СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФЕРМЕНТНОГО ПРЕПАРАТА КИСЛОЙ ПРОТЕАЗЫ Советский патент 1969 года по МПК C12N9/58 

Известен способ получения ферментного препарата, кислой лротеазы путем культивирования ее продуцента - плесневого гриба As;p. awamori - яа питательной -среде, содержащей пшеничные отруби, с получением экстракта фермента из поверхностной культуры гриба, 01саждением фермента этаиолом из экстракта, отделением осадка от питательной среды одним из известных способов, иапример центрифугированием, растворением осадка с получением раствора фермеитов и высаливанием из него кислой протеазы сульфатом аммония.

Предлагаемый способ позволяет получать высокоочищенный препарат, не содержащий примеси других фермеитов, а также повысить его активность. Для этого перед высаливанием из ферментного раствора удаляют амилолитические ферменты путем обработки данного раствора щавелевокислым аммонием, а после высаливания кислой протеазы получают осадок этого ферментного раствора в воде и обессаливают одн-им из известных способов, например с помощью ионообменных смол.

Способ получения ферментного препарата кислой протеазы заключается в следующем.

держащей пщеничные отруби. Из выращенной культуры водой экстрагируют ферменты методом противоточного выщелачивания.

Полученный экстракт охлаждают до 5°С и вносят охлажденный этанол до концентрации его в смеси, равной 75-76%, для осаждения ферментов и центрируют для отделения образовавшегося осадка. Последний растворяют в воде в соотношении 1 : 15 и вновь

центрифугируют для удаления из него нерастворимых балластных веществ.

Доводят рН центрифугата до 4,5 и обрабатывают 0,1 и. щавелевокислым аммонием при 30°С в течение 24 час. В результате такой

обработки происходит почти полная инактивация амилолитических ферментов (а-амилазы, декстриназы).

Затем добавляют сульфат аммония до 0,6 насыщения от полного для высаливания кислой протеазы. Полученный осадок выдерживают И -12 час, отделяют и растворяют в воде, обессаливают на колонке с сефадексом G-25 и хроматографируют на колонке с ДЕАЕ-целлюлозой (ацетатный буфер с рН

5,6 и ионной силой 0,05, элюция при возрастающей концентрации NaCl от 0,1 до 0,5 н. в том же буфере).

НИИ 1 : 3,5. Активность кислой протеазы в высокоочнщенном препарате составляет 1035 ед/г. Ферментный препарат кислой протеазы содержит 71,5% белка и оптимум его действия при рН, равном 2,0-2,5 и температуре .

Предмет изобретения

Способ получения ферментного препарата кислой протеазы путем культивирования ее продуцента - плесневого гриба Asp. awamori - на пятателыной среде, содержащей пшеничные отруби, с получением экстракта фермента из (поверхностной культуры гриба, осаждением фермента этанолом из экстракта.

отделением осадка от питательной среды одним из известных (Способов, например центрифугированием, растворением осадка с получением раствора ферментов и высаливанием из него кислой протеазы сульфатом аммония, отличающийся тем, что, с целью получения высокоочищенного препарата, не содержащего примеси других ферментов, а также повыщения его активности, леред высаливанием

из ферА1ентного раствора удаляют амилол-итические ферменты путем обработки данного раствора щавелевокислым аммонием, а после высаливания Кислой протеазы, получают осадок этого фермент1ного раствора в воде и

обессаливают одним из известных способов, например с помощью ионообменных смол.