Способ получения пептидов или их солей или амидов или сложных бензиловых эфиров Советский патент 1979 года по МПК C07K7/08 C07K14/695 A61K38/10 

собы, например азидный, метод активированных ЭФ1ФОВ, Функциональные группы, не принимающие участия в реакции, целесообразно защищать группами, которые могут быть от щепленл с помощью известных приемов, например ацидолиза,гидролиза, гидрогенолиза или в результате врсстановления.. Карбоксильные группы, например, могут быть защищены главным образом в ре зультате этерификации метиловым третбутиловым, бензиловым, п-хлорбензиловым, П - итробензШовым спиртами или в результате образования амида. Для защиты амшоокси- и амштргрупп могут быть использованы различные защиты: трет-буТ Шрксикарбонилыгая, тозильная и т.п. Гуанвдиновая группа аргинина может быть . защищена нитрогруппой. Для защиты ими-, ногруппы гистидина используют бензильнуга, тритильную 1ети динитрофенильну-ю группу. Гидрооксильные группы, которые находятся в боковых цепях, защищают путем перевода их- в простые эфирные группы, причем этерификадию предпочтительно проводят с применением трет-бутиловрго или бензйловрго спирт/а. Применяя подходящую комбинацию заШитных групп, можно ДОСТИЧЬ сёлективнбго и одновременного удаления их извесгньтм. способом. . Наиболеепредпочтительный вариант осуществлений способа следующий. Защищенную oi-амйнокиспоту вводят в реакцию конденсаций с метиловым эфиром трипептида - Тир-Сер-Мет-ОСНо, гидразид полученного замещенного метилового эфира тетрапептида вводят в реакцию с образованием -азида и затем полученным соединением ацилируют декапептид -Глу(ОБут) -Гис-Фе-.Арг-Три-Гли-Лиз-( БОК )-Про Вая-Гл и. Полученный указанным способом замещенный тётрадекапептид конденсируют со сложным эфиром , состоящего из соответствующих замещенных аминокислот, расположенных в иной последовательности. Образовавщийся гидразид замещенного эфира пептида вводят в реакцию с образованиемазйДа и полученным соединением ацилируют соответствующее защищенное производное С-конечной амшооксикислоты. Так например, при получении замещенного гептадекапептида (Замещенный тётрадекапептид конденсируют со сложным эфиром 15-16--дипептида. При получении замещенного октадекапепТида проводят конденсацию со сложным эфиром 15-17-трипептвда, а зймещенно-. го нонадекапептида - со слоштым эфиром 15-18-тетра пептида. Целевой проду1ст, освобожденный от имеющихся в нем защитных групп, может быть очищен с помощью хроматографии на колонке, например ионообменной хроматографии на различных сортах карбоксиметилцеллюлозы. В зависимости от,способов использованных при получении новых соединений, последние могут быть выделены в виде свободных оснований или в виде солей,Со ли, полу шнные известными способами, могут быть использованы для фармацевтических целей. При исследовании соединений с помощью хроматографии в тонком слое используют, в качестве адсорбента сшикагель по Шталю и следующие смеси растворителей: этиловый эфир уксусной кислоты: (пиридин:уксусная кислота:вода 20:6: ;11) 99:1; этиловый эфир уксусной кислоты: (пиридин:уксусная кйслота:вода 20:6:11 )8:2; этиловый эфир уксусной кислоты:(пиридин:уксусная кислота:вода 20:6:11), 6-.4, . Пример 1. D-OCep-Tnp Cep-. Мег-Глу-Гис- е-Арг-Три-Гли-Лиз-Про-Вал ли-Лиз-Лиз-Лиз Олиз- NH. 0,75 г (О,267 моль) BOK D gCep-Тир-Се р-М ет-Гл у (О Бут) Гис-Фен А рг-Три-Гли-Л из (БОК) 1из-( БОК)-Л из|БОК )-О Л из (Фор)- NHg растворяют в смеси из 6 мл трифторуксусной кислоты, 0,75 мл воды и 0,75 мл анизола, Приготовлеьшый раствор выдерживают в течение 1 ч и затем разбавляют 150 мл диэтг-стового эфира. В.ыпавший в осадок продзгкт отфильтровывают, промывают ЭФ1ФОМ и сущат в вакууме над пятиокисью фосфора и гвдроокисью калия, В результате получают 0,70 г (86%) трифторацетата замещенного формилоктадекапептида. Образовавшееся вещество растворяют в 10 мл воды, к раствору прибавляют 0,26 мл меркаптоэтанола и рН раствора доводят до 5, прибавляя 1 н. раствор едкого натра. После этого раствор смешивают с 11,5 мл 2 М раствора гидразинацетата и приготовленную смесь выдерживают 2 ч на водяной бане при 95с. Затем реакционнуЬ смесь концентрируют в вакууме и концентрат В1ГОСЯТ в колонку, заполненную ионообменной смолой марки Ватман СМ 52.Элюируют приготовленным из 0,2 М (рН 6,7) и 0,5 М (рН 6,7) аммонийацетатных буферным растворомс линейным градиентом, соответствующие фракции вы сушиваюг лиофилизацией и получают 0,275 г (38%) замещенного рктадекапептвдамида. Применяемый в качестве исходного вещества защищенный замещенный октадекапептидамид получают по следующей ме тоднке: Стадия 1. U -cJLi-трег.-бутилоксикарбониламинооксн- -формиламинокапроновая кислота (БОК)-ЮЛиз(Фор), 23,2 г (60 ммоль) Ы - е-формил-13-лизина и 43,2 г (423 ммоль) бромисто. го HaTpiffl растворяют в 248 мл 2,5 н. раствора серной кислоты. Приготовленный раствор охлаждают до и при перемещивании прибавляют к нему небольшими порциями в течение 30 мин 13,3 г (192 ммоль) нитрата натрия. Реакцио1шу смесь перемешивают при в течение 1 ч, затем при комнатной температуре в течение 1 ч и непосредственно после этого три раза экстрагируют 200 Лш диэтилового эфира. Объединенные эфирные экс тракты сущат и упаривают досуха. Получают 18,4 г неочищенной I) -о -бром- -формиламинокапроновой кислоты. Образовавшийся продукт pacTBOpjnoT в 190 м этилового спирта и к раствору прибавляют 8,4 г (150 ммоль) гидроокиси калия и 10,0 г (76 моль) трет.-бутилоксикарбонилгидроксиламина. Реакционную смесь нагревают 2ч при температуре кипения и затем вьщерживают в течение ночи при комнатной температуре. После этого раст воритель отгоняют, остаток растворяют в 80 мл воды и рН полученного раствора доводят до 3, приливая 10%-1тый раствор соляной кислоты. Кислый раствор насыщают хлористым натрием и трижды экстрагируют 150 мл ДИЭТШ1ОВОГО эфира, а затем 150 мл этилового эфира уксусной кислоаы. Эф1фную фазу и раствор продукта в этиловом эфире уксусной ккслоты объединяют, сушат и упаривают. Кркютаплический остаток (16 г) перекристаллизо Бывают из 25 мл этилового эфира уксус ной кислоты, В результате получают 10,4 г (27%) ВОК-ОЛиз (Фор), т.гш. 114-11- С. 0,31, CO(..Q -52;5 (с 1, метиловый спирт). Найдено, %: С 49,9; Н 7,6. (290,32) Og Вычислено, %: С 49,6; Н 7,65. Стадия 2. Ь оС-трет..утилоксикарбонш1 аминооксй- формиламинокапроновая кис лота, амид БОК-ОЛиз(Фор)-МН21. 5,0 г (17,2 ммоль) БОК-Олиз(Фор) растворяют в 107 мл безводного тетрагидрофурана и к приготовленному |эаствору прибавляют 1,90 мл (17,2 ммоль) N--мётилморфолина. Раствор охлаждают о -10°С и при перемешивании прикапыают к нему 2,25 мл (17,2 ммоль) изобутилового эфира хлорутольной кислоты. Реакционную смесь выдерживают 10 мин при и затем охлаждают до , Непосредстве гао после этого к реакционной смеси осторожно прибавляют по капям 1О,7 мл (142 ммоль) концентрированного раствора гидроокиси аммония и реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при 0°С и затем 1 ч при комнатной температуре. Непосредственно после этого отгоняют тетрагидрофуран и полученный остаток, частично закристаллизовавшийся, растворяют в 20 мл смеси, состоящей из этилового эфира уксуснойкислоты, пиридина, уксусной кислоты н воды, взятых в соотношении 90:54:16:30, и вводят в колонку емкостью 250 мл, заполненную силикагелем. Элюируют указанной смесью. Фракции, содержащие целевой продукт, собирают и упаривают. Получают 4,3 г (86%) БОК-ОЛиз(Фор)- МИд в виде слабо окрашенного в желтый цвет аморфного вещества. R% 0,54. (289,34/. , Стадия 3. трет.-Бутшоксикарбонил-D-ci.-аминоокси-|Ь -бензилоксипропионовая кислота. 48,4 г (О,364 моль) трет.-бутшоксикарбонилгидроксИпамина, 40,7 г (0,728 моль) гидроокси калия ; и 94,0 г (0,364 моль) D , L -ot-бром- |Ъ-бензилоксипропионовой кислоты растворяют в 360 мл воды. Реавдионную смесь перемешивают в течение 3 ч при кo Iнaтнoй температуре. Непосредственно после этого рН реакци онной смеси доводят до 3 и затем трижды экстрагируют 72О мл диэтипового э41нра, эфирный раствор промьшают 720 vi воды, сушат и смешивают с 78 мл ( моль) дициклогексготамЕна. В результате получают 43,61 г,соли дидиклогексипамина и трет,-бутипоксикарбонип-1), L-cзC- -aминooкcи-} -бeнзшIoкcипpoпиoнoвoй кислоты, т.пл. 144-14бс. Полученную соль суспендируют в 50О мл дна т илового эфира и приготовленную суспензио пять раз встряхивают со 1ОО Мл 0,2 н. раствора серной кислоты. Эфирный слой отделя бт, сушат и упаривают, получе1гаый остаток pacTBopffiOT в 700 мл этштового спирта, после чего к приготовленному раствору прибавляют 6,56 г (48,5 моль) (+)-ам()етатиинового основания. Раствор йыдерж СЕШ-.

