СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ РИБОМОНОНУК-ПЕОТИДОВ Советский патент 1969 года по МПК C07H1/06 

Изобретение относится к облает выделения рибомоноиуклеотидов нутем хроматографического разделеиия на понообменнике.

Известные сиособы хроматографического разделения рибомононуклеотидов различаются выбором элюирующих систем. Манрнмер, известно стуненчатое разделение щелочного или ферментативного гидролизата РНК, сорбированного на анионообмеииике, элюиией соляной кислотой.

Для одиовремеииого разделения рибомоно 1уклеотидов, обесиечення высокой чистоты и иовышения выхода иелевого иродукта предложено нримеиять в качестве злюируюицй системы уксусиую кислоту.

Ферментативный или щелочиой гидролизат РНК наносят на аииоиообмеиинк в анетатной форме. Хроматографическое разделение рпбо1моионуклеотидов ироизводят путем последовательного пропускаипя уксусной кислоты нарастаюш,еи

концентранни со скоростью 30 мл/ч и а см- поперечного сечения колопки.

1. 5 л щелочного гидролизата

Н р и м е р 8,5), содержаидего 10-15 г г 1дРНК (рН 7ролизоваиной РМК ири иониой силе раствора не выше 0,05 наносят на колонку (1:10) е анионитом (200-400 меш) в аиетат1 ой форме со скоростью 110 мл/час на 1 слг- иоперечиого сечения колонки. Оптимальная нагрузка па

1000 М.1 в.тажного анноннта 25-35 г гидроли30BaiJiioii РНК.

Элюцню (2)3-рибомо1 онуклеотидов проводят ступенчато уксусной кислотой следуюИ1,их KoiineHTpauiiii со скоростью 30 M.i4ac на 1 см- поперечного сечения колонки.

Iступень. Элюиию цитидин-(2)3-монофосфорной кислоты ироводят 1 н. CH:jCOOH.

IIступень. Элюиию адеиозин-2-н аденозниЗ-монофосфорных кислот ироводят 1.25 н.

.

1И стунень. Элюпню гуаиозин-(2)3-моно(1)ос(|)орно1 | КИСЛОТ) нров(хчя1 5Д) и. СНцСООН.

IV . 3. у |1И Д ИН - (2) 3-.1ОИО(1)ОС(|)ОрНОЙ кислоты 1рОВОДЯТ 0,0 и. С 11;;СО011.

Эл оируется 95 ) количества 1уклеотидов, сорб1 рованнь х на ко.чонку. Отдельиь е фракции досуха в вакууме npi темиературе 30-40 С. Cyxoi остаток растворя от в воде и ) досуха. Такую обработку повторя от 3-4 раза. Сухой остаток растворя от в ..1ьном количестве вод. иейтрализу от 0,2 . NaOII или КОИ до рН 7-7,2. ,Тиофил 13ируют иолучеину о натриевую или калиевую соль соотсетствую щего oнo yклeoтидa. Содержание осиов 101о веи1,ества в готовом продукте 95-100/о.

аналогичных примеру 1. Элюцию 5-рнбомононуклеотидов проводят ступенчато уксусной кислотой следующих концентраций.

Iс т у н е и ь. Цитндин-5-монофосфорную кислоту элюирует 0,8 н. СНзСООН.

IIступень. Аденозин-5-монофосфорную кислоту элюирует 1,5 н. СН.зСООП.

IIIступень. Гуанознн-5-монофосфорную кислоту элюирует 4,4 п. СНзСООН.

IVступень. Уриднн-5-монофосфорную кислоту элюнрует 5- н. СНзСООН.

Отдельные фракции упаривают и переводят в натриевые и другие соли (как в примере).

Содержание основного вещества в готовом продукте 95-1000/0.

Нредмет изобретения

Способ выделения рибомононуклеотндов цутем ступенчатого хроматографического разделения щелочного или ферментативного гидролизата РНК на анноинте в элюирующей системе, отличающийся тем, что, с целью одновременного разделения рнбомононуклеотидов, обеспечения высокой чистоты и новышения выхода целевого продукта, в качестве элюирующей системы используют уксусиую кислоту.