ПРОДУЦЕНТ ПРОТЕОЛИТИЧЕСКИХФЕРМЕНТОВ Советский патент 1970 года по МПК C12N1/14 C12N9/68 C12N15/01 

.1

Предлагаемое изобретение предназначено для использования в ферментной промышленности, а именно для получения протеолитических ферментных препаратов, обладающих фибринолитическимн и тромболитическими свойствами.

Известен штамм Aspergillus terricola, продуцирующий протеолитические ферменты, обладающие фибрннолитическими свойствами.

Предлагаемый штамм Aspergillus lerricola ИНМИ Н-20 позволяет получать ферменты более высокой активности. Он получен путем ультрафиолетового облучения копидий исходного штамма Aspergillus terricola ИНМИ № 5 при дозе 12X10 эрг/мм и последующего отбора колоиий.

Предлагаемый штамм по сравнению с исходным нродунирует протеолитические ферменты более высокой активности. Фибринолитическая активность его в среднем на 70% выше, чем исходного штамма. Высокая фибринолитическая активность получена при выращивании мутанта на простой сахарозноминеральной среде (без дополнительного внесения органических источников азота), что имеет важное значение ири очистке и выделении фермента в кристаллическом состоянии.

носцы прямые, обильные, бесцветные, септированные, достигающие 750-1400 мк длины и более, от 8 до 15 мк щирины. Верхушечный пузырь почти круглый, 24-65 мк в диаметре.

Встречаются мелкие, кониднальные головки диаметром 150 мк и крупные - диаметром 220-300 мк.

Стеригмы однорядные 12-17X5-7 Л1К. Р1ногда встречаются уродливые стеригмы, короткие и тонкие 10,5X4,0 мк или более длинные 18X4,8 мк. Конидии полиморфны, круглые, овальные с шероховатой оболочкой. Наиболее часто встречаются круглые конидии 6,9-7,0 мк в диаметре.

Органическая среда. На сусло-агаре колонии круглые, темно-коричневые, пушистые, рыхлой структуры. Диаметр восьмнсуточной гигантской колонии равен 90 мм. На разбавленном сусло-агаре (3,5 Блг) конидиеобразование обильное. Край колоний белый, иушистый, не погруженный в агар. Колония с пильней поверхности серовато-кремовая, слабоскладчатая. Штамм образует склероции, особенно в старых культурах.

Синтетическая среда. На агаризованной среде Чаиека с сахарозой колонии слабоскладчатые, бархатистые, рыхлой структуры. На восьмые сутки роста при 32°С диаметр колонии равен 85-87 мм, а у исходного КОЛОНИИ изменяется с возрастом от желтого до бурого II темно-коричневого. Конидиеобразование обильное. Отличается от С.ходиого штамма более темным цветом конидий. Край колонии серовато-белый, иушистый. Контуры колонии неровные. Цвет нижней новерхности колонии изменяется с возрастом от серого, оранжевого до коричневого с фиолетовым оттенком. На иоверхности колонии образуются склероции черного цвета. Мясо-иентонная желатина (МПЖ). При выращивании на желатине образует складчатую цленку, мицелий белый, желатину разжижает нолностью. На молоке - рост в виде иленки, мицелий белый с кремовым оттенком, молоко свертывает и иентонизнрует. Пигмента в молоко не выделяет. На ломтиках картофеля - рост бархатистый, коричневый, более темный, чем у исходного штамма. Конидиеобразование обильное. Окраску субстрата не изменяет. На жидкой сахарозо-минеральной среде желтого нигмента не образует в отличие от исходного штамма. Мицелий и культуральная жидкость гриба серого цвета. Грибы выращивали глубинным методом на сахарозо-мннеральной среде следующего состава, %: сахарозы 0,72; глюкозы 0,36; KNOs 0,2; MgS04 0,123; КНаРО 1,ЗГу, микроэлементы (FeSOi, ZnS04, MnSO4) следы, рН среды 6,8. Фнбринолитическую активность культуральной жидкости оиределяли двумя методами: на нластннках фнбрина но методу Astrup и Mulertz (1952) и на экснериментально нолученных тромбах крови человека в оиытах in Adtro. Фибринолнтическая активность штамма Н-20 составляет в среднем 855 ед1мл, а активность исходного щтамма в тех же. условиях равна 496 ед/мл, т. е. активность 1штамма Н-20 на 70% выше, чем у исходного. Растворение тромба крови нод действием культуральной жидкости исходного штамма нроисходит за 4-5 час, а у щтамма Н-20 оно настуиает через 3 час. Таким образом, иредлагаемый щтамм Aspergillus terricola Н-20 обладает более активным комнлексом протеолитических ферментов, действующих на фибрин и растворяющих тромбы крови, но сравнеиию с исходной культурой. Ферментативные свойства штамма Н-20 стойко сохраняются при иересевах и храненнн- культуры на 3,5 Блг сусло-агаре в течение двух лет. Предмет изобретення Штамм Aspergillus terricola ИНМН Н-20 - продуцент нротеолнтических ферментов. Морфология. Гифы нрямые или слегка извитые, шириною 5-8 мк. Конидиеносцы ирямые, обильные, бесцветные, сеитированные, длина нх достигает 750-1400 мк, ширина 8-ь15 мк. Верхушечный нузырь круглый диаметром 24-65 мк. Встречаются мелкие конидиальные головки диаметром 150 мк и круиные- 220-300 мк. Стеригмы однорядные 12-17X5-7 мк. Конндии круглые, реже овальные с шероховатой оболочкой, диаметром 5-8 мк. Синтетическая среда. На среде Чанека с сахарозой колонии бархатистые, слабоскладчатые, рыхлые, цвет верхней иоверхности колоннй изменяется с возрастом от желтого до бурого и темно-корнчневого. Край колонии серовато-белый, пушистый. Контуры колоннй неровные. Цвет ннжней новерхности изменяется от серого, оранжевого до коричневого с фиолетовым оттенком. Штамм образует склероцнн черного цвета. Диаметр колонии на восьмые сутки роста достигает 85-87 лг,«. Органическая среда. На сусло-агаре колонии круглые, темно-коричневые, нушистые, рыхлой структуры. Край колоний белый, пушистый, не погруженный в агар. Обратная сторона колонии серовато-кремовая. Л4ясо-пептонный желатнн образует складчатую нленку, мицелий белый, желатнн разжижает. На молоке - рост в виде пленки, мицелий белый с кремовым оттенком, молоко свертывает и иентонизирует. Нигмента в молоко не выделяет. На ломтиках картофеля - рост бархатистый, коричневый. Конидиеобразованне обильное. Окраску субстрата не изменяет.