.tvr:-;J.- ;f: i:т; 3 : Г255;S5.

,Д.Ш1ИАЖ.ЬЦ i 65 JOT D Течение ночи в холодном месте и на следующий лень отфильтровывают выпавший в осадок кристаллический продукт. Полушиную {+)-амфетаминовую соль трет -йутшоксикарбонич-Й-с - ми -бензгаокс шропионоеой кислоты перекристаллизовывают из этотсового спирта. Выход образовавшегося продукта 13,27 г, т.ш. Xes-iofc, Cc5t3j +54 (с 0,5, метиловый спирт). Из соли известным способом получают трет.- утилоксикарбо- нил-В-оС-аминоокси Л бензилоксипропи- оновую кислоту.Выход 7,9г (14%), т.пл. 9e-.,tol}|, 1, этиловый спир Сгадия 4. трет.-БутилЬксикарбонил-J) -с.- мш1ООКси-}1 -г1ЩрооКсйпррпйоковай кислота (ЮК-и-ОСер). 5,5 г (17,1 ммояь) Ъ сз1г-трет.-бутйло йсикарбонйламиноокси- р -бенаилоксипропионовой кислоты растворяют в 110 мл MeTimoBOro спирта и затем гидрируют в присутствии 2,75 rlO -Horo катализатора, представляющего собой палладий, нанесенный на а1стйВ1фованный уг6ль. Через 3ч катализатор отфдаьтровывают, от фильтрата отгоняют метиловый спирт и маёлообраг ный остаток заливают пбтро-. леймым эфиром. Чбрез несколько часов ве шество закристаллизрвывается. После фшьтрования и сушки подучают 3,65 г (96%) 1)-..-бутипоксикарбонилами ноокси- jb- идрооксинропионовой кислоты. т.пл, 94-95 е. 1 0,27. СИ.. NO,{221.22) Стадия 5. БОК- В-ОСер-Тир-Сер-Метг {2Q ммопь) БОК-Б-ОСер и 9,О г (20 ммоль) Tnp-Cep-JV eT-OCHa IJacTBOpaiOT в 30 мл диметютформамида, пр КотоБленный раствор охлаждают до и прибавляют к нему сначала 2,22м {20 ммоль) Ы-метилморфолина и ;затем 3,8 г (16,4 оль) ДЦК. Роаадйоннук) смейь перемешивают в течение 1 ч при О С и затем выдерживают до следующего дня при комнатной температуре. Выпавший в осадок дициклогексилкарбамид отфодьтровывают. Фильтрат упаривают и полученный остаток растворяют в 400 мл этилового эфира уксусной кислоты. РастJBOp два раза промывают 1 и. раствором соляной кислоты, используя каждый раз по 20О мл соляной кислоты, и два раза раствором кислого углекислого натрии, применяя каждой промывки по 200 мл раствора. После этого раствор сушат и упаривают. Полученный остаток(8,10 г защищенного замешенного 1.-8 эфира тетрапепгиДа) растворяют в 85 мл метилового спирта, к приготовленному раствору прибавляют 2,2 мл (46 ммоль) гидразингидрата и реакционную смесь выдерживают до следующего дня при комнатной температуре. На следующий день от реакционной смеси отгоняют метиловый спирт, полученный остаток растворяют с этиловым эфиром уксусной кислоты, осадок отфильтровывают и промывают этиловым эфиром уксусной кислоты и диэтиловым эфиром, после чего сушат над концентрированной серной кислотой. Получа- - -, .., ют 7,21 г (63%) защишенного замешенкого тетрапепгидгидразида, т.пл. 174 175С (вода). 0,30. Найдено %: С 48,3; Н 6,6; N 13,8. (616.69). Вычислено, %: С 48,7; Н 6,55; N13,6. Стадия 6. БОК-D-OGep-THp-CepWVleT-Глу(ОБут)-Гис-Фен-Арг-Три-Гли-Лиз(БОК)-Про-Вал.Гли . НСе. 1,25 г (2,13 ммоль) БОК-Б-ОСер-Тир-Сер-Мет- NgH растворяют в 15 мл диметилформамвда и приготовленный раствор охлаждают до -20С. Затем при перемешивании к нему прибавляют по каплям сначала 2,О8 мл (8,32 ммоль) 4 н. раствора хлористого водорода и этилового эфира уксусной кислоты, затем 0,32 мл (2,70 ммоль) трет.-бутипнитрита. Реакционную сме(Е& перемешивают в течение 5 мин при -10 С, затем охлаждают до 20°С и прибавляют к неЛ 2,78 г Глу-О Бут)-Гис-Фен-Арг-Три-Гли-Л из( БОК )-Про.ал7Гли и 1,4 мл (8,13 ммоль) диизопропилэтияамина в 23 мЛ диметилформамида. Реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при темпештуре от .-5 до , и затем выдерживают до следующего дня при . Раствор упаривают и полученный остаток растирают с 8%-ным раствором кислого углекислого натрия. После фильтрования, промывки водой и сушки получают 3,49 г (94%) защищенного замешенного ;тетрадекапептида. Продукт суспендируют ъ 24 мп метилового спирта и к приготовленной суспензии прибавляют раствор солянокислого пиридина, пригото Ешенный из 4,75 мл концентрированной соляной кислоты и 4,75 мл пиридина. Затем раствор разбавляют 240 мл воды, выделившийся при этом осадок от фильтровывают,промывают водой и, наконец. :сущат. Полученный 2,95 г (73%) солянокислой соли {защищенного тетрадекапептида, т.пл. 200-204 С. R| 0,25. с«н (1989,68). .6 Стадия 7. Лиз(БОК)1из{ ЮК)-ОСН , ок салат. 11,0 г {17,7 ммопь) (БОК) ОСН растворяют в 2ОО мл метилового спирта, приготовленный раствор смешивают с 2,О г (22,2 ммоль) безводной щавелевой кислоты и в присутствии 2,0 г 10%-ного катализатора (палладия на активированном угле) гидрируют. Катализатор отфильтровывают, фильтрат упаривают и полученный остаток растирают с диэтиловым спиртом. Получают 9,1 г. (89%) щавелевокислой соли эфира дипептида, которую перекристаллизовывают из смеси изопропилового спирта и диизопропилового эфира. Температура плавления ее 65бТ С. R.g 0,34, cl3.p +3,79 (с - 1 метиловый спирт). Найдено, %: С 51,5; Н 7,9; Н9,9. ,4% (578.65). Вычислено, %: С 51,9; Н 8,9; Ы 9,7. Стадия 8. 1-Лиз(БОК)-Лиз(БОК)-Лиз(БОК)-ОСН 8,1 г щавелевокислой соли Лиз (БОК)«Лиз(БОК)-ОСН (14,0 ммоль) суспендируют в 60 мл этилового эфира уксусной кис лоты, к приготовленной суспензии прибавляют сначала 3,1 мп (28,0 ммоль) Ц-метилморфолина, а затем 6,7 г (14,0 ммоль) Z-Лиз-(БОК)-ОК Су. Реакционную смесь перемешивают в течение 2 ч при комнатной температуре, после него разбавляют 200 мл этилового эфира уксусной кислоты и 40 мл воды. После отделения водной фазы раствор .продукта в этиловом эфире уксусной кислоты щ&а раза промывают 40 мл 1 н. раствора соляной кислоты и два раза 4О мл 8%-ного раствора кислого углекислого натрия,раст вор сушат над сернокислым натрием и, наконец, упаривают. Остаток растирают с диизопропиловым эфиром. Продукт перекрас таллизовыва ют из смеси изопропило- вый спирт - диизопропиловый эфир. Получают 8,0 г (67%) метилового эфира защищенного трипептида, т.пл. 117-11 РС. 0,58,осЗ -17,47° (с 1. металовый спирт). Найдено, %: С 59,7; Н 8,2. (851,03). Вычислено, %: С 59,3; Н 8,3. Стадия 9. БОК-1 -ОСер-Тир-Сер- Мег-Глу(ОБут)-Гис-Фен-Арг-Трп-Гли-Лиз(БО -Про-Вал-Гли-Лиз (БОК)-Лиз(БОК)«Лйз(рзок)-осНа-мсе. 1,25 г г-Лиз(БОК)-Лнз(БОК)-Лиз (БОК)-ОСИ2 растворяют в 25. мл метилового спирга н гидрируют в присутU-- «a i..4i-r;;ir,,

