м.м. 60000) 0,80
Лимонная кислота 0,04
Раствор глюкозы 5% для инъекций До 100,0 мл
П р и м е р 3. 9-(2-Хлорэтил)-7-нитрозо-L-гомоцитруллин 0,75
9-(2-Хлорэтил)-9-нитрозо-L-гомоцитруллин 0,25
Полиглюкин (м.м. 60000) 1,00
Лимонная кислота 0,05
Раствор глюкозы 5% для инъекций До 100,0 мл
П р и м е р 4. 9-(2-Хлорэтил)-7-нитрозо-L-гомоцитруллин 0,73
9-(2-Хлорэтил)-9-нитрозо-L-гомоцитруллин 0,27
Полиглюкин (м.м. 60000) 1,00
Лимонная кислота 0,05
Раствор глюкозы 5% для инъекций До 100,0 мл
П р и м е р 5. 9-(2-Хлорэтил)-7-нитрозо-L-гомоцитруллин 0,67
9-(2-Хлорэтил)-9-нитрозо-L-гомоцитруллин 0,33
Декстран (м.м. 40000) 1,00
Лимонная кислота 0,06
Вода дистиллированная для инъекций До 100,0 мл
П р и м е р 6. 9-(2-Хлорэтил)-7-нитрозо-L-гомоцитруллин 0,60
9-(2-Хлорэтил)-9-нитрозо-L-гомоцитруллин 0,40
Декстран (м.м. 40000) 2,00
Лимонная кислота 0,10
Вода дистиллированная для инъекций До 100,0 мл
Предлагаемое лекарственное средство в качестве биологически активного вещества содержит нитрозопроизводные аминокислоты (гомоцитруллина) - 9-(2-хлорэтил)-7-нитрозо-L-гомоцитруллин (изомер I) и 9-(2-хлорэтил)-9-нитрозо-L-гомоцитруллин (изомер II), которые в отличие от прототипа обладают более низкой (в 15 раз ниже) алкилирующей активностью (табл.1).

В отличие от прототипа они обладают антиметаболической активностью, конкурируя за ферментную транспортную систему с природным субстратом-лизином.

Противоопухолевая активность предлагаемого лекарственного средства различного состава представлена в табл.2. В опытах использовались мыши BDF₁, самцы и самки, с перевиваемым лейкозом L-1210. Препарат вводили однократно, в/бp через 48 ч после перевивки опухоли.

Излеченные животные наблюдались от 3 до 24 месяцев без патологии и рецидивов. Контрольные животные (без лечения) погибали через 7-8 дней.

Предлагаемый препарат показал высокую эффективность при лечении животных с опухолью легкого Льюис на мышах (однократное, в/бр введение) (табл.3).

Излеченные животные наблюдались 12-24 месяца без проявления рецидивов и патологических отклонений. Не обнаружено никаких изменений внутренних органов (в том числе легких) при вскрытии забитых животных, контрольная группа (без лечения) погибала через 28-33 дня после перевивки.

Предлагаемое лекарственное средство обладает более избирательным противоопухолевым действием по сравнению с прототипом, о чем свидетельствует вдвое больший по величине химиотерапевтический индекс (табл.4).

Это обусловлено наличием в лекарственном средстве двух изомерных форм нитрозопроизводных аминокислоты. Диапазон терапевтических доз изомера II, вызывающих 100% извлечение животных с лейкозом L-1210 37,5-47,4 мг/кг, а в предлагаемом лекарственном средстве этот диапазон расширяется в 2 раза и составляет 26-57 мг/кг (табл.5).

Обнаружено, что предлагаемое средство более избирательно, чем другие нитрозопроизводные нарушает репродуктивную функцию опухолевых клеток при кратковременном воздействии высоких концентраций, вызывая, например, полное ингибирование синтеза ДНК в клетках лейкоза L-1210 (фиг.1). (Влияние лекарственного средства (160 мг/кг) (1), изомера II (40 мг/кг) (2) и изомера I (120 мг/кг) (3) на включение 2-14С-тимидина в ДНК клеток лейкоза L-1210).

Наряду с этим наблюдается минимальное повреждающее действие препаратов на синтез ДНК в здоровых клетках костного мозга и клетках эпителия тонкого кишечника (фи.2,3). Как показали наши исследования это объясняется конкурентным транспортом изомеров через плазматическую мембрану клетки. Оба изомера переносится в клетки 2-компонентной транспортной системой, а именно лизиновым переносчиком с близкими величинами констант ингибирования транспорта лизина (3,0±0,01 мм изомер I, 1,6±0,01 мМ изомер II для высокоаффинной транспортной системы, 2,5±0,2 мМ и 2,3±0,34 мМ соответственно, для низкоаффинной транспортной системы), конкурируя между собой за места связывания с ферментом-переносчиком.

