ХНИЧШ-АЯ ЕИБЛЙС-ТЕК'л Советский патент 1969 года по МПК C07K14/695 

Предлагают способ получения О-серил1-лизил1 18-р1 18-кортикстропина или В-серил1глутаминилз-л.изил1 18-|31 18 - кортикотропина или их амидов, заключающийся в том, что защищенный декапептид D-серил-тирозил-серилметионил-глутамил (или глутаминил) - гистидил - фенилалаНИл - аргинил - триптофил - глицин конденсируют известным способом, например методо.м активированных эфиров, с эфиром или амидом октапептида .тизил-пропилвалил-глицил-лизил-лизил-лизил-лизина, боковые группы которого защищены, с последующи.м отщеплением защитных групп известным способом.

Полученный таким способом амид октадекапептида О-серил1-лизил118 - р1 1«-кортикотропин или О-серил1-лизил1 18-р1 18-кортикотропин, впервые описанный в литературе, обладает большой адренокортикотропной активностью и отличается от других пептидов, обладающих адренокортикотропным действием тем, что в качестве первой аминокислоты на аминоконце он содержит D-аминокислоту.

Применяют следующие сокращения:

Лиз - лизил

Про - пролил

Тир - тирозил

Мет - метионил

Гис - гистидил

Фен - фенил ал анил

Apr - аргинил

Три - триптофил

- карбобензокси

БОК - грег-бутилоксикарбонил ТБ - .бутил

Системы тонкослойной хроматографии обозначаются следующим образом:

Система 43А: 7/;ег-амиловый спирт - изопропанол - вода (100:40:10).

Система 43С: грет-а.миловый спирт - изопропанол - вода (100:40:55).

Система 52: н-бутанол - ледяная уксусная кислота - вода (ШО : 10 : 30).

Система 52А: н-бутанол - ледяная уксусная кислота - вода (67:10:23).

Система 100: этилацетат - пиридин - ледяная уксусная кислота - вода (62:21 :6: 11).

Система 101: н-бутанол - пиридин - ледяная уксусная кислота - вода (30:20:6:24).

Пример 1. КБЗ-Лиз(БОК) - Лиз (БОК)NHs.