. s. 1 ствии 0,2 г 10%-ного катализатора. После завершения реакции катализатоп отфильтровывают, от фильтрата отгоняют метиловый спирт и полученный в виде остатка эфир трипептида растворяют вместе с 2,42 г (1,24 ммоль) БОК- Б-ОСер-Тир-Сер-Мет-Глу (ОБу т)-Гис-Фен-А рг-Трп«-Гли-Лиз(БОК)-Про Вал-Гли НСВ в 12 мл димегилформамида. К приготовленному раствору прибавляют 0,97 г (3,64 ммоль) пентахлорфенола и 0,255 г (1,24 ммоль) дициклогексилкарбодиамида и реакционную смесь выдерживают в течение двух дней при комнатной температуре. Выпавший в остаток дициклогексилкарбамид отфильтровывают, фильтрат упаривают в вакууме и продукт осаждают диэтиловым эфиром. Остаток отфильтровывают, сушат и получают 3,4 г,г.пл. 177°С (с разл.). После переосаждания из смеси метиловый спиртэфир получают 2,6 г (80%) солянокислой соли метилового эфира защищенного замешенного гептадекапептнда, т.пл, (с разл.). R| 0,54. S25.96«270M - (2688.61). . .Стадия 10. БОК-Б-ОСер-Тир-Сер-Мег-Глу(ОБуг)-Гис-Фен Арг-Трп-Глн-Лиз(БОК)-Про-Вал-Гли-Лиз (БОК)-Лнз (БОК)-Лиз(БОК),. 2,5 г (0,93 ммоль) БОК-В-ОСер-Тир-Сер-Ме1.Глу (ОБут )-Гнс-Фён-Арг-Трп-Гли-Лйз (БО К )-Про-Вал-Гли-Л из(БОК)-Лйз(БОК)-Лиз(БОК)-ОСНз-нее растворяют в 75 мл кипящего метилового спирта. Приготовленный раствор охлаждают дб комнатной температуры, смешивают с 0,91 мл (18,7 ммоль) гидразингидрата н реакционную смесь выдерживают в течение двух при комнатной температуре. Непосредственно после этого от реакционной смеси отгоняют метиловый спирт и остаток растворяют в диэтиловом эфире, НеочищеншлГй продукт 2,15 г, т.пи. 199С (с разл.) переосаждают из диметилформамида и воды. Получают 2,00Т (81%) гидразида защищенного замещенного гептадекапептида, т.пл. (с разл.). R 0,49. С«4«1« 2 (2652,16). Стадия 11. БОК-и-ОСер-Тнр-Сер-Мет Глу(ОБут)-Гйс-Фен-Арг-Трп-Гли-Лиз(БО К )-Про-Ва л-Гпи-Лкз (БОК )-.Л из (БО К )-Лиз (БОК)Лиз (Фор)-ННг. а) 0,57 г (1,97 ммопь) БОК ОЛиз(Фор)-ЫН2 растворяют в 7,5 мл трифторуксусной кислоты. Раствор упаривают в вакууме и остаток растворяют в 4 мл дн11

