ШТАММ Arthrobacter simplex ИНМИ-6 ПРОДУЦЕНТ АЦЕТИЛХОЛИНЭСТЕРАЗЫ Советский патент 1973 года по МПК C12N1/20 C12N9/18 

1

Изобретение относится к области ,гик:робиолотии и Касается штамма Arthrobacter simplex .

Известен шта. Pseudomonas fluorescens 11150, продуцирующий а-цетилхолинэстеразу, активность .которого после 5 суток культ1 ;вирования на три птичеоком бульоие составляет 0,8 ед.

Однако «звест1ный штамм сиёнезируст ацетилхолинэстеразу в небольших количествах.

Цель изобретения - получение штамма с более ВЫС01КОЙ ацетилхолииэстеразиой 2,кт;;зностью.

Псютавлениая цель достигается тем, что предложен штамм Arthrobacter simplex ИНМИ-6, проду:цируюш,ий ацетилхолилзстераЗу, у которого бесспоровые неподвижные палоч)ки размером 2,0-4,0X0,5-0,б со старением укорачиваются до размеров «акков 0,5-0,8X0,5-0,6ti. Штамм грамвариабилен, когйки в ооновно м грам.положительные гетеротроф, фасКультатявный аэроб, оптимальная температура роста 28-30° С. Хорошо растет на естественных средах: мясо-пептонных, картофельных, сусле, на средах с пштолоМ, отдельными амийокислотами, мочевииой. Коломи« белого ц(вета ииогда с кремовьгм оттенком, выпуклые, матовые, гладкие или слегка складчатые, большей частью с ровным краем.

На мясо-пептон}1ом бульоне образует обильную муть и слизрлстый осадок «а дне. На си}1тетических средах с глюкозой и фосфорнокислым Д1вуза1меш,енным аммоние-м растет хорошо; колонии белого цвета, мелкие, блестящие, гладкие, с розным краем. Моло1ко подщелачивает, пептоннзирует без коагуляции на 4-ые сутки. Желатину не разжижает, но образует плотную пленку па поверхности. Использует глюкозу, галактозу, сахарозу, дульцит, инозит, сорбит, уксусную, Я|блочную, фумаровую, янтарную и ли-моиную кислоты без выделения СО2. С вы(делен,ием углекислоты использует маннозу, фруктозу, арабинозу, раффинозу и маннит. Не ассимилирует .ксилозу, крахмал и целлюлозу. Хорошо использует аммонийный минеральный азот, ам,и)шкислоты, в том числе серусодержащ;ие: цистин и цистеи;, мочеви.ну и пептон, хуже использует иитраты; образует ацетилхолИНэстеразу и уреазу, активность ацетилхолинэстеразы после двух сутОК культивироеания на синтетичеокой среде с глюкозой составляет 60 ед.

Пример. Пре.дложенный штамл выращивают на среде следующего состава (в O/Q) :

К2НРО4-0,1; КН,РО4-0,01; (NH4).HPO4- 0,2; MgS04-0,03; СаСЬ-0,01; NaCl-0,01; MnSO4 и FeSO4-следы, дрожжевой экстракт 0,01, глюкоза- 1,0; в качестве иидуглтора добавляют ацетилхолин - 0,01Vo, рН - 7,0.

Ферментацию -ведут 48 час в аэробиых условиях на качалке при 180 об/мин при 30° С. Инокулядию Проводят .водйой суспензией «лефок одио-двухсуточной ;культуры, выращенлой на скошенном мясонпептоииом агаре. Посевной .материал вносят т расчета 50 мг на 50 мл питателыной среды. При таком pemiHiMe культивйрсщашия получают до 350-400 мг биомассы со 10D мл среды. Для извлечения ацегилхолиИЭстеразы отценТ|рифугиро ва«1ную ,и промытую 2 раза 1/15 ж фосфатным буфером рН-7,2, биомассу разрушают на ультраSByKOBOiM дезиитеграторе «MSE при 9 мгц 7 мин. Разрушенную биомассу отделяют центрифуГироваиием при 30000 об/мин 3 мин.

1 мг белка полученной еадосадочиой жидкости разлагает 0,7/М ацетилхолина за 20 мин или 2,1.М за 1 час.

П р е д iM е т .изобретения

Шта:мм Arthrobacter simplex ИНМИ-6 лродуцент ацетилхолинэстеразы, отличающийся тем, что бесспоровые неподвижные палочки раэмеро.м 2,0-4,0X0,5-0,, со старением уасорачиваются до кокков 0,5-0,8X0,5-0,6и, грамвариабилвн, кокк-и в осиовнОМ грамположительные гетеротроф, факультативный аэроб, опиималыная тем пература роста 28-

30° С; хорошо растет на естественных средах: мясо-пе1птонны.х, Картофельных, сусле; «а средах с пептоном, отдельными аминокислотами, мочевиной; колонии бе.тсго цвета, иногда с кремовым оттенком, выпуклые, -матовые,

гладкие «ли слепка складчатые, большей частью с ровным краем; на мясо-пептс;Н«ом бульоне образует обильную муть и слизистый осадОК на дне; на синтетичеаких средах с глЮКозОЙ и фосфорло;кислым двуза м€Ш,

аммонием растет хорошо; «олонии белого цвета, мелкие, блестящне, гладкие с ровиым краем; молоко подщелачивает, пелтоннзирует без коатуляции на 4-ые сутки; желатину не разжижает, но образует плотную плен.ку на

поверхности. Использует глю1козу, галактозу, сахарозу, дульцит, инозит, сорбит, уксусную, яблочную, фумарс вую, янтарную и лимонную кислоты без выделения COz, с выделением утлакислоты использует маннозу, фруктозу,

арабинозу, раффинозу и маннит; не ассимилнрует «силозу, крахмал, целлюлозу, хорошо использует аммонийный минеральный азот, аминокислоты, в том числе серусодержащие: цисти н и цистеин, мочевнн}, пептон, хуже использует нитраты; образует ацетилхолинзстеразу и уреа.зу, активность анетилхолинэстеразы 1посл е Д1вух суток культивирования на си.нтетической среде с глю1козой составляет 60 ед.