СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ д-КЕТОГЛУТАРОВОЙ КИСЛОТЫ Советский патент 1970 года по МПК C12P7/50 

Известно, что .при выращивании дрожжей рода Candida на средах, содержащих в качестве источника углерода жидкие парафины или индивидуальные алканы, образуется акетоглутаровая кислота. Однако выход продукта незначителен.

Для повышения выхода продукта предлагается использавать дрожжевые культуры, дефицитные .по тиамину, в частности Candida Ироlutica и Candida rugosa и процесс вести в ереде строго определенных количеств тиамина или 4-амино-5-окси-метил-2 - метилпиримидина. Концентрация тиамина в среде должна составлять 0,1 -1,0 мкг/л; концентрация 4-амин5 - окси - метил - 2 - метилпиримидина 0,05- 1,0 мкг/л.

Осуществляют предлагаемый способ следующим образом.

Культуру дрожжей Candida lipolutica или Candida rugosa культивируют на среде, содержащей жидкий парафин или индивидуальные углеводороды в качестве исто чника углерода, а также источники азота, фосфора, натрия, калия, микроэлементы и тиамин или 4-а:мино-5-оксиметилн2-метилпиримидин, в условиях аэрации. рН поддерживают 4,0-4,5. Продолжительность ферментации 3-7 суток.

вую кислоту олределяют IB форме 2,4-динитрофенилгидразона).

Наряду с а-кетоглутаровой кислотой в среде накапливается значительное количество рибофлавина. Полученную дрожжевую биомассу можно использовать для кормовых и пищевых целей.

Процесс интенсифицировать, проведя его в две стадии.

На первой стадии создают условия, благоприятствующие накоплению биомассы (минимальная концентрация тиамина или 4-амино-5-окси-метил-2-метилпиримидина). На второй стадии содействуют интенсивному образованию а-кетоглутаровой кислоты.

В среду можно добавлять бактериостатические вещества (полимиксин, фурацилин и др.).

Пример I. Дрожжи Candida lipolutica хранят на агаризованной минеральной среде Ридера с царафином.

Посевной материал готовят в колбах на ка чалках -на среде состава, %: (NH4)2SO2 0,3; Мг5О4-7Н2О 0,07; NaCl 0,05; Са(МОз)2 0,04; К-НРО4 0.1; КН2РО4 0,11; жидкий парафин- 0,8; вода водопроводная кипяченая - до 100.

Посевной материал (5% от количества среды) высевают на опытную среду. Ее состав, %: мочевина 0,5-1,0; MgSO4-7HjO 0,07; NaCl 0,05; Са (NOs)-0,04; KgHPO 0,0|; КН2Р04

0,l; жидкий .парафин 2,4; вода водопроводная до 100. В среду вводят тиалгин или 4-амин-50:Кснметил-2-метил:пиримидин в концентрации 0,4 мкг1л.

Процесс ведут при 28-30°С, рН 4,0-4,5, аэрации 0,25 об. воздуха (об. .среды) -мин. Продолжительность ферментации 6-7 суток.

Содержание а-кетоглутаровой кислоты з среде в конце процесса равно 21,3 ZJA, что соответствует выходу 88% от веса взятого парафина.

Одновременно вереде накапливается 8 рибофлавина. Выход биомассы составляет 2,9 г/л (:по сухому весу).

Пример 2. Посевной материал дрожжей Candida rugosa готовят по примеру 1. Опытная среда имеет следующий состав, %: (NH4)2SO4 0,3; MgSO4-7H2O 0,07; NaCl 0,05; Са(МОз)2 0,04; К2НРО4 0,01; КН2РО4 0,1; гексадекан 0,8; Na2B4O7 lOHgO 0,0087; MnSO4-7H2O 0,005; ZnSO4-7H2O 0,031; CuSO4-5H20 0,0039; Ыа2МоО4-2П2О 0,0025; FeSO4-7H2O 0,025; KI 0,01; вода бидистиллированная до 100. Концентрация тиамина ч среде 0,4 г/л.

Процесс проводят в колбах на качалках в течение 2 суток. Затем биомассу отделяют и помещают в фосфатный буфер с рН 4,0, содержащий 0,4% гексадекаиа. Все операции проводят с соблюдением мер стерильности. Прироста биомассы ;не происходит, но интенсивно идет биосинтез а-кетоглутароаой кислоты. За 12 час содержание ее в биомассе достигает 0,34 г/г биомассы.

ПрИмер 3. Процесс ведут по примеру 1, но в .присутствии антисептиков: полимиксина (5 мкг)л), биомицина (50 мкг/л) и соединений фуранового ряда (фурацилина, фуразолидона, фуразидина, 15 мкг/л).

Содержание а-кетоглутаровой кислоты 13,5 г/л.

Предмет и з о б р е т е н и я

1. СпосОб получения а-кетоглутаровой кислоты выращиванием дрожжей рода Candida на средах, содерл ащих в качестве источника углерода жидкие ларафины или индивидуальные алканы, отличающийся тем, что, с

целью увеличения выхода продукта, используют дефицитные по тиамину культуры, наприм.ер Candida lipolutica, Candida rugosa, и процесс ведут В присутствии строго определенных количеств тиамина или 4-а МИно-5-оксиметил-2-метилпирИМИдина.

2.Способ по п. 1,. отличающийся тем, что концентрация тиамина в среде составляет 0,1 - 1,0 ж/сг/л.

3.Способ по п. 1, отличающийся тем, что концентрация 4-амино-5-оксиметил-2-метилпиримидина в среде составляет 0,05-0,1 мкг/л.