СПОСОБ ВЫВЕДЕНИЯ ФАГОУСТОЙЧИВЫХ МУТАНТОВ АКТИНОМИЦЕТОВ Советский патент 1967 года по МПК C12N1/14 C12N15/01 

il;

известные способы выведения фагоуСтойчйвых штаммов ахтиномицетов ирод у центов a:-iтибиотиков, предусматривающие отбар колоний из (рассева фаголизата, iKaiK правило, приводят к получению штаммов с пониженной антибиотической активностью и устойчивых только к тому фагу, из фаголизата которого был отобран устойчивый штамм.

Сущность предлагаемого апособа заключается в том, что опоры актии-юмицета обрабатывают мутагенными факторами и рассеивают на поверхности агаризованной среды в чаш1ки Петри № 1. После образования колоний с них делают два последовательных отпечатка на чашку № 2 с агаризованной средой и |на такую же чашку № 3 с добавлением акти1нофага. С чашки № 2 отбирают копии колоний, выросших на чашке № 3, и отбирают среди лих фагоустойчивые мутанты.

Для получения фагоустойчивых мутантов актищомицетов по предлагаемому способу суспензию спор акти«омичета обрабатывают оптимальной дозой этиленамина и ультрафиолетовыми лучами, быстрыми нейтронами ИЛИ другими мутагенами и рассевают на поверхность агаризованной среды в чашки з концентрации, обеспечиваюш,ей рост 500- 600 колоний. Через 7-8 дней в зависимости от темпов роста колоний штамма актиномицета с каждой чашки № 1 ш,еткой, имеюш.ей

300-400 иголок, делают два последовательных отпечатка на чашки № 2 и 3. Чашки № 2 содержат обычную агагризованную сре ду, а чашки № 3 эту же среду с добавлением

акти.нофага. После 7-8-дневной инкубации в чашках № 2 вырастают все отпечатавшиеся колонии, а на чашках № 3 - лишь фагоустойчивые. Для выделения среди этих фагоустойчивых колоний мутантов их копии, найденные

на чашке N° 2, -проверяют на фагоустойчивость. Те колонии, которые окажутся фагоУСТОЙЧИ1ВЫМИ несмотря на отсутствие контакта

с фагом, должны быть пр1изнаны мутантами.

Экспериментальные данные свидетельствуют о то;м, что частота мутаций штамма Actinomyces erythrens по фагоустойчивости под действием мутагенных факторов рав1на примерно 1 на 100000 колоний. Таким образом с 250 чашек Петри можно получить одну

фагоустойчивую мутацию. Из семи полученных таким образом фагоустойчивых мутантов у штамма Actincmyces erythrens ИАЭ-1э три варианта не только сохранили свою активность, но и превысили активность исходного

штамма.

Предмет изобретения 3 тывают мутагенными факторами, рассевают на поверхности агаризованной среды в чашки Петри № 1, после образования колоний с них делают два посладовательных отпечатка На |Чаш:ку Петри № 2 с агаризованной5 4 , средой и на чаш,ку Петри № 3 с агаризованной средой, ,в которую добавлен актинофаг, с чашки № 2 отбирают копии колоний, выросших на № 3, среди «их отби1рают фагоустойчивые мутанты.