СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ МОНОГАЛАКТО- ЗИЛДИГЛИЦЕРИДА, ДИГАЛАКТОЗИЛДИГЛИЦЕРИДА И СУЛЬФОЛИПИДА В ЛИПИДОПИГМЕНТНОЙ СМЕСИ Советский патент 1972 года по МПК G01N7/04 

Изобретение относится к аналитической хй мии нриродных веществ.

Известен снособ количественного онределения моногалактозилдиглвцерида, дигалактозилдиглицернда и сульфолинида нутем онределения в них галактозы носле очистки от примесей на колонках с адсорбентом и разделения на нластинка.х с тонким слоем силикагеля с носледующими проявлением хроматограмм опрыскиванием растворами (З-нафтола и определением количества по площади пятен. Однако известный метод обладает недостаточными специфичностью и точностью.

С делью пОВышения точности и избирательности анализа, предлагается способ количественного определения указанных соединений в липидопигментной смеси путем пропускания их через колонки с адсорбентом, разделения на пластинках с тонким слоем силикагеля в токе растворителя ,и проявления хроматограмм опрыскиванием раствором реактива молибденовокислого аммония с последующим определением количества липидов по площади пятен.

Пример. Липиды экстрагируют из листьев картофеля, отмывают от нелипидных загрязнений и фракционируют на колонках ДЭАЭ-целлюлозы. Растворители выпаривают, ЛИПИДЫ растворяют в хлороформе -и 0,01- 0,05 мл раствора наносят на пластинки с тонКИМ слоем силикагеля КСК. Липидную смесь разделяют в системе хлороформ - метанол - 7 н. МП4ОП (65 : 30 : 4 но объему) в восходящем токе растворителей при комнатной температуре, пластинки опрыскивают реактивом, приготовленным следующим образом.

16 г молибдена аммония растворяют н 120 мл воды (раствор 1), после чего к 80 мл раствора 1 добавляют 40 мл концентрировпнной НС1 и встряхивают 30 мин с 10 мл ртути. Ртуть отделяют фильтрованием и к оставншйся части раствора 1 добавляют 200 л. концентрированной H2SO4. Фильтрат после отделения ртути и охлажденную смесь доводяг

водой до 1 л. Обработанные реактивом хроматограммы оставляют на 20-30 мпн при комнатной температуре. В течение этого срока белый фон пластинок превранитется в синий, на котором моногалактозилдиглинерид,

дигалактозилднглицерид и сульфолипнд проявляются в виде белых пятен.

Количественное определение ведут, строя предварительно калибровочные графики в координатах плон1.адь пятен - количество лнпидов (в микромолях) после разделения н обработки смесей с известным содержанием липидов.

вырезанных из кальки пятен на аналитических весах.

В пределах 0,1 -1,5 мкмоль концентрадия гликолипида пропорциональна площади пятен, чувствительность метода 0,05 мкмоль, точность ±4,2%.

Предмет изобретения

Способ количественного определения моногалактозилдиглицерида, дигалактозилдиглицерида и сульфолипида в липидопигментной

смеси путем пропускания их через колонки С адсорбентом с последующими разделением на пластинках с тонким слоем силикагеля в токе растворителя и проявлением полученных хроматограмм путем опрыскивания их проявителем с последующим измерением полученной при этом площади пятен, отличающийся тем, что, с целью повышения точности и избирательности анализа, в качестве проявителя хроматограмм используют раствор реактива молибденовокислого аммония.