Способ получения 4-дезацетоксивинбластина или его солей Советский патент 1979 года по МПК C07D519/04 A61K31/475 A61K35/70 

тельно сульфатой дииндоалкалоидов, в органическом растворителе, желател йо в ацетбне или С, -С -алифатическом спирте, лучше в метаноле. Растворение проводят при , предпочтительно при комнатной температуре. Для получения оснований дииндоалкаЛоидов к раствору дрбавляют основа ние, например моноэтиламин, диэтиламин или пиридин; Образующееся основание лейрозина при выпадает в осадок. Дйя более полного отделени лейрозииа смесь можно охладить до . Лейрозин отфильтровывают, пройавают тем же растворителем, который был использован для растворения солей алкалоидов, и высушивают. Сырой Лейрозин может быть очищен известным способом, например перекристаллизацией, и/или переведён в соль, предпочтительно та сульфат. Полученный после отделения основания лейрозина маточный раствор упа ривают при пониженном давлении, остаток растворяют в органическом растворителе, желательно в углеводороде бензольного ряда, например в бензоле, толуоле или ксилоле, но лучше всего в бензоле, причем сульфат примёйяемого для получения оснований дииндоалкалоидов основания (монозтип амина, диэтйламина или пиридина) выпадает в осадок. Сульфат о.тфильт| овывают, экстрагируют воДнЫ фосфатным буфером с рН 3,7-4,3. ОбъеДиненйые кислые водные фазы яодкисГ1яют кислотой, желательно фосфорной до рН 3,5-4,1, экстрагируют дихлорйетаном, объединенные органй чёскйе фазы высушивают над безводньм сульфа том натрия. Остаток после упариваний содержит винбластин, который може быть яерёведё1Н в соль, жел тельно в сульфат. . К водной фазе добавляабт основание преимущественно хлорид аммония, до рН 7,5-10, полученный водный щелочной раствор экстрагируют несмешиваю вдамсй с водой органическим растворри телем, желательно дихлормётаном или хл дооформом, и объединений о| ганические фазы упаривают. Остаток посл упаривания, содержащий вийкристин. N-ДезМетилвинбластин, небольшое количество винбластйна и 4-деэаС(ё оксивинбластина форкиилирую емёсЬю |4урав| инрй кислоты и уксусного анг гидри}х а. При этом содержащийся в см си алкалоидов Н-Дёзметилвинбластин количественно переходит в винкристи Затем реакционнуй смесь разбавляют 5-15-кратным, лучше. 10-кра ным, кол чеством вода и доводят рН до 7,5-10 с помощью щелочи. . . .111влочной раствор экстрагируют не смешивающймся с водой растворителем предпочтительно углеводородом бензольного ряда или хлорированным углеводородом, например ..енз&лрм,тоуолом, ксилолом, дихлорметаном или хлороформом, желательно бензолом. Объединенные экстракты упаривают при пониженном давлении, остаток, содержащий винкристин, винбластин и 4-дезацетоксивинбластин, растворяют в органическом растворителе, например в смеси углеводорода бензольного ряда и хлорированного углеводорода, желательно в смеси бензола и хлороформа, и дииНдоалкалоиды разделяют с помощью хроматографии на частично дезактивированной окиси алюминия. В качестве элемента обычно Используют смесь бензола и хлороформа в ступенчато изменяемых колйчест вах. Полученные фракции могут быть идентифицированы с помощью тонкослойной хроматографии. Фракции, содержащие одинаковые алкалоиды, объединяют. Переработку фракций, содержащих винКристин и винбластин, осуществляют известным способом. Фракции, содержащие 4-дёзацетоксивинбластин, объединяют и упаривают при пониженном давлении, остающийся сырой 4-деэацетоксивинбластин очищают перекристаллизацией или переводят в соль. Пример 1. Получение сырого 4-дёзацетоксивинбластина. 50 г неочищенной смеси сульфатов Дииндоалкалоидов растворяют при комнатной температуре в 300 мл метанола и при перемешивании добавляют 13 мл диэтйламина, охлаждают до и выдерживают 1 ч при этой температуре. Кристаллы отфильтровывают, промывают небольшим количеством метанола и 1аысушйвают в вакууме. Получают 6,4 г сырого основания лейрозина, что составляет около 90-95% от общего содержания лейрозина в исходной смеси сульфатов дииндоалкалоидов. Сырой лейрозин может быть очищен пере;кристаллизацией или переведен известным способом в сульфат. Фильтрат упариваюТ при пониженном давлении досуха и остаток растворяют в 2500 мл бензола-, наблюдая выпадение в осадок сульфа адиэтйламина, который отфильтровывают, промывают небольшим количеством бензола и используют для регенерации хшэтиламина. Бензольный фильтрат экстрагируют мл водного фосфатного буфера jc рН 4,0 t 0,1 (10%-ный водный раствор первичного кислого фосфорнокислого натрия, к которому добавляют 1 н.фосфорную кислоту до рН 4,0±0,1). Полученные при экстракции водные фазы объединяют, подкисляют 1 н.