Субстрат для определения активности моноаминоксидазы Советский патент 1975 года по МПК C07G7/02 

Изобретение относится к медицине и предназначено для диагностики и контроля лечения психических больных. Известно применение п-нитрофенилэтиламина в качестве субстрата для определения активности моноаминоксидазы. Целью изобретения является применение п-оксифениламиноуксусной кислоты в качестве субстрата для определения активности моноаминоксидазы в биологических средах. В качестве субстрата для определения активности моноаминоксидазы в биологических средах используют п-оксифенилглицин, структурная формула которого O)NH-CH,- соон Молекулярный вес 167,16583 у. е. Вещество имеет вид порошка светло-серого цвета, хорошо растворимого в воде. В водном растворе обладает собственной интенсивной флюоресценцией, пропорциональной его концентрации Б растворе, с длиной волны возбуждения 318 ммк и длиной волны испускания 380 ммк. п-оксифенилглицин используют в качестве субстрата для фермента моноаминоксидазы при оптимальном значении рН 8,5, при котором часть молекул этого вещества диссоциирует на фенол и глицин, а аминогруппа атакуется ферментом. В результате ферментативного действия моноаминоксидазы глицин превращается в глиоксиловую кислоту с выделением иона аммония и перекиси водорода, которая разрушается введением в реакционную смесь пероксидазы из хрена. Активность моноаминоксидазы в биологических средах определяют следующим образом. В кварцевую кювету термостатической ячейки спектрофлюориметра последовательно вноОЯТ 2,6 мл «трис буфера рН 8,6; 0,1 мл (0,05 мг) п-оксифепиламиноуксусной кислоты; 0,1 мл (0,04 мг) пероксидазы из хрепа и 0,2 мл плазмы крови (или суспензии митохондрий или гомогената исследуемой ткани). Температура смеси должна поддерживаться на уровне 30+0,5°С. При длине волны возбуждения 318 ммк и длине волны испускания 380 ммк самописец регистрирующего прибора спектрофлюориметра выводится на 75 делений щкалы (предварительно производится калибровка шкалы регистрирующего прибора при этих же длинах волн с помощью раствора хинина сульфата 0,01 мкг (мл в 0,1 н H2SO4). Через минуту после перемещивания реакционной смеси включается лентопротяжный механизм регн3-.4

Стрирующего прибора на пять или большеПредмет изобретения

минут. Спустя апределенное время, отмечается

количество делений, на которое снизилась ин-Применение п-оксифениламиноуксусной кистенсивность флюоресценции п-оксифенилук-лоты в качестве субстрата для определения

сусной кислоты.5активности моноаминоксидазы.

459474