СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОМАССЫ И РИБОФЛАВИНА Советский патент 1970 года по МПК C12N1/28 C12P25/00 

Изобретение относится к области микробиологического синтеза белково-витаминных веществ на основе углеводородов нефти. Известно, что получение биомассы на основе углеводородов парафинового ряда осуществляется преимущественно с использованием дрожжей, в частности Candida tropicalis. Однако такой способ имеет тот недостаток, что применение микроорганизма требует предварптельиой его адаптации к среде. Предлагаемый способ лищен этого недостатка. Это достигается за счет того, что в качестве возбудителя брожения применяют щтамм № 41 Mycoccum lactis Krassilnikov (1941), зарегистрироваиный в Институте и кpoбиoлoп и Академии наук СССР. Штамм MO 41 М. lactis выделен из рубца коровы и не чувствителен к мицетину. Отношение к кислороду. Аэроб. Температурный оптимум при росле па мясо-пептонном агаре 38-43°С, на минеральной среде с парафином 38-43°С. Температурный максимум на мясо-пептонном агаре 484; 1°С. Чем богаче среда, тем выще температурный оптимум и максимум роста. Морфология. Клетки округлой или слегка овальной формы, диаметром 0,7-1,0 як.. После 17 час роста встречаются шаровидные и лимоновидные клетки диаметром 1,8 м.к, с возрастом культуры число последних увеличивается. При высеве в свежий субатрат на поверхности образуются почки с хорошо заметным каналом между дочерними и Л1атеринскими клетками. Клетки одиночные, в неоформленных комплексах, которые легко распадаются. Размножаются делением, перешнуровыванием, почкованием. На мясо-пептонном агаре. Колонии слегка выпуклые, влажные, блестящпе, пастообразной консистенции, бесцветные. На картофельно-иеитонном агаре. Колонии с радикальными линиями. Желатина. Не разжижает. Молоко. Свертывает с подкислением среды. Сгусток 1молока в плотных глыбах, не разжижается в течение 30 суток. Крахмал. Гидролизует очень слабо. Сахара. Образует кислоты при росте на глюкозе, лактозе, ксилозе, галактозе, арабинозе; из сахарозы кислоты образует слабо. Органические кислоты. Хорошо усваивает уксусную, лимонную, янтарную и молочную кислоты. Углеводороды парафинового ряда. Хорошо растет на н-алканах с числом углеродных атомов в цепи от 15 до 22.

Образование рибофлавина. При росте на минеральной жидкой среде с пара-фйном или гентадеканом выделяет в среду рибофлавин.

Штамм № 41 М. lactis можно отнести к термотолерантиым.

На минеральной среде с иарафином способен образовывать биомассу не в меньшем количестве, чем дрожжи. Так, на минеральной среде с добавлением 1 % (но Объему) нарафина дрожжи С. tropicalis штатуш Т-20 нри культив У15аЕг1н1Йт в условиях неремешиваиня на качалке нри температуре 36°С образуют 6 мг сухой биомассы на 1 мл среды.

Иа это1т же йЙатйм № 41 М. laclis в условиях 1те|гег5:ге1Йивания на качалке нри температуре 40°С-6,3 лег cyxoiir биомассы на 1 мл среды.

По сравнению с С. tropicalis штамм Л5; 41 М. lactis обладает более быстрым ростом (36 час против 50 час при выращивании на минеральной среде с парафином на качалках, 2.80 об/мин,. Кроме того, штамм выделяет в среду рибофлавин - 20 мкг/мл. В аналогичных условиях (в средах с иарафином на качалках) Ereraotliecium asiibyii и ряда микобактерий образуют меньше рибофлавина - 8 и 2 мкг/мл.

РП оптимальной среды 7,0-7,5.

Штамм .4 41 М. lactis вполне пригоден для получения биомассы. При этом из культуральной жидкости может быть получен рибофлавин. Важно подчеркнуть, что этот микокк не требует предварительной адаптации к углеводородам иарафинового ряда.

В опытах иа среде, содержаш,ей 5,5 г NH4H2PO4, 0,7 г MgSO4, 0,5 г NaCl, 0,4 с Са(МОз)2, 0,1 г KaHPO i, 0,t г КНгРО,, 1 об. % парафина (ГОСТ 1747-64) и 1 л водопроводной воды, штамм № 41 М. lactis дал результаты, .которые приведены в таблице. В этой же та-блице приведены литературные данные, относящиеся к роду Candida (Чениго и соавт., 1967) и: .ycobacterium luteuni (Самбилов ц соавт., 1968).

Т а б л и ц а

Предмет изобретения

Применение штамма 41 Mycoccum lactis Krassilnikov (1941), зарегистрированного в Институте микробиологии Академии наук СССР, для получения биомассы и рибофлавина на основе сбраживания углеводородов иарафииового ряда.