ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ ШТАММА BACILLUS SUBTILIS N 534 Советский патент 1996 года по МПК C12N1/20 C12N1/20 C12R1/125 

Изобретение относится к области микробиологии, а именно, питательным средам для выращивания микроорганизмов с целью получения бактерийных препаратов.

Цель изобретения повышение ростовых свойств среды и повышение антагонистической активности выращенной культуры.

Среду готовят следующим образом.

П р и м е р 1. Для приготовления 10 л питательной среды берут, в г:
Калий фосфорнокислый однозамещенный 30
Сульфат аммония 20
Цитрат натрия 30
Цитрат аммония 40
Глутаминовая кислота 30
Молочная кислота 100
Диализат дрожжей 750
Сернокислое железо 0,01
Сернокислый магний 0,5
Лактат кальция 0,1
Глюкоза 40
Картофельно-глицериновый бульон 2500
Вода дистиллированная Остальное
Среду готовят следующим образом: очищенный и нарезанный мелкими ломтиками картофель 1,0 кг промывают дистиллированной водой, заливают 2,0 литрами 4% раствора х.ч. глицерина и варят на медленном огне при постоянном помешивании, до полного разваривания картофеля. Жидкость сцеживают и фильтруют через марлю. К фильтрату прибавляют дистиллированную воду до первоначального объема. К 2,5 л картофельно-глицеринового бульона добавляют 7,5 л дистиллированной воды с растворенными солями. Варят в автоклаве 30 мин при 110^oC и добавляют 50 мл стерильного 40% раствора глюкозы. Выращивание производственного штамма проводят в ферментере при температуре 37^oC в течение 36 часов.

Количество бактериальных клеток и продолжительность процесса ферментации на данной среде с оптимальным содержанием компонентов и среде-прототипе, используемой при выращивании бактериального штамма методом глубинного культивирования в ферментере, представлены в табл.1. Рост культуры B.subtgilis N 534 на известной среде (среда-прототип), на полноценной питательной среде-бульоне Мартена (среда-аналог) и предлагаемой среде с оптимальным содержанием компонентов.

Антагонистическую активность культуры B.subtgilis N 534 в отношении тест-штаммов патогенных бактерий и грибов проверяют следующим образом. Готовят взвесь бактерий исследуемой культуры B.subtilis в концентрации 1^o10⁹ кл/мл в 0,9% растворе натрия хлорида. Полученную взвесь высевают на подсушенную агаризованную среду Гаузе N 2 штрихом по диаметру чашки Петри. После 72 ± 4 ч инкубации при 37^oC перпендикулярно к выросшей культуре подсевают штрихом посевной материал тест-микробов (500-миллионные суспензии микробов в 0,9% растворе натрия хлорида после роста микроорганизмов на мясо-пептонном агаре в течение 18 ± 4 ч. Через 18 ± 4 ч инкубирования с тест-штаммами при 37^oC учитывают зоны задержки роста тест-штаммов в мм. Контролем роста тест-культур служит их параллельный посев на чашки с той же средой без исследуемой культуры.

Данные по изучению антагонистической активности культуры B.subtilis N 534, выращенной на среде прототипе, на среде-аналоге и предлагаемой питательной среде, представлены в табл.2.

П р и м е р 2. Для приготовления 10 л среды, берут, г:
Калий фосфорнокислый однозамещенный 20
Сульфат аммония 10
Цитрат натрия 20
Цитрат аммония 30
Глутаминовая кислота 20
Молочная кислота 50
Диализат дрожжей 500
Сернокислое железо 0,005
Сернокислый магний 0,25
Лактат кальция 0,05
Глюкоза 30
Картофельно-глицериновый бульон 2000
Вода дистиллированная Остальное
Содержание глюкозы 0,3% картофельно-глицеринового бульона 20% в среде.

П р и м е р 3. Для приготовления 10 л среды берут, г:
Калий фосфорнокислый однозамещенный 40
Сульфат аммония 30
Цитрат натрия 40
Цитрат аммония 50
Глутаминовая кислота 40
Молочная кислота 150
Диализат дрожжей 900
Сернокислое железо 0,015
Сернокислый магний 0,75
Лактат кальция 0,15
Глюкоза 50
Картофельно-глицериновый бульон 3000
Вода дистиллированная Остальное
Содержание глюкозы 0,5% картофельно-глицеринового бульона 30% в среде.