6516,91 мегилформамида. Приготовленный раствор нейтрал из у it дииз опропилэтиламином, б) 1,00 г (О,377 ммоль) БОК-D«ОСер Тир-Сер ег-Глу (ОБут )-Гис-Фвн А рг-.Трп Гль-Лиз-( БОК )-.Про-Вал Гли Лнэ(БОК)-Лиэ(БОК)-.Лиз(БОК)- растворяют при легком нагревании в 5 мл диметилформамида. Пригоговленный раствор охлаждают до - 20 С и при перемешивании прибавляют к нему по каплям сначала 0,54 мл (1)52 ммоль) 2,8 и. раствора хлористого водорода в этиловом эфире уксусной кислоты и затем 0,05 мл (0,42 ммоль) грет.-бугилнитрита. Реакционную смесь перемешивают в течение 5 мин при , охлаждают до -2О С затем прибавляют к нему приготовленный в соответствии с п. а) нейтрализованный грифторацетатный раствор О Лиз (Фор )-HHj вместе с 0,2 мл (1,17 ммоль) ди изопропилэтиламина. Реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при О С и оставляют до следующего дня. Непосредственно после этого от реакционной массы отгоняют половину растворителя и остаток разбавляют 2О мл воды. Выпавшая осадок масса затвердевает при стоянии Затвердевшую массу под слоем свежей во ды измельчают в порошок, отфильтровыва ют и сушат. Получают 0,80 г (75,5%) защищенного замещенного октадекапептида, т.пл. 140-145С. R j 6,47. (2809.3.5). Пример 2. ТЗ-ОСер-Тир-Сер-Мет-Гпу-Гис-Фе-Арг-Трп-Гпи-Лиэ-Про-ВагнГпи-Лиз-Лиз-Лиз-О -ОЛиз-N Н. 0,75 г (0,267 ммоль) БОК-В-ОСер -.Тир-Сер Мет-Глу (ОБут )-Гио-4е-А рг-Тр «Гли-Лиз(БОК)-Про-Вал-Гли-Лиз(БОК),}из(БОК)-Лиз(БОК)-Лиз(БОК)-3)-ОЛиз. ( растворяют в смеси 6 мл трифторуксусной кислоты, 0,75 кйвЬды и 0,75 мл анизола. Приготовленный раст вор выдерживают в течение 1 ч и затем разбавляют 15О мл диэтилового эфира. Образовавшийся при этом осадок отфильтровывают, промывают диатйловым эфиром и сушат в вакууме над пятиркисью фосфора и гидроокисью калия. Полу:чают 0,6 г (8О%) трифторацетата замешенного формилокта декапептида. Образовавщееся вещество растворяют в Ю МП воды, к раст вору приливают 0,25 мл меркаптоэганола и рН раствора доводят до 5 раствором едкого кали, затем добавляют 10,6 мл 2 М раствора гидразинацетата и смесь В1ферживают в течение 2 ч на водяной баке йри . Раствор, оставшийся пос12пв частичного упаривания в вакууме, выливают в колонку, заполненную ионообменной смолой марки Ватман СМ-5 2. Элю ируют буферным раствором, приготовленным из 0,2 М (рН 6,7) и 0,5 М (рН 6,7) аммонийацегатных буферов. Соответствующие фракции собирают, модифицируют и получают 0,28 г (41%) замещенного октадекапептидамида. Применяемый в качестве исходного вещества защищенный замещенный октадекапептидамид получают по следующей методике. Стадия 1. 1Э .-бутилоксикарбониламиноокси- 8 «формиламинокапроновая кислота . ВОК-ТЭ-ОЛиз (Фор) . Способом, который описан в примере 1 (стадия 1), из М-Е-формил-L-лизина получают 3) -оС-трет.-бутилоксикарбониламиноокси- 6-формиламинокапроновую кислоту, т.. 114-116°С. 0,31,tcC3.jj ь 1, метиловый спирт). +58,6 С 5О,0; Н 7,6. Найдено, jg (290,32). ,, Вычислено, %: С 49,6; Н 7,65. Стадия 2. Амид-3)-о1-трет.-бутилоксикарбониламиноокси-формиламинокапроноврйкислоты БОК-В-ОЛиз (Фор)- NH J. Амад получают способом, описанным в; примере 1, исходя из5,0г(17,2 ммоль) БОК-З)-ОЛиз(Фор). Получают 4,4 г (88%) БОК-1 -ОЛи%(Фор)-ЫН2. R 0,54. (289,34). Стадия 3. БОК-Ъ-ОСер-Тир-Сер-Мет-Глу (ОБуг )-Гис.-Фен-Арг-Трп- Гли-Лиз(БОЮ-Про ал-Гли-Лиз (БОК)гЛиз (БОК)-Лиз(БОК)-.В-ОЛиз(Фор). Используя 0,57 г (1,97 ммоль) БОК-1| ОЛиз(Фор)-МН2, способом, описанным в примере 1 (стаДия 2), получают 0,90 г (85%) защищенного замещенного амида октадекапептида, т.пл. 140- . Rf 0,4. . (2809,35). «1 П р им е 3. Н-и-ОСер-Тир-Сер-Мет лю-Гис-Фен-А рг-Трп-Гли-Лиз-Про-Вал- ли-Лиз-Лиз-Лиз-ОЛиз- NHj. 1,2.г (0,417 ммоль)БОК-и-ОСер-Тир Сер-Мет Глю (ОБут)-Гис-Фен-Арг« -Трп-Гли-Лиз (БОК )-Про-Вал-Гли-Лиз (БOK)-Лиз(БOK)-Лиз(Бok)-NH2 растворяют в смеси из 9,6 мл трифторуксусной кислоты, 1,2 мл воды и 1,2 мл анизола. Раствор оставляют на 1ч и затем разбавляю 240 мл эфира. Выпавший осадок отфильтровывают, промывают эфиром ч высушивают в вакууме над пятиокисью фосфора и гидроокисью калия. Получают 1,10 г (84%) замешенного ами-. нооксикислотами октадекапепгидамйдтрифторацегага. Сырой грифторацегаг расгворяюг в 20 мл воды и грифторацегагные ионы с помощью ацетатциклическогр ионообменника марки Дауэкс 1 8 (фирмы Rohm und Hoiae) обменивают на ацетатные ионы. Загем таким образом полученный раствор вводят в колонну (4,5м6,5 см) заполненную ионообменником марки Ватман СМ-52. Элюируют, используя линейный буферный градиент, приготовленный из 2 л 0,2 М (рН 6,7) и 2 л О,5 М (рН 6,7) аммонийацетатных буферов со скорос тью 80 мл/ч, соответствующие фракции объединяют и лиофилизуют. Получают 0,49 г (41%) замещенного аминоокрикарбоновыми кислотами октадекапептидамида. Содержание пептида 78% (по УФ-спектру) мет-сульфоксИДИ 2,3%. Соотношение Тир: :Трп 1:10. Анализ аминокислот:Лиз 3.5 (4); Гис 0.9 (1), Apr 1,О (1); Сер 0,85 (1);Глю I.O (1);Про 1.0 (1) Гли 1,9 (2); Вал 0,9 (1); Мет 0.7 (1); ТирО,9 (1); Фен 1,0 (1). Кг 0.18. Применяемый в качестве исходного вещрства защищенный замешенный амино- оксикарбововыми кислотами октадекапеп- тидамид получают следующим образом. Стадия 1. Лициклогексиламиновая соль L -оС-трет.-бутил-оксикарбониламиноокси... ...бензилоксикарбониламинокапроновой кислоты (БОК-ОЛго Z ОН-Б-СНА). Способом, описанным в примере 1 (ста дия 1) получают из N- -бензилоксикарбонил-Ю-лизина маслянистую L -с(рет. утилоксикарбониламиноокси- -бензилокс карбониламинокапроновую кислоту. Продукт растворяют в эфире и вводят во взаимодействие с дициклогексиламином до образования дициклогексиламиновой соли, т.пл. 158-1б1°С (перекристаллизов§на из смес« этанол-вода). R 0,15.Го13 -34,5 ( -iI I с S 1, этанолЬ Стадия 2. Амид L, -сХ-грет.-бутилоксикар брниламиноокси- -бензилоксикарбонилами- нокапроновой кислоты (БОК-ОЛиз-t Z - -NH). Дициклогексиламиновую соль L -оС-трет.-бутилоксикарбониламиноокси- -бензилоксикарбониламинокапроновой кислоты экстрагируют 1 и. серной кислотой, эфирный раствор упаривают. Полученную кислоту способом, описанным в примере 1 (стадия 2), превращают в амид. После выпаривания реаквиониой смеси сырой продукт растворяют в этилацетате и промывают водой. 1 и. раствором серной кислоr.S l1 ты и, наконец, 8%-ным раствором гпдрокарбоната натрия. Этилацетатную фазу упаривают. Получают амид L - ot-трет.-бутилоксикарбониламиноокси- -бенз илоксикар бонил-аминокапроновой кислоты в виде густого .масла, которое кристаллизуют из си метанол-вод/а, т.пл. 93-95 С. R 0,42,ciL3j3 -27,5°(c 1, метанол). Стадия 3. Оксалат амида L -оС-трет.« утилоксикарбонил-аминоокси- -аминокапроновой кислоты (БОК, -ОЛиз-МН, -оксалат). 12,0 г (30,4 ммоль) EiOK-ОЛиз- ZJ-NHn растворяют в 240 мл метанола, смешивают с 3,0 г (33,3 ммоль) безводной щавелевой кислоты и гидрируют в присутствии 2.0 г 1О%-ного палладия на активированном угле. По окончании реакции катализатор отфильтровывают, фильтрат упаривают и остаток растирают с эфиром. После перекристаллизации сырого оксалата (9,3 г) из смеси 45 мл метадола и 95 мл эфира получают 8.7 г (81,5%) оксалата амида L - о г-грет.