фосфорной кислотой до рН 4,OtO,l и экстрагируют 4 X 2500 мл дихлорметана. Органические фазы объединяют, высушивают над безводным сульфатом натрия W упаривают досуха при пониженном давлении. Получают 25 г винбластйна, который может быть без дальнейшей 5 очистки использован для получения винкристина полусинтетическим спосо бом . 25 г винбластина растворяют в 80 мл метанола и прибавляют 0,3 об, ный раствор серной кислоты в гтанол до рН.5,0. При стоянии из раствора выпадает кристаллический осадок сул фата винбластина, К водной фазе после экстракции дихлорметаном добавляют концентриро ванный раствор aivBvmaKа до рН 8,5-9, и экстрагируют 4 х 800 мл хлороформ Экстракты объединяют, высушивают над безводным сульфатом натрия и фильтруют. Фильтрат упаривают при пониженном давлении и аморфный остаток смеси алкашоидов (В г) растворяют в смеси 45 мл муравьиной кислоты и 11 мл ук сусного ангидрида, выдерживают 515 мин при комнатной температуре, разбавляют 10-кратным количеством охлажденной до 5°С дистиллированной воды, добавляют концентрированный раствор аммиака до рН 8,5-9,0 и экст рагируют 4 X 800 мл бензола. Бензойьные фазы объединяют, упари вают, аморфный остаток смеси алкалои дов (6,9 г) растворяют в 42 мл смеси бензола и хлороформа (1:1) ипропускают через колонку (диаметр 4 см) с суспензией окиси алюминия (активность (у - Y , 345 г) в смеси бензола и хлороформа (9:1) . Вначале через колонку пропускают смесь бензола и хлороформа (9:1) и отбирают фракция по 100 мл Отдельные фракции исследуют методом тонкослойной хроматографии (окис алюминия на алюминиевой фольге, элюент - смесь 100 мл бензола, 50 мл хлороформа и 7,5 мл диэтиламина). Фракции 3-10, содержащие 4-дезацетоксивинбластин, объединяют и упсфивают при пониженном давлении, получая 1 ,7 г неочищенного 4-дезацет оксивйнбластина. . Фракции 11-36 элюируют смесью бен зола и хлороформ а (4:1) и идентифицируют компоненты фракций методом тонкослойной зфоматографии (см.выше) Фракции 11-19 объединяют и упаривают при пониженном давлении, получая 0,6 г смеси винбластина и 4-дезацетоксивинбластина (1:1), которую можно разделить на отдельные компоненты. Для этого растворявот остаток посг ле упаривания,в смеси бензола и хлороформа (9:1) и гфопускают через колонку, заполненную суспензией окиси а миния (активностьW-V) в смеси бензола и хлороформа (9:1). Получают 0,18 г винблаотина и 0,20 г 4-деэаце оксивинбластйна. Фракции 20-24 объединяют и упаривают при пониженном давлении. Остато содержит 0,9 г винбластина. 40 В фракциях 25-36 содержится небольшое количество (0,3 г) 4-дезацетоксивинбластина. Остальные фракции (25-36) элюируют смесью бензола и хлороформа (1:1 Упариванием объединенного элюата при пониженном давлении получают1,7 г винкрис- йнй. Пример 2. Очистка 4-дезацетоксивинбластина. 1,7 г неочищенного 4-дезацетоксивинбластина растворяют в 25 мл смеси метанола и вОды (З) охлаждают до и выдерживают при этой температуре в течение 16 ч. Кристаллы tтфильтровывают, промывcUOT 3-4 мл вьаиеуказанной смеси метанола и воды, охлаждённой до 5 С,к высушивают. Получают 1,3 г 4-дезацет.оксивинбластина, 1- птт ап - . г 1 эти,-, , т.пл. 90-193С; (Л (с 1, хлороформ). Вычислено,: С 70,19; Н 7,50; N 7,44; О 14,97. СддНзбМ О,. Найдено,%j С 69,85; л 7,52; N 7,23; О 14,97. Массовое число 4-дезацетоксивинбластина (), измеренное по величине пика ионизированных молекуЛ, на 58 массовых единиц меньше,чёМ массовое число винбластина (т/е - 810). Разница соответствует массе ацетоксигруппы. . Оба дииндоалкалоида состоят и велбаминовой и индолиновой частей. Так как массовые числа, характерные для велбакв новой части и для пика основайия йелбаминоврй части, имеются ив масс-спектре деэацетоксивинбластина (.5, соответственно т/е 1;э4), то отдйда следует, что в индолиновой части упомянутая ацетрксигруппа отсутствует. На основании характера расщепления линий массспектра ,l35,224) можно предположить, эта ацетоксигруппа при образовании 4-Дезацетоксивинбластйна отщепляется от четвертого атома углерода винбластина. В ЯМР-спектре 4-дезацетоксивинбластина Отсутствует гшк 8- 2,09 м.д., характерный для 4-ацетоксигруппы, ко -ррый присутствует в ЯМР-спектре вин.бластина.. ЯМР-спектр 4-деэацетоксивинбластина (& }, м.д. J 2,73 (N-метил), 3,60 (харбйметокси), 3,81 (ОСН., связанная с ароматической группойГ, 3,85 (карбойетркси). Приме р 3. Получение сульфата 4-дёзацетокск1эинбластина. 1,1 г неочищеннОРб 4-дезацетаксивйнбластина разбавляют 1,25%-ным сггартрйам раствором серной кислоты о рН ,5 и В ьшерживают 2 ч при 5 С. Криста рты отфильтровывают и промыват 2-3 мл охлажденного до этаноа. ,Получают О,95г сырого сульфата -ДёзацбтрксиВ1ИНбластина, который

