ВСЕСОЮЗНАЯ ;ОАТЕйТНО-ТНХШ'^ЕЗНАИ; Советский патент 1971 года по МПК C12N9/82 

Изобретение относится к области химии ферментов и представляет собой способ получения новых, неописанных в литературе частично дезамипированных L-аспарагиназ, которые могут найти применение в медицине. Новые соединения имеют лучшие характеристики по сравнению с обычными L-аспарагиназами.

Дезаминирование иептидов азотистой кислотой является широко известкой реакцией.

Предлагаемый способ дезаминирования Lаспарагиназы в литературе не описан и заключается в том, что L-аспарагиназу в растворителе иодвергают реакции обменного разложения с азотистой кислотой или соединениями, образуюшими азотистую кислоту, обычно в нрисутствии растворимого в воде нуклеофильного акцептора. В качестве соединений, образующих азотистую кислоту, наиболее применимы нитриты щелочных и щелочноземельных металлов, изоамилнитрит и окислы азота. Реакцию проводят в присутствии воды при рН нредиочтительно около 5. Возможно добавление в реакционную среду органических растворителей. Лучше всего работать в области температур от О до 5°С. Степень дезаминирования легко регулировать посредством выбора температуры реакции, причем последнюю обычно заканчивают, добавляя мочевину или устанавливая рН выше 7.

Пример 1. 10 г L-асиарагиназы (степень чистоты около 180 ед1мг субстанции) растворяют в 70 .мл воды, доба15ляют 500 .-./г пптрита натрия и охлаждают до 0°С. После охлаждения прибавляют 1 уксусную кислоту до рИ равного 5 и смесь перемешивают приблизительно 12 час при 0°С. При интенсивном вспенивании вследствие начинающегося образования азота рекомендуется добавлять в реакционную смесь несколько капель трибутилфосфата. Для фракционированного осаждения смешанного с мочевиной раствора в реакционную смесь добавляют 40 об. % водного раствора полизтиленгликоля (мол. вес 1550), состоящего из 50 вес. ч. полиэтиленгликоля и 50 вес. ч. воды, размешивают 30 лшн. Образовавшийся осадок отделяют на охладительной центрифуге, раствор выбрасывают. Полученный осадок диспергируют в ледяном ацетоне и после центрифугирования сушат в вакууме при температуре около 25°С. Обычно достаточио . создаваемого водоструйным насосом, при необходимости ИСНОЛЬЗОвать масляный насос. Полученная частично дезаминированная L-аспарагиназа содержит еще 90% первоначального аминного азота. Выход 80-90% от теории.

Аналогично получают частично дезаминированные соединения, приведенные в таблице.

Сравнимые результаты монсно получить, если реакцию обменного разложения проводить в присутствии растворителя.

Выход 80-90% от теории.

Пример 2. 10 г L-аспарагиназы (степень чистоты около 180 ед1мг субстанции) растворяют приблизительно в 100 мл воды, добавляют 1 г нитрита натрия, 1 г ацетата натрия II 500 мг салициловой кислоты, охлаждают раствор до 4°С и после охлаждения устанавjiiiBaioT с помощью IN уксусной кислоты рН 4,8. Смесь выдерживают приблизительно 14- 16 час при 4°С. Затем в раствор добавляют 1 г мочевины, нагревают его до комнатной температуры и после этого проводят фракционированное осаждение реакционной смеси, добавляя 40 об. % водного раствора полиэтиленгликоля (мол. вес. 1550), состоящего из 50 вес. ч. полиэтиленгликоля и 50 вес. ч. воды. После 30 мин стояния осадок отделяют на охладительной центрифуге, диспергируют в ледяном ацетоне и снова центрифугируют, остаток высущивают в вакууме при комнатной температуре.

Выход 80-90% от теории.

Пример 3. Поступают, как в примере 1, только вместо салициловой кислоты добавляют 100 мг фенола. Пример 4. Поступают, как в примере 1,

но вместо салициловой кислоты добавляют 300 мг сульфонсалициловой кислоты.

Предмет изобретения

1. Способ получения частично дезаминированной L-аспарагиназы, отличающийся тем, что L-асиарагиназу подвергают реакции обменного разложения с азотистой кислотой или с соединениями, образующими азотистую кислоту.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что реакцию проводят в присутствии растворимого в воде пуклеофильного акцептора.