СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СЛОЖНЫХ ЭФИРОВ НУКЛЕОЗИДДИФОСФАТА Советский патент 1973 года по МПК C07H19/10 C07H19/207 

1

Изобретение относится к способу получения соединений, которые могут найти применение в фармацевтической промышленности.

Известен способ получения сложных эфиров нуклеозиддифосфата путем взаимодействия нуклеозидфосфата с эфиром фосфорной кислоты в нрисутствии дициклогексилкарбодиимида в пиридине или формамиде как растворителе.

Однако этот способ характеризуется большой иродолжительностыо реакции (7 дней), многочисленными побочными продуктами и неудовлетворительным выходом (менее 45%).

Предлагаемый способ заключается в том, что метапольный растиор пуклеозидмонофосфорной кислоты и дициклогексилкарбодиимида, содержащий агент растворения, подвергают взаимодействию путем медленного добавления, например по каплям, кнслого метанольного раствора эфира фосфорной кислоты с последующим выделением целевого -продукта известпь м способом. Реакцию обычно проводят при температуре от О до , преимущественно при комнатной температуре, в течение

нескольких часов с выходом до 90% и выше. В качестве нуклеозидмонофосфорной кислоты используют, как природные, так и синтетические нуклеозиды. В качестве второй компоненты применяется эфир фосфорной кислоты. При этом фосфорная кислота лгожет быть этерифицирована при помощи какого-нибудь соответствующего, содержащего гндроксильные группы органического соединения; предполагается, что этот эфир фосфорной кислоты достаточно растворим в примененном согласно изобретению растворителе. Примерами органических соединений, которые могут ирименяться в форме их эфиров фосфориой кислоты, являются одно- и многоатомные спирты и аминоснирты, например, этаноламин, холин, сахар, например глюкоза, мапноза, галактоза, рибоза, глицериновый альдегид, а также соответствующие кетозы и аминосахар. Предпочтительными эфирами фосфорной кислоты являются холинфосфат, этаноламинфосфориая кислота, глюкоза 1-фосфат, глюкоза-6-фосфат, галактоза-1-фосфат и манноза-1-фосфат, глюкозамин-1-фосфат, галактозамин-1-фосфат и

другие, маннозамин-1-фосфат н соответствующие N-ацетилсоединения.

В качестве растворителя применяется метанол. Метанол может частично заменяться алканолами с четырьмя атомами углерода или низшими диалкилкетонами с тремя углеродными атомами на одну алкильную цень или диметилформамидом. Однако выход в результате этого ухудшается. Особенно хорошие результаты получают в присутствии растворителя. Соответствуюш;ими растворителями являются, например, пиперидин, циклогексиламин и анилин, а таклсе преимущественно морфолнн. Метанольный раствор эфира фосфорной кислоты обычно должен иметь рН от 1,0 до 6,5, предпочтительно от 4,0 до 5,0. В качестве кислоты для регулирования величины рН в требуемой области могут использоваться как неорганические, так н органические кислоты, которые растворимы в примененном растворителе. Предночитают галогеноводородные кислоты, особенно хлористоводородную кислоту. Вследствие того, что при способе изобретения допустимо применение воды, могут применяться кислоты в виде водного раствора, например концентрированная соляная кислота. Подходящими кислотами являются такие, которые не ведут к осаждению компонеиты реакции или дают с носледней необратимую реакцию (например, серная кислота, азотная кислота). Эфиры фосфорной кислоты могут применяться в форме их солей, например, щелочных и щелочно-земельных металлов, предпочтительно солей кальция. Предполагается, что ионы кальция ири этом способствуют растворению. Однако оказались пригодными также соли натрия, калия, лития, стронция, магния и бария и соли органических аминов. Могут применяться таклсе смешанные соли кальция, например смешанные соли с галогеноводородными кислотами, как, например, хлористый холиифосфаткальций.

Пример 1. 10 г уридин-5-монофосфата (У-5-МФ) в виде свободной кислоты {около 30 ммоль) растворяют в 500 мл чистого метанола, добавляют 7,5 мл морфолина и нагревают, после добавления 10 г дициклогексилкарбодиимида до 50°С. К этому раствору медленно добавляют по каплям 90 ммоль глюкоза-1-фосфата в виде соли морфолина, растворенной в 500 мл метанола с рН 4,0. Через 12- 15 час. реакции при 50°С добавляют ири хорошем перемешивании 500 мл изопропанола, осажденный осадок отделяют центрифугированием, растворяют в 250 мл воды, нейтрализуют, подают на колонну 1МАС-А-17 (объемом 500 мл, в форме формиата) и вымывают с линейным градиентом О-0,5 н. формиата аммония с рН 4. Фракции с УДФ-глюкозой, которые поступают с колонны при содержании 0,4 н. формиата аммония, сразу обессоливают на колонне с углем объемом 2 л. Вымывание угля производят смесью изоиропаиола : НаО : : едкого натра 50 : 50 ; 0,5. Элюаты доводят при помощи натриевой щелочи до величины

рН 7,2, раствор концентрируют в вакууме и натриевую соль УДФ-глюкозы осаждают 10-кратным объемом метанола.

Выход: 8,5-9 г (около 50% теории, в пересчете на исходный ).