-бутилоксикарбониламиноокси- -«минокапроновой кислоты, т.пл. 153-155 С. R 0,30,СоС -38,1° (с 1. метанол). Стадия 4. Амид U - с миноокси- - -трет.-бутилоксикарбонил-аминокалроновой кислоты Н-ОЛю-(БОК)-КИр. 8,0 г (22.8 ммоль) БОК-ОЛиз-HHg-оксалата растворяют в 40 мл трифторуксусной кислоты и через 30 мин раствор упаривают в вакууме. Маслянистый остаток промывают несколько раз эфиром, затем 24 мл диоксана и добавляют 2 н. раствор гидроокиси натрия до рН 8-9. В реакционную массу вносят 6,6 г (45.5 моль) трет.-бутилоксикарбонилазида и 2,3 г (57.5 ммоль) окиси магния, перемешивают при комнатной температуре в течение 16 ч, осадок отфильтровывают и фильтрат упаривают. Остаток растворяют в 5О мл воды и экстрагируют этилацета- 1 том (3 ж 70 мл). После упаривания этилацетатной фазы остаток растирают с эфиром, отфильтровывают и затем сырой продукт (6,35 г) кристаллизуют из этилацетата. Получают 3.6 г (60.5%) амида Ц-оС-аминоокси-€ -трет.-бу тилоксикарбониламинокапроновой кислоты, т.пл. 118-12ОС. Rl О,ЗО, Cot3 -39,5° (, метанол). Стадия 5. (БОК)-Лиз(БОК)-Лиз (БОКГ- NjHj. 25,15 г (29.5 ммоль) (БОК)-Лиз(БОК)-Лиз(БОК)-ОСИ растворяют в 500 мл метанола и гидрируют в присутствии 5.0 г 1О%-ного палладия на акти15., . 65 внрованном угле. По окончании реакции катализатор отфильтровывают, фильтрат упаривают и остаток растеоряют в 18Омл дих;1Ормегаиа. Раствор смешш ают с 5,72 мл (41,0 ммопь) гриэтиламина и 10,26 г (36,8 ммоль) трифенилметилхло рида. Реакционную смесь выдержцЕают 16 ч при комнатной температуре, затем растворитель отгоняют и остаток растворяют в 300 мл этйлацетата, Гаствор про мывают 5%-«ым раствором лимонной кис- лоты (3 5О мл) и 50 мп воды, 8%иым раствором пшрокарбоната натрия (3 50 мл), сушат и упаривают. Остаток растирают в порошок с петролейным эфиром. После фильтрования и высушивания получают 38,0 г сырого Три:-Лиз(БОК) -Лиз(БОК)-Лиз(БОК)-ОСНз. Сырой продукт растворяют в 17О мл метанола, добавляют 7,25 мл (150 ммоль) гидразингидрата и реакционную смесь оставляют на 3 дня при комнатной температуре. Вы павший осадок отделяют фильтрованием и растирают с эфиром. Продукт (17,65г) перекристаллизовывают из смеси 35 мл Ыетанола и 350 мл эфира. Получают 13,85 г (49%) тетрапвптидгидразида, т.пл. 197-199°С. 0,13lotJ -7,1° (с - 1, метанол). Стадия 6. Трит-Лиз(БОК)-Лиз(БОК).Лиз(БОК)-ОЛиз(БОК)-ЫНд. 4,1 г (4,27 ммоль)Трит-Лиз(БОК)-/1из(БОК)-ОЛиз(БОК)- растворяют в 14 мл диметилформамида. Раствор охлаждают до -20 С и при перемешивании прикапывают к нему 6,5 мл (17,0 ммоль) 2,6 н. раствора соляной кислоты в этиладетате, а затем 0,65 мл (5,45 ммоль) трет.-бутилнитрита. Реакционную смесь перемешивают 5 мин при -10 С, затем охлаждают до -2О°С и добавляют раствор. 1,42 г (5,45 ммоль) Н-ОЛиз (БОК)-КН2 и 3,2 мл (12,8 ммоль) диизопропилэтиламина в 7 мл диметилформамида. Перемешивание продолжают в теченпе 1 ч при температуре от -5 до О С после чего оставляют на ночь при . Раствор упаривают, остаток растворяют в 14О мл этйлацетата и раствор промывают последовательно 40 мл воды, 5%НО& лимонной кислотой (3 А 40 мл) и, на конец, 8%-«ым раствором гидрокарбоната натрия (3 « 40 мл). Этилацетатный слой отделяют, сушат, растворитель отгоняют и твердый остаток растирают с эфиром. Осадок отфильтровывают, высушивают и получают 2,75 г (54%) защищенного, за метенного аминооксикарбоновой кислотой 1 137 140°С, тетрапептидамида, г пл. R.. - 0,2в,СлЗ -24,4 о / 1 с SS 1., мега« -w Стадия 7. (БОК)-./1из(БОК)-.Лиз (БОК)-ОЛиз(БОК) N112 НСВ. 5,0 г (4,22 ммоль) Трит-Лиз (БОК)-Лто (БОК)-Лиз (БОК)ОЛнз (БОК) Nli растворяют в 50 мл метанола и смеши вают с раствором гидрохлорид-пирндина из 1,7 мл пиридина и 1,7 мл концемгрированной соляной кислоты. Реакционную смесь оставляют на 20 ч при комнатной температуре, затем метанол отгоняют и оставшуюся плотную массу размешивают со 150 мл воды. Воду сливают, остаток высушивают в вакууме и растирают в порошок с эфиром. Продукт отделяют фильт рованием, сушат и получают 3,7 г (82%) И-Лиз(БОК)-Лиз(БОК)-Лиз(БОК)-ОЛиз(БОК)-НН2-нее , т.пл. 120-123 С. R 0,72, dJ +17° (с 1, метанол). Стадия 8. БОК-Б-ОСер-Тир-Сер-Мет-Глю (ОБут )-Гис-Фен-Арг-Трп-Гли-Лиз(БОК)-Про-Вал-Гли-Лиз (БОК)-.шз (БОК)-sfte (БОК)-ОЛиз (БОК)-N Н2. 0,9995 г (0,5 ммоль) )-ОСер-Тир-Сер-Мет-Глю (ОБут )-Гис-Фен Арг-Трп-Гли-Лиз (БОК)-Про-вал-.Гли-ОН НСЕ 0,491 г (0,5 ммоль) Н-Лиз (БОК)Лиз (БОК)-/1из(БОК)-ОЛиз(БОК)-КН2-НСе и О,80О г (3,О ммоль) пентахлорфенола растворяют в 5 мл диметилформамида и добавляют сначала 0,О55 мл (0,5 ммоль) N-метилморфолина, а затем 0,21О г (1,0 ммоль) дициклогексилкарбодиимида. . Реакционную смесь оставляют стоять при комнатной температуре в течение дня, затем дидиклогексилкарбамид отфильтро вывают и фильтрат разбавляют 1ОО мЛ эфира. Вьщелившийся продукт отделяют фильтрованием, промывают эфиром и вы«сушивают. Получают 1,30 г (9О%) защишенного, замещенного аминооксикарбоновой кислотой октадекапептидамида. R 0,50. Пример 4- jD-OCep-THp«Cep-/v eT -Гис-Фен-Арг-Трп Гли-Лиз-Про-Вал-Гли-Лиз-Лиз-Р 0Лиз- HHj. 1,2 г (0,417 моль) БОК-Ц Сер -Тир-Сер-Мет-Глю (ОБут )«4 ис Фен Арг-Трп-Гли-Лиз (БОК)-Про«Вал Гли Лиз (БОК) -Лиз(БОК)-Б-ОЛиз(БОК)-НН2 растворяют в смеси 9,6 мл трифторуксусной кисло ты, 1,2 мл воды и 1,2 мл анизола. Через 1 ч раствор разбавляют 240 мл эфира. Выпавший осадок отфильтровывают, про мывают эфиром и высушивают в иакууме над пятиокисью фосфора и гидроокисью калия. Получают 1,05 г (80%) замещенного октадекапептидамидтрифгорацетата. Сырой трифторацетат растворяют в 20 мл воды и трифторацетатные ионы посредст вом ацегатцикаического иойообменника марки Дауэкс (фирмы Rotimund Hods) обменивают на ацетат-ионы. Затем полу ченный таким образом раствор пропускают через колонну (4,5 65 см), запол ненную ионообменником марки Ватман СМ-52. Элюируют линейным буферным градиентом, приготовленным из 2 л 0,2М . (рН 6,7) и 2 л 0,5 М (рН 6,7) аммоний ацетатных буферов, со скоростью 80 мл/ч. Фракции, содержащие продукт, объединяют илиофилизуют. Получают 0,42 г (37%) замещенного аминооксикислотой октадекапептидамида. Содержание пептида 82% (по УФ-спектру), Мет-сульфоксида 1,8%, Тир/Трп 1,О7. Аминокислотный анализ: Лиз 3,4 (4), Гис 1.0 (1), Apr 0,9 (1), Сер 0,8 (1), Глю 0,9 (1), Про 1,0 (1), Гли 2,05 (2) Вал 0,9 (1), Мет 0,75 (1), Тир 0,9(1) Фен. 1.0 (1). R| 0.18. Применяемый в качестве исходного вещества защищенный, замещенный аминоок- сикарбоновой кислотой октадекапептядамид получают следующим образом. Стадия 1. Лициклогексиламиновая соль 1)-.о,-трет.-бутилоксикарбониламиноокси- - -бензилоксикарбониламинокапроновой кислоты (БОК-1)-ОЛиз 11-ОН). Это соединение получают из N- - -бензилоксчкарбониллизина описанным в примере 1 (стадия 1) способом. Получен- ную маслянистую D - сС ТСрет.