Изобретение относится к области ми;К|р.обиологии и может «айти применение при идвнт1ифи1кащш и диф фаренциальной диатностике энтомопатогенных крвсталлообразуюЩих бактерий, напольэуемых при прюмышленHOiM л|роиз1ВОдств е ба1Ктер1И1альных инсектицидов.
В настоящее В1ремя серологическую диагностику ;вариететс1В бактерий группы thuringiensis проводят при .ощи реакции флагелляр«ой а1ЛГЛют1И|наЦ1И1И, ословаякой на метоа-ах, разра.ботаиных фра1Н:цузскИ1ми учеными Баржак и Бонфуа. Эта реакция заключается в воз|дей|отвии п-а оуюпенз1ию исследуемых бактерий агглютинирующими моносьиворотками к Н-а.нтигену, каждая из которы.х имеет специфики ость к от(дельному вариетету.
Получение моно:сы1воротак пр|ОизБОДят раздельной иммуиизацией роликов многократными П1рогреосирующи1ми доза.ми суспенза-ш бактерий каждого вариетета груииы Вас. thuringiensis и паслещующИ1М пфицанием сыворот|кам селективных . Селективные свойства cbiBiOpOTKa-M пр;иш,ают методом насыщения - осаж1ден1ием общих антител бактериальной с-успензией ва|риетето1в. Бактериальные суюпензии (|Суспензи и Н) штаммов каждого вариетета получают обработкой их формалииом, т. е. разрушением осм.ати-ческих групповых антигенов. Для получения качестiBBHiHbix результатов реакции агглютинации необходи1мым условием в получении бактериальных суспензий Я1вл1яется предварительное селекцианирование культучр по цризнаку большой мобильности в проб1И1рках Кредки.
Однако этим апоообо.м диагностики невозможно дифферен|ЦИ|р01вать все узкие таксоноЛШческие группы Bacillus thuringiensis no их имадунологичеакой опецифичиости в связи с исп ол ьз ов аии ем ф л.агелл яриой м о носывор отки, полученной под воздействием ограниченного coiCTaiBa антигенных факторов: исследователи де Баржак и Бонфуа отнесли вариететы Вас.
thuringiensis var dendrolimus и Вас. thuringiensis var. sotto к одному и тому же чегверто.му серотипу, а вариететы Вас. thuringiensis var subtoxicus и Bacillus thuringiensis var entomo cidus - к шестому серотигсу, несмотря на то, что покультура.тьно- биохимичеаким признажа1м они отнесены эшпми ученьгми к самостоятельным вариететам. Кроме того, этим способОМ нбвозможио проводить экспрессреакции на предметном стекле ввиду о.бразования в популяции бактерий Н-форм, приводящих к спонтанной агглютинации. Проведение диагностической реакции связано с больши.ми затратами времени на селекционирование исследуемой культуры по признаку большей МОб5 ЛЬНОСТИ.
Цель изобретения - диффереН;ЦИ1ация бактерий ПО более уэким тейсономическим п-риэнаюам.
Это достигается получением я рецип и тирующих мо1иасы1во1р.оток к отдельным вариететам Bacillus thuringiensis. Преципитирующие моHocbiiBOipiOaiKH получают удалением гетеролог-ичеаких антител из нати.вных сьивороток кроликов, гишериммунизерованных а1нти генамк бактерий типовых ва риетегав, а антигены получают ультраз1ву«оюй дезинтилрацяей клеток.
Применение в диа-гностике «реципи-тирующих моносывороток позволяет использовать рреакщию двойной диффузии в геле, благодаря чему результаты стаиовятся известны через 1-2 дня 1И имеют четко выраженные xaipaiXTeристики, документжруамые в виде фотопр:аф яй и зарисовок или могут сохраняться в виде постоянНОГо препарата. Цраменение в диагностике метода Оухтерлони, особенно при использовании вммуноэлектрофореза, поз)воляет получить информацию об антигенеой структуре вариететов исследуемых бактерий, а применение красителей и гистохимических методоз анализа - химическую П1р1И1ро(ду отдельных компонентов антигена.
Используя предлагаемый способ диагностики с помощью преципитирующих моаосывороток, удалось подтвердить таксономическую новизну группы диких щтаммов и отнести их к новому вариетету asiae - mediae sp. nova, которые ранее идентифицировались с 5 культурой Bacillus thuringiensis var thuringiensis Berliner.
П ip e Д M e т изобретения
Способ серологического диагностирования бактерий группы Bacillus thuringiensis, включающий воздействие па их антигены моносыворотками, имеющими специфичность к отдельным вариететам и последующую регистрацию результатов, отличающийся тем, что, с целью дифференциации бактерий по более узким таксономическим группам, в качестве моносывороток берут Преципитирующие сыворотки, полученные гипериммуиизацией лабораторных животных, в частности кроликов, антигенами бактерий типового штамма, с последующим удалением из сыворотки гетерологических аптител путем истощения антигенами других вариететов, а антигены исследуемых
5 бактерий и типовых штаммов готовят посредством выращивания культур обычными приемами с дальнейшим разрушением клеток, папример, ультразвуком.