5 г КБЗ-Лиз(БОК)-Лиз(БОК) - ОСНз растворяют в 100 мл абсолютного метанола, при комнатной температуре насыщают аммиаком и отстаивают в течение 30 час в закрытой колбе. Затем раствор концентрируют до 25 мл и в течение ночи отстаивают для кристаллизации в леднике. Отфильтровывают, промывают охлаладенным метанолом и высушивают кри-, сталлы в вакууме. Получают 3,95 г КБЗ-Лиз (БОК)-Лиз(БОК)-ЫН2 с т. нл. 165°С. При. тонкослойной хроматографии на силикателе соединение имеет следуюш,ие значения Rf Rf (хлороформ : метанол 95 : 5) 0,11 Rf (хлороформ : метанол 8 : 2) 0,7510 Rf (43А)0,76 При.мененный в качестве исходного материала КБЗ-Лиз (БОК)-Лиз (БОК)-ОСПз с т. пл. 78-84°С можно получить из КБЗЛиз (БОК)-ОН и Н-Лиз (БОК)-ОСНз (бельгий- 15 ский патент № 594338) путем конденсации с , помощью дициклогексилкарбодиимида. Пример 2. П-Лиз(БОК)-Лиз(БОК)-МН2. Зг КБЗ-Лиз (БОК)-Лиз (БОК)-NH2 при легком нагреве растворяют в 100 мл -метанола и при 20 комнатной температуре гидрируют с 500 мг палладированного угля при встряхивании с абсорбцией образующейся двуокиси углерода. Поглощение водорода заканчивается после 1 час и в течение последующего 1 час от- 25 фильтровывают катализатор. Фильтрат высушивают. Сырой материал перекристаллизовывают из смеси сложного уксусного эфира и петролейного эфира. Продукт имеет т. пл. 110-112°С. Па силикателе получают следую- 30 щие значения Rr: Rf (хлороформ : метанол 8 : 2) 0,32 Rf (43А)0,35 Rf (52)0,65 Пример 3. КБЗ-Лиз (БОК) - Про-Вал- 35 Глу-Лиз(БОК) - Лиз(БОК) - Лиз(БОК) -Лиз (БОК)-МП2. 5,13 г КБЗ-Лиз (БОК)-Про-Вал-Глу-Лиз (БOK)-Лиз(БOK)-NП2 (заявка Д 220Э/63 дело 5247/5123) растворяют в 60 мл абсолютного 40 диметнлформамида и охлаждают до -25°С. При этой температуре при перемешивании по каплям добавляют 8,8 мл 2,116 п. соляной кислоты и затем еще 0,973 мл 5 н. раствора нитрата натрия. Реакционную смесь перемешивают 45 при -10°С в течение 15 мин, лосле чего добавляют Предварительно охлал денный до - 10°С раствор 2,0 г н-Лиз(БОК)-Лиз(БОК)НП2 в 10 мл диметилформамида и затем по каплям добавляют 2,6 мл триэтила.мина. Пе- 50 ремешивают -при 0°С в течение 30 минti затем отстаивают при 0°С в течение 20 час. Для выделения сырого -продукта концентрируют до 30 мл, осаждают добавлением 150 мл воды н отфильтровывают хлопьевидно-студенисты 55 осадок. После двукратной перекристаллизации из смеси метанол - вода (2:1) получают защищенный октапептид в мелкокристаллической форме я хроматографически чистом виде с т. пл. 220-221 °С (разложение).60 Он имеет на силикагеле следуюпще значения Rf: Приимер 4. н-Лиз(БОК)-Про-Вал-Глуиз(БОК)-Лиз(БОК)-Лиз(БОК)-Л.из(БОК) NH2. 1,0 г вышеописанного карбобензоксисоед нения растворяют в 250 мл метанола и гидрируют при встряхивании с 200 мг палладированного угля (Юс/о Pd) при комнатной температуре и при абсорбции двуокиси углерода. После отстаивания в течение 6 час отфильтровывают катализатор, фильтрат высушивают и остаток дважды нереосаждают из смеси .метанола и воды. Получают 738 мг хроматографически однородного производного октапептида, которое на силикагеле имеет следующие значения Rf: Rf (хлороформ : метанол 9:1) 0,14 Rf (52)0,63 Rf (43А)0,28 Пример 5. БОК-D - Сер-Тир-Сер-МетГлу(ТБ) - Гис-Фен-Арг-Три-Глу-Лиз(БОК) Про-Вал - Глу - Лиз(БОК)-Лиз(БОК) - Лиз(БОК) - Лиз(БОК)-НН2. мг БОК-О-Сер-Тир-Сер-Мет-Глу(ТБ)Гис - Фен - Арг-Три-Глу-ОП и 736 мг Н-Лиз (БОК)-При-Вал-Глу-Лиз(БОК) - Лиз(БОК) Лиз (БОК) - Лиз(БОК) суспендируют в 20 мл пиридина и после добавки 0,3 мл воды и 0,835 л 1 н. соляной кислоты пере.мешивают при 50°С в течение 15 мин. После добавки 378 мг дициклогексилкарбодиимида перемешивают при 50°С в течение 3 час, добавляют еще столько же дициклогексилкарбодиимида, перемешивают при 50°С еще в течение 3 час и концентрируют до образования полутвердого остатка. При нагревании с 20 мл диметилформамида пептиды растворяются н их отделяют фильтрованием от нерастворимой дициклогексилмочевнны. Фильтрат концентрируют до образования густотекучего остатка, из которого путем добавления 50 мг воды выделяют маслянистый сырой продукт, который отделяют от маточного щелока и высушивают. Путем двукратного переосаждения из сложного диметилформамидметанолуксусного эфира получают 1,29 г сырого продукта, который подвергают окончательной очистке по методу Крейга в системе растворителя метанол - буфер - хлорофор.м - четыреххлористый углерод (10:3:7:4). Буфер: 28,5 мл ледяной уксусной кислоты, 19,25 г ацетата аммония в 960 мл воды (с фазовы.ми объемами по 10 мл): Сначала вещество распределяется равномерно с наполнением первых 5 элементов. После 171 стадии из элементов Л 50-74 ( 62, й 0:57) -путем концентрации досуха и сублимации ацетата аммония при 40°С под высоким вакуулюм выделяют однородный по тонкослойной хроматографии защищенный октадекапентидамид в виде чистого аморфного порошка с темнературой цлавления 210-225°С (разложение). Rf(хлороформ : метанол75 : 25) 0,51 Rf(43С)0.62 Rf(52)0,55 Rf(100)0.43. Предмет изобретения Способ получения В-сер.ил1-лизил17-18-р.1-18 ртикотропина или О-серил -глутаминил изил 18-р.1-18-кортикотропина или их амиов, отличающийся тем, что защищенный декапептид D-серил-тирозил-серил - метионилглутамил (или глутаминил) - гистидил-фенилаланил-аргинил - триптофил - глицин конденсируют известны.м способом, например методом активированных эфиров, с эфнром или амидом октапептида лизил-пролил-валил - глицил - лизил - лизил - лизил - лизина, боковые группы которого защищены, с последующим отщеплением защитных групп известным способом.