СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИБИОТИКА — ГЛИКОЗИДА ВАРИАМИЦИНА Советский патент 1971 года по МПК C07H5/04 

Изобретение относится к получению новых антибиотиков.

Предлагаемый способ получения нового антибиотика - гликозида вариамицина заключается в том, что культуру Actinomyces olivovariabilis sp. nov. выращивают на среде, содержащей соевую муку (2%), крахмал (2%), глюкозу (2%), NaCI (0,5%), СаСОз (0,5%), (NH4)2S04 (0,4%) и К2НР04 (0,04%), продукт экстрагируют органическим растворителем при рН 2-4, например этилацетатом, осаждают его органическим растворителем, например гексаном, методом хроматографии на силикагеле и целевой продукт выделяют обычным способом.

Пример 1. Процесс глубинного биосинтеза антибиотика осуществляют культивированием Actinomyces olivovariabilis sp. nov. при 26-28°C на среде следуюп его состава, %: соевая мука 2, крахмал 2, глюкоза 2, NaCl 0,5, СаСОз 0,5, (NH4)2S04 0,4 и К2НРО4 0,04 в аппаратах емкостью 100 л. Длительность процесса ферментации 130-140 час. Мицелий культуры отфильтровывают и 40 .4 нативного раствора подкисляют 10%-ной соляной кислотой до рН 2-2,5 (по потенциометру).

в вакууме до 0,1 первоначального объема. Концентрат экстрагируют трижды 5%-ным водным раствором бикарбоната натрия (I, 0,5 и 0,3 л). Объединеиный содовый раствор подкисляют 10%-ной соляной кислотой до рН 2-2,5 (потенциометрически), после чего экстрагируют трижды этилацетатом (0,4 л и 2X0,2 л). Объединенный этилацетатный экстракт промывают водой, сущат над Na2SO.i, упаривают и осаждают антибиотик десятикратным по объему количеством гексана. Выпавщий осадок отфильтровывают, промывают гексаном и сушат.

0,5 г неочищенного вариамицина, растворенного в смеси хлороформ-метанол (9: 1), вносят в колонку (15X700), заполненную 30 г силикагеля, не содержащего ионов железа. Проявление и элюцию ведут той же смесью.

Анализ полученных фракций проводят методом тонкослойной хроматографии в той же системе растворителей.

Фракции, содержащие вариамицин, объединяют, упаривают в вакууме досуха, растворяют в небольщом объеме этилацетата и наносят

на пластинки с силикагелем. После высущивания хроматографируют в описанной выще

и переосаладением из этилацетата гексаном получают хроматографически чистый вариамицин. Антибиотик имеет брутто-формулу С52Н7бО24 и выделен в виде желтого аморфного норошка, легко растворимого в спиртах (МеОН, ЕЮН) и сложных эфир ах (ЕЮАС), но плохо растворимого в воде, с т. пл. 162- 165°С (с разл.). Найдено, %: С 57,90; Н 7,02.

С52Н7бО24,

Вычислено, %: С 57,56; Н 7,02.

Эквивалентный вес, определенный титрованием 0,1 Н. раствором NaOH в среде метанолбензол, 1073, выч. для С52Н7б024 1084, 49±2°С (с 0,5 ЕЮН), 230, 280, 317, 330 (плечо), 412 ммк, Е{- см 1740, 3800, 595, 800 (Уф-спектр снят на спектрофотометре СФ-4А). v-вазелинового масла 3400-3450, 1720, 1635, 1580, 1520, 1180, 1070, 1010, 910, 840 еж(ИК-сиектр снят на спектрофотометре UR-10, Leiss).

Пример 2. Вариамицин получают до стадии хроматографической очистки по примеру 1. Далее 0,5 г неочищенного антибиотика, растворенного в смеси бензол-ацетон (1:1), вносят в колонку (15X700), заполненную 30 г силикагеля марки «водная кремневая кислота. Проявление и элюацию ведут той же смесью. Затем антибиотик очищают, как описано в примере 1.

Предмет изобретения

Способ получения антибиотика - гликозида вариамицина, изомера митрамицииа, состава С52Н7бО24, состоящего из агликона хромомицинона и остатков трех дезоксисахаров, два из которых идентичны олиозе и оливозе, отличающийся тем, что, культуру Actinomyces olivovaribilis sp. nov. выращивают на среде, содержащей основные источники углерода, азота и минеральные соли, продукт экстрагируют при рН 2-4 органическим растворителем, например этилацетатом, осаждают его органическим растворителем, иапример гексаном, очищают методом хроматографии на силикагеле, и целевой продукт выделяют обычным способом.