Рост культуры B.subtilis на средах по примерам 1-3 приведен в табл.3.

Антагонистическая активность культуры B.subtilis, выращенной на средах по примерам 1-3 представлена в табл.4.

Как видно из табл. 3, 4 наилучшие показатели роста культуры и ее антагонистическая активность получены при выращивании с использованием питательной среды по примеру 1.

Использование глюкозы и картофельно-глицеринового бульона в количествах, меньших заявленных в формуле изобретения, приводит к снижению ростовых характеристик культуры и снижению антагонистической активности (пример 4).

П р и м е р 4. Для приготовления 10 л среды берут, г:
Глюкоза 20
Картофельно-глицериновый бульон 1500
Остальные компоненты взяты в количествах, указанных в примере 1.

Данные по изучению культуры B.subtilis представлены в табл.5.

Использование глюкозы и картофельно-глицеринового бульона в количествах, больших заявленных в формуле изобретения, не приводит к дальнейшему повышению количества биомассы и ее антагонистической активности (пример 5), но затрудняет проведение культивирования из-за возросшего пенообразования.

П р и м е р 5. Для приготовления 10 л среды берут, г:
Глюкоза 60
Картофельно-глицериновый бульон 3500,0
Остальные компоненты взяты в количествах, указанных в примере 1.

Данные по изучению культуры B.subtilis представлены в табл.6.

Таким образом, использование предлагаемой среды позволяет сократить длительность процесса культивирования в среднем на 8 часов, повысить количество бактериальных клеток в среднем в 2,6 раза и улучшить качество бактериальных препаратов из B.subtilis за счет повышения количественных и качественных препаратов из B. subtilis за счет повышения количественных и качественных характеристик антибиотической активности микробов. ТТТ1 ТТТ2

Использование: микробиологическая промышленность, производство бактерийных препаратов из Bacillus Subtillis. Сущность изобретения: питательная среда содержит (в %): калий фосфорно-кислый однозамещенный 0,2-0,4, сульфат аммония - 0,1-0,3, цитрат натрия - 0,2-0,4, цитрат аммония - ,03%% 0,5, глутаминовая кислота - 0,2-0,4, молочная кислота - 0,5-1,5, диализат дрожжей - 5,0-9,0, сернокислое железо - 0,00005-0,00015, сернокислый магний - 0,0025-0,0075, лактат кальция - 0,0005-0,0015, глюкоза - 0,3-0,5, картофельно-глицериновый бульон - 20-30, вода - остальное. Использование питательной среды позволяет сократить процесс культивирования шт. Bac.Subtillis N 534 в среднем на 7 ч, увеличить максимальное содержание бактериальных клеток в среднем в 2,6 раза и повысить антагонистическую активность бактериальных клеток за счет расширения и усиления их антибиотических свойств. 6 табл.

Питательная среда для выращивания штамма Bacillus Subtills N 534, содержащая питательную основу, минеральную соль и дистиллированную воду, отличающаяся тем, что, с целью повышения ростовых свойств среды и повышения антагонистической активности выращенной культуры, она содержит в качестве питательной основы картофельно-глицериновый бульон, из минеральных содей - фосфорнокислый одноозамещенный калий, сульфат аммония, сернокислое железо, сернокислый магний и дополнительно цитрат натрия, цитрат аммония, глутаминовую кислоту, молочную кислоту, лактат кальция, глюкозу и диализат дрожжей при следующем соотношении компонентов, мас.

Картофельно-глицериновый бульон 20 30
Сульфат аммония 0,1 0,3
Цитрат натрия 0,2 0,4
Фосфорнокислый однозамещенный калий 0,2 0,4
Цитрат аммония 0,3 0,5
Сернокислое железо 0,00005 0,00015
Сернокислый магний 0,0025 0,0075
Глутаминовая кислота 0,2 0,4
Молочная кислота 0,5 1,5
Лактат кальция 0,0005 0,0015
Глюкоза 0,3 0,5
Диализат дрожжей 5 9
Дистиллированная вода Остальное