Обнаружено, что отдельные изомеры вызывают более сильные повреждения синтеза ДНК здоровых клеток, чем предлагаемое средство (см.фиг.2,3).

(Влияние лекарственного средства (160 мг/кг) (1), изомера II (40 мг/кг) (2) и изомера I (120 мг/кг) (3) на включение 2-14С-тимидина в ДНК клеток костного мозга мышей с лейкозом L-1210, фиг.2).

(Влияние лекарственного средства (160 мг/кг) (1), изомера II (40 мг/кг) (2) и изомера I (120 мг/кг) (3) на включение 2-14С-тимидина в ДНК клеток эпителия тонкого кишечника мышей с лейкозом L-1210, фиг.3).

Неожиданное сочетание защитного эффекта в отношении здоровых клеток с максимальным повреждающим действием на опухолевые клетки обеспечивает высокую противоопухолевую активность предлагаемого лекарственного средства при сравнительно низкой его токсичности и превосходство предлагаемого лекарственного средства проявляется и в том, что оно не имеет перекрестной резистентности с известными противоопухолевыми препаратами: НММ, арабинозид-цитозином (Ара-Ц), фторурацилом (5-ФУ), сарколизином, обладает только частичной перекрестной устойчивостью с прототипом и дихлордиаминоплатиной (ДДП) (табл. 6,7,8).

Как видно из таблиц предложенное лекарственное средство дает 100% извлечения животных с перевиваемыми штаммами L-1210, резистентными к широко известным противоопухолевым препаратам (сарколизину, 5-фторурацилу, арабинозид-цитозину и НММ).

Предлагаемое лекарственное средство высокоэффективно на других лейкозах: излечивает часть животных с лейкозом Р-388, в 2 раза эффективнее по сравнению с прототипом в отношении плазмоцитомы МОРС-406.

Существенные преимущества выявлены у него перед прототипом в действии на вирусные лейкозы, он в 2,5 раза эффективнее прототипа в отношении клеточного варианта лейкоза, индуцированного вирусом Мазуренко (табл.9).

После лечения предлагаемым лекарственным средством у животных нормализуется масса селезенки и печени, приближаясь к соответствующим показателям интактных животных, чего не наблюдается при лечении прототипом (фиг.4).

Предлагаемое лекарственное средство в 2-3 раза эффективнее прототипа при лечении мышей линии АКР со спонтанным вирусом лейкоза (первые генерации) УПЖ 53-143% и 19-54% соответственно).

Лекарственное средство обладает широким спектром действия в отношении солидных опухолей (табл.10,11), превосходя известные препараты по противоопухолевой эффективности. Это обусловлено потенциированием эффекта индивидуальных изомеров в отношении некоторых опухолей. Например, изомер I эффективен только в высоких дозах до 1000-1250 мг/кг. При использовании доз адекватных по содержанию в предлагаемом лекарственном средстве (150-130 мг/кг) эффекта не было достигнуто ни при одной локализации опухоли. Изомер II в дозах 40-45 мг/кг тормозил рост опухоли ОЖ-5 на 74% со снижением эффекта. Продолжительность жизни животных увеличивалась лишь на 18% в дозах 47,50-50 мг/кг он был токсичен. Предлагаемое средство в дозах 175-200 мг/кг (доза изомера II 45-50 мг/кг) проявляло стабильный противоопухолевый эффект: торможение роста опухоли 74% сохранялось в течение 3 недель после однократного применения, продолжительность жизни животных увеличивалась на 42% (табл.12).

Особенно наглядно проявляется преимущество предлагаемого лекарственного средства по отношению к известными в отношении развившихся опухолей (табл. 13,14).

Одновременно в эксперименте показано, что эффективность лечения развившихся опухолей можно повышать повторными введениями лекарственного средства (см.табл.14). Это имеет немаловажное значение для лечения больных с запущенными формами опухолей.

Повторное введение лекарственного средства возможно, так как обнаружено, что оно не обладает кумулятивными свойствами. Индекс кумуляции на мышах был вычислен по формуле:

МПД при однократном применении 240 мг/кг, при 15 кратном ежедневном применении разовая доза 30 мг/кг

Отрицательная величина индекса кумуляции свидетельствует об отсутствии кумуляции токсического действия (Давыдов В.Д. Вопросы медицинской токсикологии в курсе фармации. Горький, 1982).