-6утилоксикарбокиламиноокси-6 -бензилоксикарбонил амино-капроновую кислоту растворяют в эфире и вводят во взаимодействие с дициклогексиламином с образованием диаиклогексиламиноврй соли. т.пл. 159-162 С (перекристаНлизована из смеси этанолвода). К ; 0,15,Гс13,| +35,4 (с « 1, этанол). Стадия 2. Амид D-оС-грет.-бутилоксикарбониламиноокси- -бензиЛоксикарбониламинокапроновой кислоты (БОК-В-ОЛизЦ 3-NH). Это соединение получают описанным в примере 3 (стадия 2) способом из дициклогексиламиновой соли D «оС-трет.-бутил« оксикарбонил-аминоокси- -бензилкарбонил аминокапроновой кислоты. F 0,42, т.пл. 95-97 С.Го13 +28,90 ( 1, меганол). Стадия 3. Оксалат амнда .TpGT.-6yгилоксикарбоннл-аминоокси- -вминокапро- новой кислоты (БОК)) -оксалат. Это соединение получают описанным в примере 3 (стадия 3) способом нз амида У) «оС-трет.-бyгилoкcикapбoни шминooкcи- -бeнзипoкcикapбoнилaминoкaпpoнoвoй кислоты, температура плавления полученного соединения 1S5-157 C. S О,30, ГоСЛ.р +39, (с 1, метанол). Стадия 4. Амия D-оЬ-аминоокси- -трет.-бутилоксикарбониламинокапроновой кислоты .ОЛиз-(БОК)-NHg . Способом, описанным в примере 3 (стадия 4), из оксалата амида . -бутилоксикарбониламинооксн- f аминокап« роновой кислоты получают указанное в заголовке соединение, т.пл. 118-120 С, Ri 0.28. ol3 +40.4 (с s 1, мета I JJ Стадия 5. Трит-Лиз(БОК)-Лиз(БОК)-Лиз(БОК)-Б-ОЛиз(БОК)-МН2. Получают описанным в примере 3 (стадия 6) способом из 8.7 г (1,0 ммоль) Триг-Лиз(БОК)-Лиз(БОК)-Лиз(БОК)- и 3,0г (11,5 ммоль) H-D-ОЛиз-. (БОК)-МН2. После выпаривания этилаце- татной фазы остаток растворяют в 2О мл смеси Эг :илацетат: (пиридин:уксусная кислота:вода 2О:6:11) 99:1, вносят в колонну с силйкагелем и хроматографируют. Элюат отбирают в виде фракций по 15 мл и их состав контролируют с помощью тонкослойной хроматографии. Фракции , содержащие чистый продукт, объединяют и отгоняют растворитель. Получают 3.7О г (34.5%) защищенного, замещенного аминооксикарбоновой кислотой тетрапептидамида, т.пд. . Rr 0.23. Стадия 6. Н-/1из(БОК)Лиз(БОК.)-.Лнз(Бок)(Бок)-мн2-нее. 2.0 г (2.1О ммоль) Трит-Лиз (БОК)-Лиз (БОК)-Лиз(БОК)-1)-ОЛиз (БОК)-. -NHg растворяют в 20 мл 8б%-ной уксусной кислоты. Раствор оставляют на 20 мин при комнатной температуре, затем выпаривают и остаток растирают с эфиром. Получают 1,68 г замещенного аминооксикарбоновой кислотой тетрапептидамидацетата. т.пл. 94-95 С. Продукт растворяют в 17 мл метанола, затем добавляют раствор -пиридингидрохлорида. полученный из 35 мл пиридина .и 1,35мл .концентрированной соляной кислоты, и метанол отгоняют. Остаток растирают с 50 мл воды. После фильтрован}ш и промывки водой высушивают и получают 1,2 г (72%) Н-Лиз(БОК)1из(БОК)-Лиэ(Г.ОК) В-ЮЛиз(БОК)-NH« . нее, т.пл. 122 .о я 125 С. R Стадия 7. 60K-D OCep-THp-Cep Mer -Глю(ОБут)-4ис-4 ен-Арг-ТрП -Глю(БОК)-. Про43ал-Гли Лиз {БОК)-Лиз (БОК)-Лиэ {БОК)-Б-ОЛиз(БОК)ЫН2. 0,995 г (0,5 ммоль) БОК. -Тир Сер-Мег-Глю(ОБут)-Гис-Фен Арг -Трп-Глю-Лиэ {БОК )-Про ал-Глю ОН НС| 0,491 г (0,5 ммоль) Н-Лиз (БОК)-Лиз«. (БОК)-/1из(БОК)-.(БОК)- Mllg « «НС6 и 0,800 г (3,0 ммоль) пенгахлорфв- нола растворяюг в 5,0 мл димегилформами да и к раствору добавляют сначала О,О55м (о,5 ммоль) М-метилморфолипа,а затем 0,210г (1,0 ммоль) дициклогексилкарбодиимида. Реакционную смесь оставляют на день при комнатной температуре, после чего отфильтровывают дициклогексилкарбамид и фильтрат разбавляют 10О мл эфира. Вы делившийся продукт отфильтровывают, про мышют эфиром и высушивают. Получают 1,4О г (97%) защищенного замещенного аминооксикарбоновой кислотой октадекапептидами й, т.пл. 170-178 С. R 0,52. Пример 5. Н-Р-ОСер-Тир-Сер««А ет«-Гяю Гис-Фен-Трп-Гли-Лиз-Про ал-4 ли-Лиз / из-Лиз-Лиз-ОГли- NHj. 0,4ОО г (0,134 ммоль) БОК-.1)«ОСер -Тир-Сер-Мет Глю-(ОБут ) Гис-Фен-Трп-Гли-Лиэ (БОК)-Про-Вал-Гли Лиз (БОК)-Лиз (БОК)-Лиз (БОК)-Лиз (БОК)-ОГли- NH, HCg растворяют в смеси 3,2 мл грифторуксусной кислоты, 0,4 мл анизола в 0,4 мл воды. Раствор выдерживают 1ч затем разбавляют 80 мл эфира и выпавши осадок отфильтровывают. Сырой нонадека- пептидамидтрифторацетат растворяют в 5 мл воды и хроматографируют на колон- не (3, см), заполненной ионообмен- НИКОМ на основе карбоксиметилцеллюло- зы (Ватман СМ-52), с помощью линейноJ го буферного градиента, приготовленного JI3 1,5 л 0,2 М (рН е,7) и 1,5 лО,6М (рН 5,7) буферов. Фракции, содержащие продукт, объединяют и лиофилизируют. лучают 0,166 г (41,5%) замещенного аминооксикарбоновой кислотой нонадека- пептидамида. Rf 0,22. Содержание пеп тида 76%, метионинсульфоксида 2,3%. Аминокислотный анализ: Лиз 4,5 (5), Гис 1,0 (1), Apr 0,9 (1), Сер (0,85) (1);Глю 1,0 (1), Про 1,0 (1), Глн 1,9 (2), Вал 0,85 (1), Мет О,75 (1), Тир 0,95 (1), Фен 1,0 (1). Применяемый в качестве исходаого lie шества защищенный, замешенный амино окснкарбоновой кислотой нопадекапептид- амидгидрохлорид получают следующим образом. Стадия 1. 2 (БOK)-Лиз(БOK). (БOK)Лиз(БOK)OCHJ. 51 г (60 ммоль) Z-Лиз (БОК) (БОК)-Лиз(БОК)ОСНд растворяют в 10О мл метанола и гидрируют в присутствии 10 г 10%-«ого палладия на активи рованном угле в качестве катализатора. По окончании реакции катализатор отфильт ровывают и раствор выпаривают в вакууме. Остаток растворяют в 240 мл зтидацета- та, добавляют 28,5 г (60 ммояь) 2 (БОК)ОСу и оставляют на 2 ч при комнатной температуре. Затем к реакцион ной смеси добавляют 1000 мл этйлацета« га и 200 мл воды. После встряхивания отделяют водную фазу и этилацетатную фазу пр(лывают два раза 200 мл 1 н. соляной кислоты, два раза 20О мл 8%-«ого раствора гидрокарбоната натрия и после высушивания выпаривают. Остаток растирают с эфиром, отфильтровывают и промывают эфиром. Сырой продукт перекристалпизовыаают из етилацетата. Получают 52,О5г (81%) Z WIиэ(БOK)-Лиз(БOK)-Лиз(БOK)-Лиз(БOK)-OCH,, т.пл. 122-123 С. Стадия 2. Н-Лиз(БОК)-Лиз(БОК)-Лиз(БОК)-Лиз(БОК)-ОСНз. 35 г (32,4 ммоль) Z -Лиз (БОК)-, -Лиз(БОК)-Лиз (БОК)-/1из (БОК)-ОСН растворяют в 700 мл метанола и гидрируют в присутствии 7 г 10%-«ог6 палладия на активированном угле в качестве катализатора. По окончании реакции ката« лизатор отфильтровьгоают, раствор упаривают и к остатку добавляют смесь эфирдииз опропиловый эфир. Осадок отфильтро Бывают, сырой продукт перекристаллизовывают из смеси эфир-дииз опропиловый ефир. Получают 24,8г ( 81%) Н-Лиа(БОК)-Лиз (БОК)-Лиз (БрК)-Лиз (БОК)-ОСН , т.пл. 101-103°С. Стадаш 3. Трит-Лиз(БОК)-Лиз (БOK)(БOK)-Jlнз (БОЮ-ОСН 24, г (25,4 ммоль) Н-Лиэ(БОК)-Лиз (БОК)-Лиз (БОК)-Лиз (БОК)-ЬсНз и 4,7мл (33,6 ммопь) триэтиламина раст- . воряют в 18О мл дихлорметана, к раство ру добавляют 8,5 г (30,5 ммоль) трифенилметилхлорида и оставляют стоять при комнатной температуре. Через 24 ч дихлорметан отгоняют, к остатку приливают 100 мл воды, продукт екстрагируют 500 мл етилацетата и водный слой отоеляют. Этип2 65169122 ;

