СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РУБОМИЦИНА Советский патент 1972 года по МПК C12P1/06 

Изобретение относится к способам получения айтибиотиков, в частности рубомици.на.

Известен опособ получения рубомицина путем ферментации Actinomyces coeruleorubidus. Указанный опособ не обеспечивает получение препарата достаточно высокого качества с удовлетворительным выходом.

С целью повышения ;вы1хода и качества рубомици-на мицелий экстрагируют органическим растворителем, например ацетоном, при рН около 4,0. Для очистки антибиотика производят экстрагирование, например, хлороформом при рН 8,8-8,9 с последующим подкислением экстракта до рН 3,5-3,9. Разделение рубомицина а фракции Л, В и С производят хроматографированием на колонке с водной кремниевой кислотой с последующииМ элюированием органическим растворителем.

Компонент А выделяют смесью хлороформа, бензола и метанола в соотношении 100: 10:5. Компонент В выделяют смесью тех же растворителей, но взятых в соотношении 100 : 10 : 15. Компонент С выделяют метаноло:м.

Пример. 20 кг мицелия, полученного фильтpo вaниeм 250 л культурадьной -жидкости, экстрагируют двойным количест1вом ацетона, подкисленного соляной кислотой до рН 4,0. Экстракцию ведут в течение lr:4flfc нриг перемешивания,после чего экстракт отделяют

и повторяют экстракцию одним объемом ацетона, содержащего 10% воды. Объединенный экстракт нейтрализуют до рН упаривают в вакууме и фильтруют, промывая осадок два

,раза по 0,5 л воды, подкисленной до рН 4,0

соляной кислотой. Фильтрат и промывные

.воды подш,елачивают 10%-ны,м едким натром

до рН 8,9 и три1жды экстрагируют хлороформо-м порциями по 4,4, 2,2 и 2,2 л. Экстракт

промывают водой, сушат над сернокислым натрием и упаривают в вакууме до 100 мл. К остатку добавляют 50 мл безводного ацетона, а затем по каплям при перемешивании 0,5 н. раствор хлористого водорода в ацетоне до рН 3,9. Затем добавляют еще 50 мл ацетона, образовавшийся осадок отфильтровывают, промывают его небольшим количеством безводного ацетона и сушат в вакуумзксикаторе.

Получают 15,6 г рубомицина, содержащего 30% компонента А, 28, комлоне;1та В и 41,5% компонента С. Из маточного раствора после отделения осадка упари ванием в до небольшого объема с последующим

вливанием в десятикратный объем смеси серного и петролейного эфира выделяют еще 2,2 г препарата.

ла и метанола (100: 10:5) и наносят на ;;олонку с водной кремниевой кислотой (250 г кремниевой кислоты с размером частиц 0,1 - 0,25 мм суспендируют в хлороформе и вносят в колонку диаметро.м 4 слг). Элю-цию сначала проводят той же системой растаорителей в количестве 1750 мл со скОростыо 40- 48 мл/час м , собирая фракции по 500 -«л. Затем продолжают элюцию 1700 мл смеси хлороформа, бензола и метанола при соотношении КО.М1ПОН6НТОВ 100 : 10 : 15, собирая фра кдии по 100 мл. Оставшийся па колонке компонент С злюируют 1100 мл этанола.

Полученные фракции анализируют методо,м бумажНой хр01матографии в системе ацетон, бензол, вода при соотношении 12:3:2 и однородные фракции объединяют. Смесь фракций, содержащих ко шонеит А, упаривают в вакууме до 60 мл и осаждают нрепарат десятикратным объемом лётролейного эфира. Выход 5,38 г. Фракции, содержащие компоненты В и С, упаривают в вакууме досуха, растворяют остатки соответственно в 60 и 75 мл метанола и проводят осаждение пятнадцатикратны1м объемом этилового эфира. Выход 5,355 г компонента В и 7,283 г компонента С.

П р е д М е т изобретения

1.СносО;б получения рубомицина путем фер-ментации Actinomyces coeruleorubidus, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода и качества целевого продукта, мицелий экстрагируют органическИМ растворителем, например ацетоном, при рН около 4,0 антибиотик очищают экстрагированием, например, хлороформом нри рН 8,8-9,0, экстракт подкисляют до рН 3,5-3,9, далее рубомицин разделяют хр01матографироваНием на колонке с водной кремниевой кислотой и элюируют ко мпоненты А, В и С органическим растворителем.

2.Способ по п. 1, отличающийся тем, что ко.мпонент Л выделяют смесью растворителей хлороформа, бензола и метанола, взятых в соотношении 100 : 10 : 5.

3.Способ по п. 1, отличающийся тем, что компонент Б выделяют смесью растворителей хлороформа, бензола и метанола, взятых в соотнощении 100 : 10 : 15.

-- Г -.-

4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что компонент С выделяют метанолом.