растворяют в 25 мл метанола, разбавляют 1т iauiefpFaiV прбмывают 2-Т Ш рзслажденного до ацетона и высу«яивают, получая 0,83 г очищенного сульфата 4-деэацвтоксивинбластина,

toL ° 29,0 (с 1, метанол).

- - - .

Формула изобретения

Способ получения 4-дeэaцeтokCйвинбла стина или его солей из растения Vinca rosea L, от л и ч а ю щ и и с я тем, что, с целью повышения ка«1ества цёлево го продукта из смесей солей яииндоалкалоидов, содержащихся в вьвцёук азан ном растении, вьшел;пот основания динндоалкалоидов, отделяют от раствора смеси оснований дйиндоалкалоидов выпадающий в осгщок винлейрозин, растворяют в органичёскбм растворителе остаток, получённы:й : упариваниемматочного раствора, с последующей экстракцией полученного органического раствора водным фосфатным буфером с рН 3,7-4,3 и зкстракцйей отделенной кислой водной фазы дихлорметаном и отделением органической фазы содержащей основное колйгчество винбластинар от водной фазы, содержащей остальные динидоалкалоиды после чего рН водной кислой фазы доводят до 7,5-10 и полученный водный щелочной раствор экстрагируют дихлорметаном, упаривают органическую фазу содержащую наряду с N-дезметилвинбластином, винкристином и винбластином целевой продукт, остаток после Упаривания подвергают формилированию с помощью муравьиной кисдоты в присутствий уксусного айгидфида, после чего рН формилированной смеси доводят до 7,5-10 с помощью щелочи, водный щелочной раствор экстрагируют бензолом или дихлорметаном/ экстракт упаривают и остаток после упаривайия разделяют с помощью хроматографии на частично дезактивированной ОШСЯ алюьшния, после чего целевой продукт выделяют в свободном вйд или в виде соли.

Источники информации, принятые во вййманйе йри экспертизе

1. Vinca a katoicls XXXY Desaceto xyvinbtastine - a new Minor Alkaloid from Vinca rosea. L. N. Neiiss, A,J. Barhess, Huckstep, Experientia. 31/1, 18-19 (1975) .