Аналогично получают соответствующую УДФ-галактозу при помощи галактозь - -фосфата, соли морфолина. Пример 2. 15 г галактозы-1-фосфата, соли

морфолина, растворяют в 500 мл метанола, и добавлением концентрированной соляной кислоты величину рН раствора доводят до 4. Этот раствор медленно добавляют по каплям к 200 мл метанольного раствора с температурой 50°С, который содержит 5 г аденозин-5монофосфата (А-5-МФ) в виде свободной кислоты, 3,5 мл морфолина и 5 г дициклогексилкарбодиимида. После 15 час. реакции при 50°С, при величине рН 4-4,5 добавляют при

хорошем перемешивании 250 мл изопроианола. Осажденный осадок отделяют центрифугированием, растворяют в 200 мл дистиллированной воды, устанавливают величину рН и, наконец, поглощают на колонне с аиионообменной смолой (объем 500 мл, тип Дауэкс 1 X 2, в форме формиата). Продукт элюируют 0,7 н. раствором формиата натрия и обрабатывают дальше углем, как в примере 1.

Выход АДФ-галактозы, соли натрия, составляет 4,5 г (около 50% теории в пересчете на введенный А-5-МФ).

Пример 3. 14,5 г. этаноламинофосфорной кислоты (около 100 ммоль) и 15 г хлористого кальция (СаС12-2П2О) растворяют в 55 мл

дистиллированной воды, подкисляют приблизительно 5 мл концентрированной соляной кислоты и объем доводят метанолом до 500 мл. Полученный раствор медленно добавляют по каплям к горячему раствору метанола

(250 мл), с температурой 50°С, который содержит 11 г цитидин-5-монофосфата (Ц-5-МФ) в виде свободной кислоты, 8 мл морфолина и И г дициклогексилкарбодиимида. Приблизительно через 15 час. реакции при 50°С добавляют 300 мл изопропанола, осадок отфильтровывают, растворяют в воде, нейтрализуют и хроматографируют на колонне с анионообменной смолой (типа Дауэкс 1 X 2, в форме формиата, 50-100 меш, объем 1000 мл). После

предварительной промывки при помощи 0,02 н. муравьиной кислоты, элюируют ЦДФ-этаноламин. Полученную фракцию концентрируют, нейтрализуют едким натром и, наконец, кристаллизуют добавлением этанола. Кристаллы

промывают этанолом и сушат.

Выход: около 12 г (70% теории в пересчете на введенный Ц-5-МФ).

Пример 4. 2 г цитидинфосфорной кислоты растворяют в 100 мл чистого метанола,

добавив 1,5 мл морфолина, и, после добавления 2 г дициклогексилкарбодиимида, нагревают приблизительно до 50°С. К полученному раствору медленно добавляют по каплям раствор из 5 г холинфосфата - хлористого

кальция в 175 мл метанола, который содержит 2,0 мл 36%-ной соляной кислоты. Через 12-15 час. реакции при 50°С добавляют при хорошем перемешивании 250 мл изопропанола. Осажденный осадок отделяют центрифугированием, растворяют в 200 мл дистиллированной воды и в виде формиата подают на хроматографическую колонну с 250 мл анионообменной смолы Дауэкс 1 X 2. Колонну промывают 500 мл дистиллированной воды и элюируют посредством 0,05 н. муравьиной кислоты. Содержащие цитидиндифосфатхолин фракции концентрируют досуха, растворяют в небольшом количестве воды, нейтрализуют натриевой ш,елочью и кристаллизуют добавкой этанола.

Выход; 3,2 г цитидипдифосфатхолина -Na 4Н2О (90% теории).

Пример 5. 5 г гуанидин-5-.юпофосфата в виде свободной кислоты, растворяют в 100 мл дистиллированной НчО и 5 мл морфолипа и концентрируют приблизительио до 15 мл. К маслянистому коицентрату добавляют 100 мл метанола, 2 мл морфолина и 8 г дициклогексилкарбодиимида. При слабом перемешивании в реакциониую смесь медленно добавляют по каплям при 50-55°С раствор из 15 г глюкозы-1-фосфата, соли морфолина, в 500 мл метанола при рН 4,0. По окончании добавления раствора величину рН устанавливают при помош,и концентрированной НС1 до 4,5. Через 10-15 час. при рН 4,5 реакция заканчивается. Реакционный раствор концентрируют в вакууме приблизительно до 200 мл, и полученную гуанозиндифосфат-глюкозу

осаждают добавлением 400 мл изопропанола. Осадок растворяют в НоО, нейтрализуют и очишают, как онисано в примере 1, на колонне 1МАС-А-17, угольную кислоту обессоливаЕОТ п осаждают метанолом.

Выход: 3,5 г (40% теории) ГДФ-глюкозы Nag.

Предмет изобретения

1.Способ получения сложных эфиров нуклеозиддифосфата реакцией нуклеозидфосфата с эфиром фосфорной кнслоты в присутствии дпцнклогекснлкарбодиимида с последующим выделением нелевого продукта известным способом, от л и ч а ю шл и с Я тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта н упрош.ения процесса, метанольный раствор нуклеозидмонофосфорной кнслоты и дицнклогексилкарбодннмида, содержа ищи агент растворе П я, медленно добавляют к кислому метанольному раствору эфира фосфорной кислоты, нмеющему величину рН от 1 до 6,5.

2.Способ по п. 1, отличающийся тем, что реакцию проводят при температуре от О до80°С.

3.Способ по п. 1, о т л и ч а ю Ц и и с я те,г, что в качестве агента растворения используют морфолин.

4.Способ по п. 1, от л и ч а ю nui и ся тем, что эфир фосфорной кислоты вводят в реакцию в виде соли щелочного или щелочноземельного металла, например соли кальция.