ацетатную фазу промывают трижды 100млруют. Злюат собирают в виде фракций по..

лимонной кислоты и гри раза по15 мл и их состав определяют с помощью

100 мл 8%-ного раствора гидрокарбона тонкослойной хроматографии. Фракции

та натрия, высушивают и упаривают. Оста-105 112, содержащие чистый сырой про.ток растирают с эфиром,огфильтровыва 5дукг, объединяют, растворитель отгоняют,

ют, промывают диизопропиловым эфиромостаток растирают с эфиром, отфилбтровы

и петролейным эфиром. Получают 23,6 гвают и после высушивангш растворяют в

(78,5%) Трит-Лиз(БОК)-.Лиз(БОК)-Лиз-20 мл метанола. К раствору добавляют

(БОК)--Лиз (БОК)-ОСНз, т.пл. С.раствор пиридингидрохлорида, полученный

Стадия4. Трит Лиз{БОК)-Лиз (БОК)-путем смещения 0,22 мл пиридина и

.Лиз(БОК)-Лиз(БОК)-М2Н2..0,22 мл концентрированной соляной кис23,3 г (19,6 ммоль) Трит- 1из (БОК)-лоты. Затем метанол отгоняют, остаток

Лиз (БОК)Лиз (БОК)-Лиз (БОК)ОСНарастирают с эфиром, отфильтровьгоаюг и

растворяют в 230 мл метанола, добавля-высушивают в вакууме. Получают О,95г

ют 5,7 мл (117 ммоль) гидразинГидрата(65%) Н-Лиз(БОК)-.Лиз (БОК)Лиз (БОК)

и выдерживают при комнатной температу--Лиз(БОК)-йГли-. NH НС0. R| 0,18.

ре.. Через 4 дня метанол отгоняют, оста-Стадия 7. БОК р- ОСер Тир Сер-Мет«ток растирают с эфиром, отфильтровыва--Глю(ОБут)4ис Фен-Арг ТрП -Гли Лиз«

ют и высушивают в вакууме. Получают .(БОК)-.Про«Вал Глю-Лиз (БОК)Лиз (БОК)

23,0 г (98%) Трит-Лиз(БОК)Лиз(БОК).-Лиз(БОК)-Лиз(БОК)«.ОГли« NH HCg, -ЛизСБОК)-Лиз(БОК). Т.пл, 217-0,398 г (0,20 ммоль) БОК-В-ОСер

.(ОБут)-ГиС Фен-Арг

Стадия 5. (БОК)-Лиз(БОК)-- Трп-Гли«ОННСе, 0,208 г (0,20 моль)

(БОК)-Лиз (БОК).ОГли. NH. (БОК)-Лиз (БОК)-Лиз (БОК)-Лиз

2,37 г (2,0 ммоль) (БОК)-(БОК)-ОГли NH.j- НСб и 0,165 г

-Лиз(БОК)«Лиз(БОК)-Лиз(БОК) (0,90 ммоль) пентафторфенола растворярастворяют в 12 мл диметилформамида,ют в 4 мл диметилформамида и добавля.полученный раствор охлаждают до «20 Сют сначала 0,22 мл (0,20 ммоль) N -

и при перемешивании добавляют по каплям jg-метилморфолина, а затем 0,063 г

сначала 2 мл (8,0 ммоль) 4 н. раствора(0,30 ммоль) дициклогексилкарбодиимисоляной кислоты в этилацетате, а затем да.Реакдионнуюсмес оставляют на 16 ч

0,28 мл (2,35 ммоль) трет.-бутилнитрн- при комнатной температуре, после чего

та. Реакционную смесь выдерживают в те-от })ильтровывают диииклогексялкарбамид чение 5 мин при 10°С, охлаждают до, 35 фильтрат разбавляют афиром.Выделивший-20С и добавляют к ней 0,216 г (2,4ся продукт отфильтровывают, промывают

ммоль) Н-ОГли-ННл и 1,03 мл (6,0эфиром и высушивают в вакууме. Получаммоль) диизопропилэгиламина в 8,0 млют 0,54О г (91%) защищенного нонаде

диметилформамида. Реакционную массу вы- капептидамидгидрохлорида. Rf 0,63. держивают в течение 2 ч при температу- 40 Пример 6. Н-В-О Сер-Тир

ре от -«5 до и затем при 0°Р в те--Сер- Мет-Глю-Гкс-Фен Арг-.Трп-.Глю Лизчение нЪчи, растворитель отгоняют, оста -Про-Вал Гли-Лиз«ЛиЗ Лиз -Лиз ОГли-Бзл. ток растирают с водой, отфильтровывают0,400 г (0,130 ммоль) БОК-1)

и промывают водой. Получают 2,35 г-6Сер-.Тир-Сер-Мет-Глю(ОБут)-Гис-Фен(94%) Трит«Лиз(БОК)-Лиз(БОК)-Лиз- «-Арг«-Трп-Гли-Лиз(БОК)-Про«Вал-Гли(БОК)-Лиз(-БОК)-ОГли-НН2. Ri 0,72.-Лиз(БОК)-Лиз (БОК)-Лиз(БОК)-Лиз (БОК)Стадия 6. Н-Лиз(БОК)-Лиз(БОК)-Лиз--ОГли-ОБзл НСС растворяют в смеси

(БОК)-Лиз(БОК)-ОГли- NHg HCg.3,2 мл трифторуксусной кислоты, 0,4 мл

1,75 г (1,4 ммоль) Трит-Лиз(БОК)-анизола и 0,4 мл воды. Через 2 ч раст-Лиз(БОК)-Лиз(БОК)-Лиз(БОК)-ОГли- soвор смешивают с 80 мл эфира и отфильт

-NHg растворяют в 35 мл 80%-ного вод-ровывают выпавший осадок. Сырой нонаденого раств ора уксусной кислоты, черезкапептидамидтрифгорацетат растворяют в