Клиническая картина интоксикации при многократном применении лекарственного средства аналогична токсическим проявлениям при однократном введении. Наблюдается снижение массы тела подопытных животных в течение трех недель после окончания курса введений, выявлено гематотоксическое действие, проявляющееся в снижении количества лейкоцитов в основном за счет уменьшения содержания лимфоцитов. Степень гематотоксичности прямо коррелирует с величиной применяемой дозы и носит обратимый характер.

Не отмечено влияние препарата на функцию сердечно-сосудистой системы и мочевыделительной системы, печени и активность трансаминаз.

Эффективность лекарственного средства была проведена в эксперименте на собаках со спонтанными опухолями, которые поступают в клинику животных ВОНЦ АМН СССР от жителей г.Москвы и Московской области. После отработки доз и режимов, лечению подвергалось 6 собак: 4 с диагнозом лимфобластная саркома III-IV стадии заболевания, 1 злокачественный мастоцитоз, 1 меланома. Эффект достигнут у всех животных с лимфобластной лимфосаркомой отмечалось уменьшение размеров лимфоузлов, снижение количества бластных клеток в периферической крови и костном мозге. Полная ремиссия в течение месяца получена у одного животного, у трех частичная различной длительности (в среднем 14 дней). Собака с инфильтрацией бластными клетками костного мозга и периферической крови (27 и 12 соответственно), после лечения предлагаемым лекарственным средством находится в частичной ремиссии без рецидивов около 15 месяцев, наблюдение продолжается.

Представляет интерес лечение злокачественного мастоцитоза так как по данным литературы и собственным исследованиям известно, что это заболевание крайне устойчиво ко всем видам существующего лечения. Животное с рецидивом мастоцитоза после хирургического вмешательства в течение 2 месяцев лечили по схеме АЦОП, амбулаторно, лечение было не эффективно. Через месяц после окончания полихимиотерапии животному ввели однократно предлагаемое лекарственное средство. Через 5 дней после введения было отмечено уменьшение опухолевого узла на 63% и уменьшение региональных лимфоузлов. Длительность ремиссии составила 32 дня, затем рост опухоли возобновился.

Лечение собак с меланомой не имело эффекта.

Таким образом, показана эффективность предлагаемого лекарственного средства в монорежиме по сравнению с известными высокоэффективными препаратами (циклофосфан, локадин, ликурим и др.).

Предлагаемое лекарственное средство для лечения злокачественных новообразований является новым, оригинальным по составу, высокоэффективным в отношении широкого спектра злокачественных опухолей, малотоксичным по сравнению с существующими, обладает избирательностью противоопухолевого действия, эффективно при лечении запущенных форм рака, не обладает кумуляцией и может применяться в повторных курсах лечения без выраженных побочных явлений. ЫЫЫ4

Область применения: изобретение относится к медицине, а именно онкологии. Цель: повышение активности средства и снижение побочных эффектов. Сущность изобретения: состав содержит (в мас.%): 9-(2-хлорэтил)-7-нитрозо-L-гомоцитруллин) 0,6-0,95; 9-(2-хлорэтил)-9-нитрозо-L-гомоцитруллин) 0,05-0,4; декстран (м. м. 40000) или полиглюкин (м.м. 60000) или поливинилпирролидон (м. м. 12600) 0,5-2,0; лимонную кислоту или сорбиновую кислоту 0,025-0,1; воду для инъекций или 5%-ный раствор глюкозы или изотонический раствор натрия хлорида до 100. 14 табл., 4 ил.

Противоопухолевое средство, содержащее нитрозопроизводное мочевины и воды для инъекций или 5%-ный раствор глюкозы или изотонический раствор натрия хлорида, отличающееся тем, что, с целью повышения его активности и снижения побочных эффектов, оно дополнительно содержит декстран или полиглюкин, или поливинилпирролидон, лимонную или сорбиновую кислоту, а в качестве нитрозопроизводного 9-(2-хлорэтил)-7-нитрозо-L-гомоцитруллин 9-(2-хлорэтил)-9-нитрозо-L-гомоцитруллин при следующем соотношении компонентов, мас. 9-(2-хлорэтил)-7-нитрозо-L-гомоцитруллин 0,6 0,95; 9-(2-хлорэтил)-9-нитрозо-L-гомоцитруллин 0,05 0,9 декстран (м.м. 40000) или полиглюкин (м.м. 60000) или поливинилпирролидон (м. м. 12600) 0,5 2,0; лимонная кислота или сорбиновая кислота 0,025 0,1; вода для инъекций или 5%-ный раствор глюкозы или изотонический раствор натрия хлорида до 100.