Способ получения препарата для улучшения качества пшеничного хлеба Советский патент 1959 года по МПК C12N9/30 A21D8/04 

Известные способы получения препаратов для улучшения качества пшеничного хлеба не обеспечивают повышенной активности препарата в процессе брожения теста.

В описываемом способе, с целью повышения активности препарата, в качестве исходного сырья применяют культуру гриба Aspergillus oryzae, которую выращивают на водной питательной среде, содержаш,ей крахмала 6%, солодовых ростков или муки 1%, азотнокислого натрия 0,91%, сернокислого магния 0,05%, сернокислого железа 0,001%, хлористого калия 0,05% и фосфорнокислого калия 0,1% с последующим отделением из среды осадка ферментов, его высушиванием и измельчением.

Существующие способы выделения концентрированных препаратов амилазы из поверхностных культур плесневых грибов сводятся к; экстракции ферментов из культуры гриба, очистке полученных растворов от посторонних примесей, сопутствующих ферментам, « фракционированному разделению амилазы и протеазы спиртом, так как наличие протеазы в препарате амиДолитических ферментов приводит к ухудшению качества хлеба (частичный гидролиз клейковины). В этой технологической схеме особенно затруднительна очистка ферментных растворов от сопутствующих примесей (золы, сахара, аминокислоты), так как это требует длительного (24 часа) истощающего диализа через полупроницаемую мембрану и обычно сопровождается заметной потерей активногти ферментов. Незначительны при этом и выходы ал илазы, которые не превышают 0,40-0,35% по весу сухой культуры гриба на пшеничных отрубях.

124903

Описываемый .способ получения высокоактивных препаратов амилолитических ферментов из глубинной культуры гриба Aspergillus oryzae заключается в следующем.

1 Кул:Л 1-ра |риба выращивается глубинным методом :ia полусинтет;:ческой среде с 6% крахмала и минеральными солямл, взятыми в таких ко.-щентрацнял и соотношениях, которые обеспечивают нормальное разв1п-,. мицелия и обильное образование ферментов, но не допускают избитка н использованных грибом веществ в культуральной жидкости, так i.iK последнее затрудняет последующее выделение очищенного препарата амилазы.

2.В качестве источника азота используется азотнокислый натр)..1 или калий, что обеспечивает не только нормальный рост и образование амилазы, но и (при добавлении определенных биостимуляторов) усиленный переход фермента из клеток мицелия в окружающую среду. Спещ1фиче ская роль нитрата натрия подтверждается тем, что если вместо него прибавить сернокислый аммоний, который также хорощо обеспечивает рост гриба и повыщенный синтез фермента, то выделяемый препарат амилазы будет иметь активность 100-200 ед1г сухого вещества. При использовании же нитрата натрия в культуральную жидкость не лереходят инертные белки, а выделяется главным образом фермент, что и позволяет получать препараты со средней активностью 2000-2400 edje, а на среде с чистым крахмалом -до 3000 ед1г и выще.

3.В качестве биостимулятора, повышающего синтез фермента в 4-5 раз, применяются солодовые ростки - отход пивоваренного производства. Авторами установлено, что стимулирующим образование амилазы фактором является смесь аминокислот, которая изолирована и идентифицирована хроматографией на бумаге.

4.Для практического использования предлагаемого метода производства препарата ачмилазы целесообразно заменить крахмал кукурузной, ржаной или другой какой-либо мукой в количестве 6%, что не уменьщит активность амилазы в глубинной культуре и в выделенном препарате. При использовании кукурузной муки взамен крахмала отпадает необходимость в прибавлении биостимулятора (солодовые ростки), так как мука содержит точно такую же смесь аминокислот, являющуюся индуктором при биосинтезе амилазы.

Авторами выделена фракция моноаминокислот из солодовых ростков и из кукурузной муки и установлено (С помощью хроматографии на бумаге), что качественный состав аминокислот из обоих источников соверщенно одинаков и представляет собою смесь 8-10 аминокислот.

При этом солевой состав питательной среды при введении муки вместо крахмала не изменяется.

5.Принципиальной составной частью минерального состава питательной среды является сернокислый магний или сернокислая соль какого-либо другого металла. Сернокислые соли могут быть заменены другими минеральными или органическими соединениями серы (сульфиты, гипосульфит и др-)- В отсутствии сульфата амилазы не образуется, не1смотря на нормальный рост гриба.

6.Состав водной питательной среды следующий: 6% крахмала и 1 % солодовых ростков или кукурузной, ржаной и других видов муки, 0,91% азотнокислого натрия, 0,05% сернокислого магния, 0,001% сернок 1:,;;огс железа, 0,05% хлористого калия и 0,1% фосфорнокислого калия.

Описываемая среда может быть упрощена и сведена к 4% кукурузной муки (все необходимые соли). При таком составе среды ее стоимость значительно уменьщается, а количество препарата понижается только на 20-25%.