1 ч растворитель отгоняют и остаток мл воды и раствор хроматографируют

тирают с эфиром. После фильтрования, колонне (3,5x52 см), заполненной

мывки эфиром и высушивания сырой про -55ионообменником на основе карбоксиметилдукт вместе со смесью этилацетат-пири- ,целлюлозы (Ватман СМ-52) с помощью

дин:уксусная кислотагвода 20:6:11 влинейного буферного зградвента, приготов-

соотношении 4:1 вносят в колонку с си-ленного из 1,5 л 0,2 М (рН 6,7) и 1,5 л

ликагелем (3, см) и хроматографи-0,6 М (рН 6,7) буферов. Фракции, содер жащве продукт, собирают, объединяют и лиофилизуют. Получают 0,151 г (39%) замешенного аминооксйкарбоновой кислотой нонадекапептид-амида. R 0,28. Содержание пептида 80%, метионин-суль фоксида 1,9%, соотношение Тир:Трп 1,05. Аминокислотный анализ: Лиз 4,5 (5); Гис 0,95 (1); Apr 1,0 (1); Сер 0,8 (1); Глю 1,0 (1); Про 1.0 (1); Гли 1,95 (2); Вал 0,95 (1); Мет О,8 (1); Тир 0,95 (1); ,0 (1). Применяемый в качестве сходного вещества защищенный, замещенный аминоок- сикарбоновой кислотой нонадекапептидамид гидрохяррйд полуг1ают следу.jiUHM образом Стадия 1. БОК-ОГли-О л. ; --3,8 г (20 ммоль) БОК-ОГли-ОН раст воряют в 5 мд диметилформамнда и дрбав ляют 4,44 мл (40 мМопь) триэтиламина и 7,8 мл (66 ммоль) бромистого бензила. Реакционную смесь нагревают 8 ч на Горячей водяной базе и эатем оставляют -прикомнатной температуре на ночь. Реак ционную смесь разбавляют 100 мл этилацетата, промывают 5Q мЛ воды и три раза 2О мл 8%HUioro jjacTBOpa гидрокарбо на та натрия. После высушивания ; эгилаце Tat DTtpiisioT и ocTafok йерекри сталлйзовывают из эфира. Получают 4,5 г (80%) : БОК-ОГли-ОБзл., т.пл, ; 79-80С. Стадия 2.Н-ОГли-01Бз л нее. 11,2 г (4О ммояь) БОК-ОГли-ОБзл растворяют с 22 Мл этилацетата и добавляют 22 мл 4 н. раствора соляной кислоты в этиладетате. Через ЗС мин реакционаую смебь упа рквают и орта ток ра тира ют с эфиром. ГНосле фильтрования и высушиваний сырой продукт перекристаллизовывают из этилацетата. Получают 5,7 г (66%) Н-ОГли-ОБзл нее, т.пл. 85-87 С Стадия 3. Трит-Лиз(БОК)гЛкз(БОК)-Лиз{БОК)-Лнз (БОК)-ОГяч-ОБзл HCgV 7,11 г (6,0 ммоль) Трйт-Лиз(БОК)-Лиз(БОК)-Лиз(БОК)-Лиз(БОК)- g раст аоряют в 36 мй диметилформамида. К охлажденному до -20 С раствору при перемешивании дрбавляют по каплям вначале 6 мл .(24 ммоль) 4 н. раствора соляной кислрты в этилацетате, а затем 0,84 .мл (7,1 мМРль) трет.-бутилнитрита Реакционную смесь выдерживают в течение 5 мин при , затем охлаждают до -2О°С и добавляют смесь из 1,45 г (6,6 ммоль) Н-ОГли-ОБзл НСЕ и 4,24м (24,6 ммоль) диизопропилэтиламина в 24 мл диМетилформамида. Реакционную Ьмесь перемешивают в течение 2 ч при температуре от --5 С и затем оставляют j при на ночь. Далее растворитель отгоняют, остаток растворяют в воде, отфильт. ровывают и промывают водой. Сырой продукт перекристаллизовывают из смеси метанол-вода ( 1:1), Получают 6,95 г (87%) Трит-Лиз (БОК)-Лиз {БОК)Лиз (БOK)(БOK)OГли-.OБзл нее. R 0,85., Стадия 4. Н-Лиз(БОК)-.Лиз(БОК)-Лиз-. (БОК)-Лиз(БОК)-ОГли-ОБзл - НСЕ. 1,87 г (1,4 ммоль) Трит-Лиз(БОК)-Лиз(БЬк)гЛиз(БЪк)-Лиз(БОК)-ОГли-ОБзл растворяют в 37 мл 80%-нРГо водйого раствора уксусной кислоты. Через 1 ч растворитель отгоняют и остаток растирают с эфиром. После фильтрования, про- MbiBkH эфиром и высушивания сырой продукт вместе со смесью этилацетат-пирийинГуксусная кислота:вода 20:6:11 в соотношении 4:1 вносят в колонку с с или- кагелем и хроматографируют. Элюаты собирают в виде фракций по 15 мл, их состав определяют посредстврм тонкрслойной хроматографии. Фракции83-97, содержа,щие чистый продукт, объединяют и рстаток растирают с эфиром, nbcrte фильтрования и высушивания растворяют в 20 мл . метанола и дЬбавляют раствор пирйдингидрохлорида, который предварительно получают из 0,22 мл пиридина и 0,22 мл концентрированной СР/ШНОЙ кислоты. Метанол отгоняют, остаток растирают с эфиром, отфильтровыВ|ают и высушйВ;ают в вакууме. Получают 0,905 г (57%) Н-Лиз(БОК)-Лиз (БОК)-Лиз (БОК)-Лиз (БОК)-ОГли-ОБзл нее. R 0,23. . Стадия б. БОК-и-ОСер-Тир-Сер-Мет лю (ОБут )чГиc-Фeн-Apг-Tpп-Гли-Лиз(БOK)-Пpo-вaл-Гли-Лиз (БОК)-Лиз (БОК)-Лиз (БОК)-Лиз (БОК)-ОГли-ОБзл НСе. 0,398 г (0,20 ммоль) БОК-ЗЗ-ОСер-Тир-Сер-Мет-Глю (ОБу т)-Гис-Фен-Арг- -Трп-Гли-ОН -нее, 0,226 г (О,20ммоль) Н-Лиз(БОК)-Лиз(БОК)-Лиз(БОК)-Лиз(БОК)-ОГли-ОБзл -нее и 0,165 г (0,90 ммоль) пентафтррфенола растворяют в 4 мл диметилформамида к раствору добавляют вначале 0,022 мл (0,20 ммоль) N-метилморфолина, а затем 0,063 г ХО,30 ммоль J дициклогексилкарбодиимида. Реакционную смесь выдерживают при комнатной температуре, дициклогексилкар- бодиимид отфильтровывают, фильтрат разбавляют эфиром, выпавший осадок отфильтровывают, промывают эфиром и высушивают в вакууме. Прлучают 0,5О2 г (82%) за.щищенного нонадекапептидамидгидрохлорида. R 0,68.

S. 65169126

Формула изобретениямере, концевые аминооксигруппы, аминоСпособ получения пептидов общей фор-обходимости концевые карбоксильные групглулыпы и карбоксильные группы боковой цепи

Н.В ОСер Тир-€вр-Мет«Глю- Гис- Фен- $защищены, отщепляют защитные группы

,| рг-ТрП Гли -ЛиЗ ПрОгВал«4ли-СЛиз Х1(1)ацидолизом с последующим выделением

где h а 3 или 4;- -целевых продуктов в свободном виде или

X в -ОЛиэОН, -1)-ОЛизОН,ОГлиОНв виде их солей, амидов или бензиловых

или нх солей, или амидов, или Сложныхзфиров.

бензиловых эфиров, отличающий- Источники информации, принятые во

с я тем, что от пептидов о0щей формулывнимание зЯри экспертизе (1), в которых г и X имеют указанные1. Э. Шредер, К. Любке. Пептиды. М..

выше значения и в которых., по крайнейМир, 1967, с. 112.

группы боковой цепи, а также в случае не