Способ получения защищенного гексапептида последовательности 15-20 в-цепи инсулина человека в виде симметричного дисульфида Советский патент 1975 года по МПК C07K7/06 C07K14/62 

сушат, упаривают до объема 15 мл. К остатку добавляют 2 мл дициклогексиламина, выпавшие кристаллы отфильтровывают, промывают эфиром, сушат. После кристаллизации из этилацетата получают 6,1 г (78%) продукта. Найдеио, %: С 67, 17; Н 8,24.

C48H67N409-H20.

Вычислено, %: С 66,94; Н 7,96.

Получеиную таким образом дициклогексиламмоииевую соль суспендируют в этилацетате и встряхивают с 0,5 н. серной кислотой до полного растворения. Этилацетатный слой отделяют, промывают водой, сушат. После упаривания получают 4,8 г (100%) продукта с т. пл. 157-158°С.

о-Нитрофенилсульфениллейцилтирозиллейцилвалин (П1).

Продукт III получают из продукта И и пнитрофеиилового эфира о-иитрофенилсульфеииллейцииа по методике, аналогичпой предыдуш,ей, и выделяют и идентифицируют в виде его дициклогексиламмониевой соли. Выход 98%; т. пл. 152- 154°С;

-11°С (с 1, ДМФА).

Найдено, %: С 61,6; Н 8,13.

С44Нб8Нб08-2Н20.

Вычислено, %: С 61,31; Н 8,42.

Диметиловый эфир бис-(о-нитрофенилсульфениллейцилтирозиллейцилвалил) -цистин и лбмс-глицина (IV).

1,0 г диметилового эфира дикарбобензоксицистинил-быс-глицина обрабатывают 5 мл 25%-ного раствора бромистого водорода в уксусной кислоте, через 40 мин реакционную смесь разбавляют эфиром, выпавшие кристаллы отфильтровывают, промывают эфиром и растворяют Б 5 мл диметилформамида. К полученному растворупри размешивании добавляют безводный бикарбонат натрия, через 5 мин отфильтровывают, к фильтрату добавляют 3,4 г дициклогексиламмониевой соли продикта III и 1,0 г окснсукцинимида, смесь охлаждают до -15°С и добавляют 0,7 г дициклогексилкарбодиимида. Смесь выдерживают 2 дня при 0°С, отфильтровывают выпавшую дициклогексилмочевину, фильтрат разбавляют 0,5 и. серной кислотой, выпавшие кристаллы отфильтровывают, промывают водой, 5%-ным бикарбонатом натрия, водой.

сушат. После кристаллизации из смеси диметилформамид-вода нолучают 2,26 г (88%) продукта с т. пл. 237-239°С; -50°С (с 1, ДМФА). Найдено, %: С 54,60; Н 6,62.

C76Hio8Ni4O2oS4.

Вычислено, %: С 54, 78; Н 6,53.

Бис- (о-нитрофенилсульфениллейцилтирозиллейцилвалил) -цистинил-быс-глиции (V).

1,4 г продукта IV растворяют в 10 мл метанола, к полученному раствору добавляют 4,6 мл 1,0 н. едкого натра и перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционную смесь отфильтровывают с активированным углем, фильтрат разбавляют 0,5 н. серной кислотой, выпавшие кристаллы отфильтровывают, промывают водой, сушат. Получают 1,0 г (75%) продукта с т. пл. 213- 215°С а °-2ГС (с 1, ДМФА).

Найдено, %: С 54,67; Н 6,40.

C74Hio4Nl4O4S4.

Вычислено, %: С 54,19; Н 6,40.

Аминокислотный состав, г (в скобках даны теоретические величины): цистеин 0,8 (1); тирозин 0,7 (1); валнн 1,2 (1); лейцин 2,2 (2).

Формула изобретения

Снособ получения защищенного гексапептида последовательности 15-20 В-цепи инсулина человека в виде симметричного дисульфида, отличающийся тем, что, с целью усовершенствования процесса, последовательно конденсируют валин с карбобензоксилейцином, дикарбобензокситирозином и о-нитрофенилсульфениллейцином, удаляя защитные группы действием бромистого водорода в уксусной кислоте или каталитическим гидрогенолизом, полученный тетрапептид-о-нитрофеиилсульфениллейцилтирозиллейцилвалин конденсируют карбодиимидным методом с дипептндом1цистинил-быс-глицилдиметиловым эфиром и полученный метиловый эфир гексапептнда подвергают щелочному гидролизу с последующим выделением целевого продукта

известным способом.